本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體是涉及一種磁性固相萃取結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法。

背景技術(shù)：

食品的風(fēng)味對(duì)于消費(fèi)者選擇以及消費(fèi)食品起著非常重要的作用。在食品的生產(chǎn)過(guò)程中，為了提高食品的香氣以及特有的風(fēng)味，往往會(huì)加入天然或人工合成的食用香精來(lái)達(dá)到目的。食用香精香料作為一類食品添加劑，幾乎在所有加工食品中都有重要或特殊的地位。隨著生活水平的不斷提高，人們對(duì)于食品安全的重視日益加深。不僅如此，2009年6月1日起在我國(guó)開(kāi)始實(shí)行的《中華人民共和國(guó)食品安全法》更是將食品安全的重要性上升到一個(gè)新的高度。因而，對(duì)于食品中普遍存在的添加劑包括香精香料的安全性便成為生產(chǎn)者和消費(fèi)者密切關(guān)注的問(wèn)題。2013年6月15日，歐盟發(fā)布(eu)no545/2013號(hào)委員會(huì)條例，修訂了(ec)no1334/2008號(hào)食用香精香料法規(guī)，禁止3-乙?；?2,5-二甲基噻吩(3-acetyl-2,5-dimethylthiophene，fema3527)作為食用香料用于食品。2014年8月14日，中國(guó)香精香料化妝品工業(yè)協(xié)會(huì)根據(jù)現(xiàn)有的安全評(píng)估結(jié)論及協(xié)會(huì)對(duì)國(guó)內(nèi)部分香料香精主要生產(chǎn)企業(yè)“3-乙?；?2,5-二甲基噻吩”生產(chǎn)和使用情況的調(diào)查結(jié)果，發(fā)布了香料香精行業(yè)自律文件-關(guān)于3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的限制要求(香化協(xié)字[2013]62號(hào))，自律文件規(guī)定：自本自律文件發(fā)布之日起，香料生產(chǎn)企業(yè)不得生產(chǎn)用作食品用香料的3-乙?；?2,5-二甲基噻吩；食品用香精生產(chǎn)企業(yè)調(diào)整配方，不得再使用該物質(zhì)。

目前我國(guó)尚無(wú)食品添加劑中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的檢測(cè)方法，也缺乏相關(guān)方面的研究。發(fā)明專利“一種食品添加劑中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的測(cè)定方法”(cn104655753a)，公開(kāi)了內(nèi)標(biāo)法氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定食品添加劑中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，方法用正己烷超聲萃取樣品，萃取液過(guò)濾膜后直接進(jìn)入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定。

本發(fā)明利用脂肪醇、非離子表面活性劑與磁性多壁碳納米管粒子形成磁性固相萃取(mspe)結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩，方法用于基體復(fù)雜的食品及煙草樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的測(cè)定，克服了基體的干擾，同時(shí)對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行了富集，利用脂肪醇與磁性納米材料的協(xié)同萃取，非離子表面活性劑的分散作用，不僅3-乙?；?2,5-二甲基噻吩萃取率高，利用外加磁鐵能快速分離，首次用高效液相色譜檢測(cè)食品及煙草樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩,檢測(cè)靈敏度高達(dá)1μg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于cn104655753a報(bào)道的結(jié)果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種磁性固相萃取結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法。

磁性固相萃取結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法是通過(guò)以下方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

在含有3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的提取液中，加入體積比5倍的去離子水，加入脂肪醇與非離子表面活性劑，渦旋混合，加入制備的磁性多壁碳納米管粒子，渦旋混合，使其均勻分散在溶液中，然后靜置5～20min后，用外磁場(chǎng)收集帶有目標(biāo)物的固相萃取劑，去掉上清液，用洗脫劑洗脫固相萃取劑，收集洗脫液，采用高效液相色譜進(jìn)行含量測(cè)定。

所述的含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的提取液按以下方法得到：對(duì)于固體香精，稱取一定量的香精樣品，加入重量比為1：10-15的丙酮，超聲提取30-45min，氮吹至1-3ml，用去離子水定容至10ml，備用；對(duì)于液體香精，取1-3ml，加入去離子水定容至10ml，備用。

所述的脂肪醇為壬醇、庚醇、辛醇中的任意一種，用量為每10ml樣品液中添加0.1-0.3ml。

所述的非離子表面活性劑為脂肪醇聚氧乙烯醚a(bǔ)eo-9，用量為每10ml樣品液中添加0.2-0.4ml。

所述的磁性多壁碳納米管粒子按以下方法制備得到：稱取1.4gfecl3·6h2o，加入0.4g多壁碳納米管和75ml乙二醇，用玻璃棒攪拌混勻，再加入3.6g醋酸鈉，攪拌溶解，并于室溫下放置30min。將上述混合物轉(zhuǎn)移到潔凈的聚四氟乙烯反應(yīng)釜，置于密閉鋼罐中，于200℃油浴中反應(yīng)16h，自然冷卻至室溫，將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至燒杯中，利用外加磁鐵將其產(chǎn)物分離，分別依次用乙醇和蒸餾水各洗滌3～5次，最終將制備得到的磁性多壁碳納米管粒子在50℃下真空干燥12h，備用。

所述的磁性多壁碳納米管粒子用量為每10ml樣品液中添加2～10mg。

所述的渦旋時(shí)間為2～6min。

所述的洗脫劑為丙酮，洗脫次數(shù)為1～2次，每次洗脫劑的用量為0.5～1.0ml。

所述的高效液相色譜色譜條件為：流動(dòng)相：等度洗脫甲醇-水溶液，甲醇-水的比例為65:35，檢測(cè)波長(zhǎng)為：296nm，柱溫為：25℃，流速：1ml/min。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下顯著優(yōu)點(diǎn):

1、利用脂肪醇、非離子表面活性劑與磁性多壁碳納米管粒子形成磁性固相萃取結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，方法用于基體復(fù)雜的香精樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的測(cè)定，克服了基體的干擾，同時(shí)對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行了富集。

2、利用脂肪醇與磁性納米材料的協(xié)同萃取，非離子表面活性劑的分散作用，不僅3-乙?；?2,5-二甲基噻吩萃取率高，利用外加磁鐵能快速分離。

3、首次用高效液相色譜檢測(cè)食品及煙草樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩,檢測(cè)靈敏度高達(dá)1μg/kg，操作簡(jiǎn)單、快速，有機(jī)溶劑用量極小、重現(xiàn)性好。

附圖說(shuō)明

圖1為未經(jīng)mspe處理的蘑菇香精樣品色譜圖，其中，a-樣品加標(biāo)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩(100μg/l)；b-樣品；

圖2為mspe處理后的蘑菇香精樣品色譜圖，其中，c-樣品加標(biāo)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩(100μg/l)結(jié)合mspe處理；d-樣品結(jié)合mspe處理。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。

實(shí)施例1：蘑菇香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩(以下用ab代替該物質(zhì))的測(cè)定

(1)磁性多壁碳納米管粒子的合成

稱取1.4gfecl3·6h2o，加入0.4g多壁碳納米管和75ml乙二醇，用玻璃棒攪拌混勻，再加入3.6g醋酸鈉，攪拌溶解，并于室溫下放置30min。將上述混合物轉(zhuǎn)移到潔凈的聚四氟乙烯反應(yīng)釜，置于密閉鋼罐中，于200℃油浴中反應(yīng)16h，自然冷卻至室溫，將反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至燒杯中，利用外加磁鐵將其產(chǎn)物分離，分別依次用乙醇和蒸餾水各洗滌3～5次，最終將制備得到的磁性多壁碳納米管粒子在50℃下真空干燥12h，備用；

(2)樣品制備：取1ml蘑菇香精，加入去離子水定容至10ml，得樣品液；

(3)樣品測(cè)定：在步驟(2)樣品液中加入100μl辛醇、aeo-9350μl組成的混合液，渦旋2min，加入2mg步驟(2)合成的磁性多壁碳納米管粒子，渦旋3min，靜置平衡15min之后，用磁鐵收集固相棄去水相，以1ml丙酮為洗脫劑對(duì)固相洗脫兩次，收集的洗脫液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后用hplc分析，hplc色譜條件為：流動(dòng)相：等度洗脫甲醇-水溶液，甲醇-水的比例為65:35，檢測(cè)波長(zhǎng)為：296nm，柱溫為：25℃，流速：1ml/min。測(cè)得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量33.8μg/g。

實(shí)施例2：核桃香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的測(cè)定

(1)磁性多壁碳納米管粒子的合成方法同實(shí)施例1；

(2)樣品制備：取2ml核桃香精，加入去離子水定容至10ml，得樣品液；

(3)樣品測(cè)定：在步驟(2)樣品液中加入105μl庚醇、aeo-9300μl組成的混合液，渦旋5min；加入5mg步驟(2)合成的磁性多壁碳納米管粒子，渦旋4min，平衡5min之后，用磁鐵收集固相棄去水相，以0.5ml丙酮為洗脫劑對(duì)固相洗脫兩次，收集的洗脫液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后用hplc分析，色譜條件同實(shí)施例1，測(cè)得3-乙?；?2,5-二甲基噻吩含量28.4μg/g。

實(shí)施例3：牛肉香精中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的測(cè)定

(1)磁性多壁碳納米管粒子的合成方法同實(shí)施例1；

(2)樣品制備：稱取2g的牛肉香精，加入20g丙酮，超聲提取30min，氮吹至1ml，用去離子水定容至10ml，備用；

(3)樣品測(cè)定：取10ml廢水樣品中加入200μl壬醇、aeo-9400μl組成的混合液，渦旋3min；加入10mg步驟(2)合成的磁性多壁碳納米管粒子，渦旋5min，平衡10min之后，用磁鐵收集固相棄去水相，以1ml丙酮為洗脫劑對(duì)固相洗脫兩次，收集的洗脫液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后用hplc分析，色譜條件同實(shí)施例1，測(cè)得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量107.3μg/g。

實(shí)施例4：雞肉香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的測(cè)定

(1)磁性多壁碳納米管粒子的合成方法同實(shí)施例1；

(2)樣品制備：稱取2g的雞肉香精，加入30g丙酮，超聲提取45min，氮吹至3ml，用去離子水定容至10ml，備用；

(3)樣品測(cè)定：在步驟(2)樣品液中加入100μl辛醇、200μlaeo-9組成的混合液，渦旋6min；加入8mg步驟(2)合成的磁性多壁碳納米管粒子，渦旋5min，平衡10min之后，用磁鐵收集固相棄去水相，以1ml丙酮為洗脫劑對(duì)固相洗脫兩次，收集的洗脫液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后用hplc分析，色譜條件同實(shí)施例1，測(cè)得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量98.6μg/g。

蘑菇香精樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩檢測(cè)色譜圖見(jiàn)圖1～圖2。圖1為未經(jīng)mspe處理的蘑菇香精樣品色譜圖，其中，a-樣品加標(biāo)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩(100μg/l)；b-樣品；圖2為mspe處理后的蘑菇香精樣品色譜圖，其中，c-樣品加標(biāo)3-乙?；?2,5-二甲基噻吩(100μg/l)結(jié)合mspe處理；d-樣品結(jié)合mspe處理。

由圖1～圖2可見(jiàn)，經(jīng)本發(fā)明處理后的樣品靈敏度得到很大提高，同時(shí)樣品得到了很好的凈化。