本發(fā)明涉及分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種同時(shí)檢測脂肪酰中性氨基酸表面活性劑中脂肪酸與活性物含量的方法。

背景技術(shù)：

市場上應(yīng)用最為廣泛的氨基酸類表面活性劑主要為陰離子類。它十分溫和，且發(fā)泡能力優(yōu)越，廣泛應(yīng)用于香波、浴液、洗面奶等個(gè)人護(hù)理用品領(lǐng)域?？蛇m用于敏感型皮膚，使用后皮膚感覺柔軟舒適。

目前工業(yè)上采用肖頓-鮑曼(Schotten-Baunmann)縮合法生產(chǎn)氨基酸類表面活性劑，盡管該法的轉(zhuǎn)化率極高，產(chǎn)品中仍不可避免存有一定量的脂肪酸。脂肪酸與活性物的含量直接決定了產(chǎn)品在配方中的綜合性能表現(xiàn)，因此監(jiān)控氨基酸類表面活性劑產(chǎn)品中的脂肪酸與活性物的分別含量至關(guān)重要。

氨基酸表面活性劑中的脂肪酸檢測，衍生化GC為主要分析方法，其在靈敏度方面具有較高優(yōu)勢(shì)。但是在測定沸點(diǎn)高、相對(duì)分子質(zhì)量大、不易揮發(fā)的脂肪酸組分時(shí)存在很大局限性。氨基酸表面活性劑中的活性物檢測沒有權(quán)威的方法，主要是通過核磁法或定氮法估算得到，較為粗糙。同時(shí)測定氨基酸表面活性劑中的脂肪酸與活性物的分別含量，必然存在難度大、耗時(shí)長、準(zhǔn)確度較差等問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明的目的是提供一種同時(shí)檢測脂肪酰中性氨基酸表面活性劑中脂肪酸與活性物含量的方法。

具體的技術(shù)方案如下：

一種同時(shí)檢測脂肪酰中性氨基酸表面活性劑中脂肪酸與活性物含量的方法，包括如下步驟：

(1)配制脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

配制不同濃度的脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中溶劑為丙酮，溶質(zhì)包括辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸；

(2)配制活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液

(3)制備待測溶液

準(zhǔn)確稱取氨基酸類表面活性劑于容量瓶中，加入體積濃度為80-85％的丙酮水溶液，然后加入無機(jī)酸，定容，得預(yù)處理液；

將所述預(yù)處理液經(jīng)C18柱吸附，然后用體積濃度為18-22％的乙腈水溶液洗滌，再真空抽干乙腈水溶液；

用丙酮洗脫吸附后的所述C18柱，收集洗脫液，得所述待測溶液；

(4)衍生化

準(zhǔn)確移取所述脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液或所述待測溶液于碘量瓶中，加入衍生化試劑溶液和催化劑溶液，于88-92℃下回流20-40min，再加入乙酸溶液繼續(xù)回流20-40min，冷卻后用氮?dú)獯蹈?，用丙酮定容，得?biāo)準(zhǔn)溶液衍生化樣品或待測溶液衍生化樣品；

(5)測定

精確吸取所述標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生化樣品，采用HPLC進(jìn)行測定，根據(jù)檢測結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

精確吸取所述活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生化樣品，采用HPLC進(jìn)行測定，根據(jù)檢測結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

精確吸取所述待測溶液衍生化樣品，采用HPLC進(jìn)行測定，根據(jù)檢測結(jié)果以及所述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的脂肪酸殘留。

在其中一些實(shí)施例中，所述HPLC的色譜條件如下：

色譜柱：C18柱；柱溫25-35℃；檢測波長244±5nm；

流動(dòng)相A：體積比為0.1％的甲酸水溶液；

流動(dòng)相B：體積比為55:45的甲醇/乙腈混合溶液，其中還含有占混合溶液體積比為0.05％的甲酸；

梯度洗脫程序：0-15min，流動(dòng)相A的體積百分含量由35±3％減至20±3％；15-20min，流動(dòng)相A的體積百分含量保持20±3％；20-40min，流動(dòng)相A的體積百分含量由20±3％減至0％；40-45min，流動(dòng)相A的體積百分含量保持0％；45-50min，流動(dòng)相A的體積百分含量增至35±3％；流速為0.8-1.2ml/min。

在其中一些實(shí)施例中，所述衍生化試劑溶液的摩爾濃度為0.04-0.06M，其中衍生化試劑選自2-溴代苯乙酮、2,4’-二溴苯乙酮、2-溴-4’-甲氧基苯乙酮或2-溴代苯丙酮，其中溶劑為乙腈；每ml所述標(biāo)準(zhǔn)溶液或每ml所述待測溶液加入2-4ml所述2-溴代苯乙酮溶液。

在其中一些實(shí)施例中，所述催化劑溶液的摩爾濃度為0.4-0.6M，其中催化劑選自三乙胺、吡啶、2,6-二甲基吡啶或4-(二甲氨基)吡啶，每ml所述標(biāo)準(zhǔn)溶液或每ml所述待測溶液加入4-6ml所述催化劑溶液。

在其中一些實(shí)施例中，所述氨基酸類表面活性劑選自：脂肪酰肌氨酸/鹽、脂肪酰甘氨酸/鹽或脂肪酰丙氨酸/鹽(辛酰肌氨酸、辛酰肌氨酸鹽、癸酰肌氨酸、癸酰肌氨酸鹽、月桂酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸鹽、肉豆蔻酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸鹽、軟脂酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸鹽、硬脂酰肌氨酸、硬脂酰肌氨酸鹽、椰油酰肌氨酸、椰油酰肌氨酸鹽、辛酰甘氨酸、辛酰甘氨酸鹽、癸酰甘氨酸、癸酰甘氨酸鹽、月桂酰甘氨酸、月桂酰甘氨酸鹽、肉豆蔻酰甘氨酸、肉豆蔻酰甘氨酸鹽、軟脂酰甘氨酸、軟脂酰甘氨酸鹽、硬脂酰甘氨酸、硬脂酰甘氨酸鹽、椰油酰甘氨酸、椰油酰甘氨酸鹽、辛酰丙氨酸、辛酰丙氨酸鹽、癸酰丙氨酸、癸酰丙氨酸鹽、月桂酰丙氨酸、月桂酰丙氨酸鹽、肉豆蔻酰丙氨酸、肉豆蔻酰丙氨酸鹽、軟脂酰丙氨酸、軟脂酰丙氨酸鹽、硬脂酰丙氨酸、硬脂酰丙氨酸鹽、椰油酰丙氨酸或椰油酰丙氨酸鹽)。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的濃度均分別為5-500mg/L。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)中所述活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液中辛酰氨基酸、癸酰氨基酸、月桂酰氨基酸、肉豆蔻酰氨基酸、軟脂酰氨基酸和硬脂酰氨基酸的濃度均分別為5-500mg/L。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(3)中所述無機(jī)酸選自鹽酸、硫酸、磷酸及硝酸。

在其中一些實(shí)施例中，所述乙酸溶液的摩爾濃度為0.6-0.7M。

本發(fā)明提供了一種成本相對(duì)較低、操作較為簡單的氨基酸表面活性劑中脂肪酸與活性物含量的通用檢測方法。該方法包含酸化、衍生化及HPLC分析等步驟，能夠快速檢測出氨基酸類表面活性劑產(chǎn)品中脂肪酸與活性物的含量。上述檢測方法耗時(shí)較短、操作較為簡單、準(zhǔn)確度高，適用于所有脂肪酰中性氨基酸類表面活性劑產(chǎn)品中脂肪酸與活性物的含量檢測。

上述檢測方法的有益效果：

1、該檢測方法的核心是將脂肪酸及活性物衍生化，從而極大提升紫外響應(yīng)靈敏度；

2、該檢測方法是先將氨基酸類表面活性劑酸化，然后衍生化進(jìn)行HPLC分析，可以一次檢測出脂肪酰中性氨基酸類表面活性劑產(chǎn)品中脂肪酸與活性物的分別含量，準(zhǔn)確度極高。

具體實(shí)施方式

為了便于理解本發(fā)明，下面將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更加透徹全面。

除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術(shù)語只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語“和/或”包括一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的所列項(xiàng)目的任意的和所有的組合。

實(shí)施例1：

本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的一種同時(shí)檢測椰油酰肌氨酸鈉中脂肪酸與活性物含量的方法，包括如下步驟：

(1)試劑配制：

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1：配制分別含500mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2：配制分別含200mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液3：配制分別含100mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液4：配制分別含50mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液5：配制分別含25mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液6：配制分別含10mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液7：配制分別含5mg/L辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸和硬脂酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液1：配制分別含500mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液2：配制分別含200mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液3：配制分別含100mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液4：配制分別含50mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液5：配制分別含25mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液6：配制分別含10mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液7：配制分別含5mg/L辛酰肌氨酸、癸酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸、肉豆蔻酰肌氨酸、軟脂酰肌氨酸和硬脂酰肌氨酸的丙酮溶液；

2-溴代苯乙酮溶液(0.05M)：準(zhǔn)確稱取1.00g(精確到0.01g)于100mL棕色容量瓶中，加入50mL乙腈溶解，用乙腈稀釋至刻度，搖勻；

催化用三乙胺溶液(0.5M)：準(zhǔn)確稱取12.63g三乙胺(精確到0.01g)于250mL棕色容量瓶中，加入150mL乙腈，用乙腈稀釋至刻度，搖勻；

乙酸溶液(0.67M)：準(zhǔn)確稱取10.00g(精確至0.01g)于250mL容量瓶中，加入150mL乙腈，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。

(2)待測溶液的制備：

準(zhǔn)確稱取0.100g(精確至0.001g)椰油酰肌氨酸鈉樣品于25mL容量瓶中，加入20mL 83％(v/v)丙酮水溶液，加入0.5mL鹽酸(1:1)，輕微搖動(dòng)使樣品溶解，再用83％(v/v)丙酮水溶液稀釋至刻度，搖勻，得預(yù)處理液。

準(zhǔn)確移取所述待處理液1.00mL于C18SPE小柱中，待樣品溶液全部流出后，用3mL 20％(v/v)乙腈水溶液洗滌3次，用真空抽干乙腈溶液；

用15mL丙酮分三次洗脫C18SPE小柱，用100mL錐形瓶收集洗脫液，即得所述待測溶液；

(3)衍生化

脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生化：準(zhǔn)確移取脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1-7各1.00mL于100mL碘量瓶中，加入10mL丙酮和10mL乙腈，加入3mL 2-溴代苯乙酮溶液，再移入5mL三乙胺溶液，裝好冷凝管，于90℃恒溫水浴鍋中回流30min，從冷凝管上方加入5mL乙酸溶液，繼續(xù)回流30min，取出冷卻，用10mL丙酮分3次沖洗冷凝管，取出，在55±5℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑ㄈ葜?mL，用0.22μm濾膜過濾，得標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生化樣品，供HPLC測試。

活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生化：準(zhǔn)確移取活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液1-7各1.00mL于100mL碘量瓶中，加入10mL丙酮和10mL乙腈，加入3mL 2-溴代苯乙酮溶液，再移入5mL三乙胺溶液，裝好冷凝管，于90℃恒溫水浴鍋中回流30min，從冷凝管上方加入5mL乙酸溶液，繼續(xù)回流30min，取出冷卻，用10mL丙酮分3次沖洗冷凝管，取出，在55±5℃水浴中用氮?dú)獯蹈?，定容?mL，用0.22μm濾膜過濾，得標(biāo)準(zhǔn)溶液衍生化樣品，供HPLC測試。

待測溶液衍生化：在收集洗脫液的錐形并中加入10mL乙腈、3mL 2-溴代苯乙酮溶液、5mL三乙胺溶液，裝好冷凝管，于90℃恒溫水浴鍋中回流30min，從冷凝管上方加入5mL乙酸溶液，繼續(xù)回流30min，取出冷卻，用10mL丙酮分3次沖洗冷凝管，取出，在55±5℃水浴中用氮?dú)獯蹈?，用乙腈定容?mL，用0.22μm濾膜過濾，得待測溶液衍生化樣品，供HPLC測試。

(4)HPLC測試：按照如下液相色譜條件設(shè)置，使用至少20倍柱體積流動(dòng)相平衡色譜柱，紫外檢測器預(yù)熱至少15min，使液相色譜系統(tǒng)獲得穩(wěn)定的基線后，進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖，由色譜工作站處理數(shù)據(jù)。

色譜柱：Welch Ultimate AQ-C18 4.6×250mm，5μm，或性能相當(dāng)色譜柱；

流動(dòng)相A：體積比為0.1％的甲酸水溶液；

流動(dòng)相B：體積比為55:45的甲醇/乙腈混合溶液，其中還含有占混合溶液體積比為0.05％的甲酸；

梯度程序：

運(yùn)行時(shí)間：50min；

柱溫：30℃；

流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：20μL；

檢測器：檢測波長244nm。

(5)脂肪酸含量計(jì)算：測定脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)檢測結(jié)果繪制脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；通過脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測溶液的檢測結(jié)果計(jì)算樣品中的脂肪酸含量。

(6)活性物含量計(jì)算：測定活性物標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)檢測結(jié)果繪制活性物標(biāo)準(zhǔn)曲線；通過活性物標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測溶液的檢測結(jié)果計(jì)算樣品中的脂肪酸含量。

(7)重復(fù)性驗(yàn)證：對(duì)樣品分別進(jìn)行7次抽樣檢測，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

(8)準(zhǔn)確度驗(yàn)證：用回收率指標(biāo)來檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度。

測得同一批椰油酰肌氨酸鈉中脂肪酸含量重復(fù)性數(shù)據(jù)如下：

測得同一批椰油酰肌氨酸鈉中活性物含量重復(fù)性數(shù)據(jù)如下：

測得同一批椰油酰肌氨酸鈉中脂肪酸含量的加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)如下：

測得同一批椰油酰肌氨酸鈉中活性物含量的加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)如下：

實(shí)施例2：

本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的一種同時(shí)檢測椰油酰甘氨酸鈉中脂肪酸與活性物含量的方法，檢測步驟與實(shí)施例1保持一致，不再贅述。

測得同一批椰油酰甘氨酸鈉中脂肪酸含量重復(fù)性數(shù)據(jù)如下：

測得同一批椰油酰甘氨酸鈉中活性物含量重復(fù)性數(shù)據(jù)如下：

測得同一批椰油酰甘氨酸鈉中脂肪酸含量加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)如下：

測得同一批椰油酰甘氨酸鈉中活性物含量加標(biāo)回收率數(shù)據(jù)如下：

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。