利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方法，他達(dá)拉非合成中間體含有(1R，3R)-1-(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氫-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯鹽酸鹽(式3所示化合物)和(1R，3R)-2-氯乙?；?1-(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-2，3，4，9-四氫-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯(式5所示化合物)，高效液相色譜：采用辛烷基鍵合硅膠柱為色譜柱；采用乙腈作為流動(dòng)相A；采用重量百分比為0.1％的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B，其中，進(jìn)樣流速為0.90～1.10ml/min。該方法可以很好的分離式3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu)體，并且靈敏度高，專屬性強(qiáng)，從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)他達(dá)拉非的合成過程中的合成中間體進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控。
【專利說明】
利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種利用高效液相色譜分 析他達(dá)拉非合成中間體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 他達(dá)拉非是環(huán)磷酸鳥苷（cGMP)特異性磷酸二酯酶5 (PDE5)的選擇性可逆抑制劑， 臨床用于治療男性勃起功能障礙和肺動(dòng)脈高血壓。他達(dá)拉非是采用D-色氨酸甲酯鹽酸鹽 (式1所示化合物）和胡椒醛（式2所示化合物）作為起始原料反應(yīng)制備得到的。然而為 了提高他達(dá)拉非原料藥的質(zhì)量和產(chǎn)率，需要在他達(dá)拉非的合成過程中嚴(yán)格監(jiān)控每一步合成 中間體的純度，以便使他達(dá)拉非終產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率得到一個(gè)滿意的結(jié)果。其中，兩個(gè)中間 體及其異構(gòu)體分別為（1R，3R) -1- (1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基）-2, 3,4,9-四氫-IH-吡 啶并吲哚-3-羧酸甲酯鹽酸鹽（式3所示化合物）、（1R，3S)-1-(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊 烯-5-基）-2,3,4,9_四氫-IH-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯鹽酸鹽（式4所示化合物，其為式3 所不化合物的異構(gòu)體）、（1R，3R) _2_氣乙醜基卡琳-1- (1，3_苯并二氧雜環(huán)戊稀_5_基）_2， 3,4,9_四氫-IH-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯（式5所示化合物）和（lR，3S)-2-氯乙?；?卡琳-1-(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基）-2, 3,4,9-四氫-IH-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯 (式6所示化合物，其為式5所示化合物的異構(gòu)體）。
[0003]
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中報(bào)道兩個(gè)中間體式3所示化合物、式5所示化合物的檢測方法中采用 苯基柱進(jìn)行測定，然而檢測的結(jié)果式3所示化合物峰型較差、拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重且與其異構(gòu)體 未達(dá)到基線分離。因此，建立一套科學(xué)的分析方法，對(duì)于更有效、更全面的控制產(chǎn)品質(zhì)量，具 有重要的應(yīng)用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決上述技術(shù)問題之一或至少提供一種有用的商 業(yè)選擇。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間 體的方法，該方法可以很好的分離式3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu)體， 并且靈敏度高，專屬性強(qiáng)，從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)他達(dá)拉非的合成過程中的合成中間體進(jìn)行嚴(yán)格 監(jiān)控，進(jìn)而顯著提高他達(dá)拉非終產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率。
[0006] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合 成中間體的方法，所述他達(dá)拉非合成中間體含有（1R，3R)-1_(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊 烯-5-基）-2, 3,4,9-四氫-IH-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯鹽酸鹽（式3所示化合物）和 (1R，3R) _2_氣乙醜基卡琳-1- (1，3_苯并二氧雜環(huán)戊稀_5_基）_2, 3,4,9_四氛-IH-吡啶 并吲哚-3-羧酸甲酯（式5所示化合物），所述高效液相色譜：
[0007] 采用辛烷基鍵合硅膠柱為色譜柱；
[0008] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;以及
[0009] 采用重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B，
[0010] 其中，進(jìn)樣流速為0· 90~I. 10ml/min。 toon]由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方法可 以很好的分離式3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu)體，并且靈敏度高，專屬 性強(qiáng)，從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)他達(dá)拉非的合成過程中的合成中間體進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控，進(jìn)而顯著提高 他達(dá)拉非終產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率。
[0012] 另外，根據(jù)本發(fā)明上述實(shí)施例的利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方 法還可以具有如下附加的技術(shù)特征：
[0013] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，檢測波長為282~286nm。由此，可以顯著提高檢測靈 敏度。
[0014] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述色譜柱的柱溫為35~42攝氏度。由此，可以進(jìn)一 步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的異構(gòu)體的分離效果。
[0015] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述色譜柱的柱溫為40攝氏度。由此，可以進(jìn)一步提 高式3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu)體的分離效果。
[0016] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述色譜柱為Venusil ASB Ti C8色譜柱或ZORBAX SB-C8色譜柱。由此，可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的異構(gòu)體 的分離效果。
[0017] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述高效液相色譜采用辛烷基鍵合硅膠柱為色譜柱， 乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗 脫條件為：

[0019] 其中，柱溫為35~42攝氏度，檢測波長為282~286nm，流速為0.90~I. IOml/ min，進(jìn)樣體積為20 μ L。由此，可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者 的異構(gòu)體的分離效果。
[0020] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述高效液相色譜采用4.6X250mm，5 μπι的Venusil ASB Ti C8色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相Α，重量百分比為0.1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B 講行梯庠洗脫，梯庠洗脫備件為：
[0022] 其中，柱溫為40攝氏度，檢測波長為285nm，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣體積為20 μ L。 由此，可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的異構(gòu)體的分離效果。
[0023] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述高效液相色譜采用4.6X250mm，5 μπι的ZORBAX SB-C8色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相Α，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行 梯度洗脫，梯度洗脫條件為：
Luuzoj 共T，仕Μ73 zW JgK皮，侃測奴 1X73 Z8t>nm，狐巡乃 I. umi/min，進(jìn)樣體積為 20 μ L0 由此，可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物及其二者的異構(gòu)體的分離效果。 [0026] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【附圖說明】
[0027] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中：
[0028] 圖1是式3所示化合物的紫外掃描圖；
[0029] 圖2是式5所示化合物的紫外掃描圖；
[0030] 圖3是采用苯基色譜柱所得的式3所示化合物的HPLC圖譜圖；
[0031] 圖4是采用本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的 方法所得的式3所示化合物的HPLC圖譜圖；
[0032] 圖5是采用本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的 方法所得的式5所示化合物的HPLC圖譜圖；
[0033] 圖6是采用本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的利用高效液相分析他達(dá)拉非合成中間體的方法 所得的式3所示化合物和式5所示化合物及雜質(zhì)的HPLC圖譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面通過參考本發(fā)明的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，需要說明的是，這些實(shí)施例僅 用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。除非特殊說明，在實(shí)施例中所進(jìn)行的操作 均為按照《中華人民共和國藥典》以及本領(lǐng)域中公知的方法進(jìn)行的。
[0035] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提出了一種利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中 間體的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該他達(dá)拉非合成中間體含有（1R，3R)-1-(1，3-苯并二 氧雜環(huán)戊烯-5-基）_2, 3,4,9-四氫-IH-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯鹽酸鹽（式3所示化 合物）和（1R，3R)氣乙醜基卡琳-1 -(1，3-苯并一氧雜環(huán)戊稀-5-基）-2, 3,4,9-四 氫-IH-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯（式5所示化合物）。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該高效液相 色譜可以采用辛烷基鍵合硅膠柱為色譜柱；采用乙腈作為流動(dòng)相A ;以及采用重量百分比 為0. 1%的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B，其中，進(jìn)樣流速為0. 9~I. 10ml/min。
[0036] 發(fā)明人驚奇的發(fā)現(xiàn)，該方法中通過采用辛烷基鍵合硅膠柱色譜柱可以有效實(shí)現(xiàn)式 3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu)體的分離，并且檢測結(jié)果具有顯著的精密 度、穩(wěn)定性和重復(fù)性，同時(shí)較傳統(tǒng)的采用苯基色譜柱相比，采用本發(fā)明測定方法所得式3所 示化合物的峰形好且沒有拖尾現(xiàn)象，從而可以得到可靠的式3所示化合物和式5所示化合 物檢測數(shù)據(jù)，進(jìn)而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)他達(dá)拉非的合成過程中的合成中間體進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控，進(jìn)而顯 著提高他達(dá)拉非終產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率。
[0037] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方法采用的 檢測波長并不受特別限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行選擇，根據(jù)本發(fā)明的具 體實(shí)施例，可以采用的檢測波長為282~286nm。發(fā)明人通過大量實(shí)驗(yàn)意外發(fā)現(xiàn)，該檢測波 長下式3所示化合物與式5所示化合物具有最大吸收，且峰型較好。
[0038] 根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施例，色譜柱的柱溫并不受特別限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行選擇，根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，色譜柱的柱溫可以為35~42攝氏 度。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該溫度下式3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu)體的分離效 果較好，從而提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠性。根據(jù)本發(fā)明的具體 示例，色譜柱的柱溫為40攝氏度。由此，可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物 檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
[0039] 根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施例，色譜柱中填料的粒徑并不受特別限制，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行選擇，根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，色譜柱中填料的粒徑可以為 4~6微米。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該條件下可以顯著提高式3所示化合物、式5所示化合物及其與 二者的異構(gòu)體的分離效果，從而進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可 靠性。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，色譜柱中填料的粒徑可以為5微米。由此，可以進(jìn)一步提高 式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
[0040] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，辛烷基鍵合硅膠柱的具體類型并不受特別限制，本領(lǐng)域 技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行選擇，根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施例，辛烷基鍵合硅膠柱為 Venusil ASB Ti C8色譜柱或ZORBAX SB-C8色譜柱。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，選擇Venusil ASB Ti C8 色譜柱或ZORBAX SB-C8色譜柱較其他色譜柱可以顯著提高式3所示化合物、式5所示化合 物及其與二者的異構(gòu)體的分離效果，從而進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測 數(shù)據(jù)的可靠性。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體（式 3所示化合物或式5所示化合物）的方法可以采用以下步驟：
[0042] (1)將乙腈與水按照體積比為1:1制成乙腈水溶液（以下簡稱乙腈水溶液），取式 3所示化合物（或式5所示化合物）適量，用乙腈水溶液振搖使溶解，配制成Iml含式3所 示化合物（或式5所示化合物）0. 2mg的供試品溶液；
[0043] (2)色譜條件：采用高效液相色譜法，配備紫外檢測器；采用辛烷基鍵合硅膠柱作 為色譜柱，采用乙腈作為流動(dòng)相A，采用重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相 B，進(jìn)行梯度洗脫，其中，梯度洗脫的條件為：
L0045J 枉溫為35~42懾氏度，粒測汲長為282~286nm，進(jìn)樣沭運(yùn)為0· 90~I. IOml/ min，進(jìn)樣體積為20 μ L。
[0046] (3)取上述式3所示化合物（或式5所示化合物）樣品20 μ L，照上述色譜條件， 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
[0047] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，高效液相色譜采用4. 6X250mm，5ym的Venusil ASB Ti C8 色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫 條件為：
[0048]
[0049] 其中，柱溫為35攝氏度，檢測波長為282nm，流速為0. 90ml/min，進(jìn)樣體積為 20 μ L。由此，該條件下可以顯著提高式3所示化合物、式5所示化合物及其與二者的異構(gòu) 體的分離效果，從而進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
[0050] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，高效液相色譜采用4.6X250mm，5ym的Venusil ASB Ti C8 色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫 條件為：
[0052] 其中，柱溫為40攝氏度，檢測波長為285nm，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣體積為20 μ L。 由此，該條件下可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
[0053] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，高效液相色譜采用4.6X250mm，5ym的Venusil ASB Ti C8 色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫 條件為：
[0055] 其中，柱溫為42攝氏度，檢測波長為286nm，流速為I. 10ml/min，進(jìn)樣體積為 20 μ L。由此，該條件下可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠 性。
[0056] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，高效液相色譜采用4. 6 X 250mm，5 μ m的ZORBAX SB-C8色譜 柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫， 梯度洗脫條件為：
[0058] 其中，柱溫為35攝氏度，檢測波長為282nm，流速為0. 90ml/min，進(jìn)樣體積為 20 μ L。由此，該條件下可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠 性。
[0059] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，高效液相色譜采用4. 6 X 250mm，5 μ m的ZORBAX SB-C8色譜 柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫， 梯度洗脫條件為：
[0061] 其中，柱溫為40攝氏度，檢測波長為285nm，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣體積為20 μ L。 由此，該條件下可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠性。
[0062] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，高效液相色譜采用4. 6 X 250mm，5 μ m的ZORBAX SB-C8色譜 柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫， 梯度洗脫條件為：
[0064]
[0065] 其中，柱溫為42攝氏度，檢測波長為286nm，流速為I. 10ml/min，進(jìn)樣體積為 20 μ L。由此，該條件下可以進(jìn)一步提高式3所示化合物、式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)的可靠 性。
[0066]由此，采用本發(fā)明的分析條件可以有效實(shí)現(xiàn)式3所示化合物、式5所示化合物及 其與二者的異構(gòu)體的分離，并且檢測結(jié)果具有顯著的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性，同時(shí)較傳統(tǒng) 的采用苯基色譜柱相比，采用本發(fā)明測定方法所得式3所示化合物的峰形好且沒有拖尾現(xiàn) 象，從而可以得到可靠的式3所示化合物和式5所示化合物檢測數(shù)據(jù)，進(jìn)而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)他達(dá) 拉非的合成過程中的合成中間體進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控，進(jìn)而顯著提高他達(dá)拉非終產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn) 率。
[0067] 下面參考具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，需要說明的是，這些實(shí)施例僅僅是描述 性的，而不以任何方式限制本發(fā)明。
[0068] 實(shí)驗(yàn)例1 [0069] 檢測波長的確定：
[0070] 將乙腈與水按照體積比為1:1制成乙腈水溶液，然后取式3所示化合物和式5所 示化合物分別與乙腈水溶液混合，得到濃度均為20 μ g/ml的式3所示化合物和式5所示 化合物溶液，然后分別取式3所示化合物溶液和式5所示化合物溶液在紫外-可見分光光 度計(jì)在190~400nm進(jìn)行全掃描，式3所示化合物和式5所示化合物的紫外掃描圖分別見 圖1和圖2所示。由兩圖可知，式3所示化合物和式5所示化合物的最大吸收波長均為 285 ± lnm，故選擇285 ± Inm作為檢測波長。
[0071] 實(shí)驗(yàn)例2
[0072] 色譜條件：
[0073] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：ZORBAX SB-phenyl柱，4. 6 X 250mm，5 μ m ;
[0074] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用重量百分比為0.1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B 進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：1. OmL/min ;檢測波長：285nm ;柱溫：40°C ;進(jìn)樣 體積：20 μ L ;
[0076] 實(shí)驗(yàn)步驟：
[0077] (1)取式3所示化合物適量，用體積比為1 :1的乙腈水溶液溶解，得到含式3所示 化合物的濃度為0. 2mg/ml的溶液作為供試品溶液。
[0078] (2)取上述（1)中得到的供試品溶液20yL，照上述色譜條件，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，式3所示化合物測定的HPCL圖譜如圖3所示。
[0079] 由圖3可知，式3所示化合物的溶液與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式4所示化合物）未達(dá)到 基線分離，且雜質(zhì)峰型對(duì)對(duì)稱性較差。
[0080] 實(shí)驗(yàn)例3
[0081] 色譜條件：
[0082] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：Venusil ASB Ti C8,4.6X250mm，5ym;
[0083] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用0. 1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度 洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：1. OmL/min ;檢測波長：285nm ;柱溫：40°C ;進(jìn)樣體積： 20 u I, !
[0085] 實(shí)驗(yàn)步驟：
[0086] (1)取式3所示化合物適量，用體積比為1 :1乙腈水溶液溶解，得到含式3所示化 合物的濃度為〇. 2mg/ml的溶液作為供試品溶液。
[0087] (2)取上述（1)中得到的供試品溶液20yL，照上述色譜條件，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，式3所示化合物測定的HPCL圖譜如圖4所示。
[0088] 由圖4可知，與圖3相比，式3所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式4 所示化合物）可以達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0089] 實(shí)驗(yàn)例4
[0090] 色譜條件：同實(shí)驗(yàn)例3 ;
[0091] 實(shí)驗(yàn)步驟：
[0092] (1)取式5所示化合物適量，用體積比為1 :1乙腈水溶液溶解，得到含式5所示化 合物的濃度為〇. 2mg/ml的溶液作為供試品溶液。
[0093] (2)取上述（1)中得到的供試品溶液20yL，照上述色譜條件，注入高效液相色譜 儀，記錄色譜圖，式5所示化合物測定的HPCL圖譜如圖5所示。
[0094] 由圖5可知，式5所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式6所示化合物） 可以達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0095] 實(shí)驗(yàn)例5
[0096] 色譜條件：
[0097] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：ZORBAX SB-C8,4. 6 X 250mm，5 μ m ;
[0098] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用重量百分比為0.1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B 進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：1. OmL/min ;檢測波長：285nm ;柱溫：40°C ;進(jìn)樣 體積：20 μ L ;
[0100] 實(shí)驗(yàn)步驟：同實(shí)施例3 ;
[0101] 結(jié)果：式3所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式4所示化合物）可以 達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0102] 實(shí)驗(yàn)例6
[0103] 色譜條件：同實(shí)施例5 ;
[0104] 實(shí)驗(yàn)步驟：同實(shí)施例4 ;
[0105] 結(jié)果：式5所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式6所示化合物）可以 達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0106] 實(shí)驗(yàn)例7
[0107] 色譜條件：
[0108] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：Venusil ASB Ti C8,4.6X250mm，5ym;
[0109] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B 進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：〇. 90mL/min ;檢測波長：282nm ;柱溫：35°C ;進(jìn) 樣體積：20 μ L ;
[0111] 實(shí)驗(yàn)步驟：同實(shí)施例3
[0112] 結(jié)果：式3所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式4所示化合物）可以 達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0113] 實(shí)驗(yàn)例8
[0114] 色譜條件：
[0115] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：ZORBAX SB-C8,4. 6X250mm，5 μπι;
[0116] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用重量百分比為0.1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B 進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：1. 10mL/min ;檢測波長：286nm ;柱溫：42°C ;進(jìn) 樣體積：20 μ L ;
[0118] 實(shí)驗(yàn)步驟：同實(shí)施例3
[0119] 結(jié)果：式3所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式4所示化合物）可以 達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0120] 實(shí)驗(yàn)例9
[0121] 色譜條件：
[0122] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：ZORBAX SB-C8,4. 6X250mm，5 μπι;
[0123] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用重量百分比為0.1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B 進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：〇. 90mL/min ;檢測波長：282nm ;柱溫：35°C ;進(jìn) 樣體積：20 μ L ; LOl 2b」 頭脫步驟：冋頭她例4
[0126] 結(jié)果：式5所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式6所示化合物）可以 達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0127] 實(shí)驗(yàn)例10
[0128] 色譜條件：
[0129] 高效液相色譜儀，紫外檢測器，色譜柱：Venusil ASB Ti C8,4. 6X250mm，5 μπι;
[0130] 采用乙腈作為流動(dòng)相A ;采用0.1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度 洗脫，梯度洗脫條件如下表；流速：1. lOmL/min ;檢測波長：286nm ;柱溫：42°C ;進(jìn)樣體積： 20 μ L ；
[0132] 實(shí)驗(yàn)步驟：同實(shí)施例4
[0133] 結(jié)果：式5所示化合物的色譜峰中主峰與其異構(gòu)體雜質(zhì)（式6所示化合物）可以 達(dá)到良好的分離，且峰型好。
[0134] 實(shí)驗(yàn)例11
[0135] 色譜條件：同實(shí)驗(yàn)例3 ;
[0136] 實(shí)驗(yàn)步驟：
[0137] 將乙腈與水按照體積比為1:1制成乙腈水溶液，分別取式3所示化合物、式5所示 化合物和各雜質(zhì)（分別標(biāo)記為雜質(zhì)1 (式1所示化合物）、雜質(zhì)2 (式2所示化合物）、雜質(zhì) 3 (式4所示化合物）、雜質(zhì)4 (式6所示化合物）對(duì)照品適量，然后依次加入乙腈水溶液制 成分別含式3所示化合物、式5所示化合物和各雜質(zhì)2 μ g/ml的混合溶液作為供試品溶液， 然后將供試品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，樣品溶液HPCL圖譜如圖6所示。
[0138] 由圖6可知，該色譜圖中式3所示化合物、式5所示化合物主峰與各雜質(zhì)分離度均 大于1. 5,表明本發(fā)明的方法能夠有效將式3所示化合物、式5所示化合物和各雜質(zhì)分離。
[0139] 在本說明書的描述中，參考術(shù)語"一個(gè)實(shí)施例"、"一些實(shí)施例"、"示例"、"具體示 例"、或"一些示例"等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特 點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對(duì)上述術(shù)語的示意性表述不 一定指的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任何 的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。
[0140] 盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例 性的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨 的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用高效液相色譜分析他達(dá)拉非合成中間體的方法，所述他達(dá)拉非合成中間體 含有（1R，3R) -1- (1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-5-基）-2, 3,4,9-四氫-1H-吡啶并吲哚-3-羧 酸甲酯鹽酸鹽和（1R，3R) _2_氣乙醜基卡琳-1- (1，3_苯并二氧雜環(huán)戊稀_5_基）_2, 3,4， 9-四氫-1H-吡啶并吲哚-3-羧酸甲酯，其特征在于，所述高效液相色譜： 采用辛烷基鍵合硅膠柱為色譜柱； 米用乙臆作為流動(dòng)相A ;以及 采用重量百分比為〇. 1 %的三氟乙酸水溶液作為流動(dòng)相B， 其中，進(jìn)樣流速為〇. 90~1. 10ml/min。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，檢測波長為282~286nm。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱的柱溫為35~42攝氏度。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述色譜柱的柱溫為40攝氏度。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述辛烷基鍵合硅膠柱為Venusil ASB Ti C8色譜柱或ZORBAX SB-C8色譜柱。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜采用辛烷基 鍵合硅膠柱為色譜柱，乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相B 進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為： 時(shí)間（min) |流動(dòng)相A(V% ) |流動(dòng)相B(V% ) 0 25 ~35 75 ~65 10 25 ~35 75 ~65 13 45 ~55 55 ~45 30 60 ~70 40 ~30 其中，柱溫為35~42攝氏度，檢測波長為282~286nm，流速為0. 90~1. 10ml/min， 進(jìn)樣體積為20 μ L。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜采用4. 6 X 250mm，5 μ m 的Venusil ASB Ti C8色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0.1 %的三氟乙酸水溶 液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為： 時(shí)間（min) |流動(dòng)相A(V% ) |流動(dòng)相B(V% ) 0 30 70 10 30 70 13 50 50 30 65 35 其中，柱溫為40攝氏度，檢測波長為285nm，流速為1. 0ml/min，進(jìn)樣體積為20 yL。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜采用4. 6 X 250mm，5 μ m 的ZORBAX SB-C8色譜柱，采用乙腈為流動(dòng)相A，重量百分比為0. 1 %的三氟乙酸水溶液為流 動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為： 時(shí)間（min) |流動(dòng)相A(V% ) |流動(dòng)相B(V% ) 0 30 70 10 30 70 ?3 50 50 30 65 35 其中，柱溫為40攝氏度，檢測波長為285nm，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣體積為20 μL。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105842350SQ201510245394
【公開日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2015年5月14日
【發(fā)明人】王學(xué)海, 史芳, 楊仲文, 許勇, 李莉娥, 周麗, 夏慶豐, 余艷平, 黃璐, 田華, 何珩, 肖強(qiáng), 于靜, 楊菁, 張毅, 唐靜, 周文
【申請(qǐng)人】湖北生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院有限公司