本發(fā)明涉及動(dòng)物體內(nèi)中藥物殘留的理化檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于磁分離一種基于磁分離快速測(cè)定動(dòng)物肌肉組織中磺胺類抗生素殘留量的方法。

背景技術(shù)：
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隨著人民的生活水平的不斷提高，動(dòng)物源性食品的消費(fèi)量越來(lái)越大。為了滿足不斷增長(zhǎng)的消費(fèi)需求，提高動(dòng)物的養(yǎng)殖產(chǎn)出，人們?cè)谄漯B(yǎng)殖過(guò)程中加入很多禁限用藥物，以保證其存活率。養(yǎng)殖過(guò)程中所涉及的藥物會(huì)通過(guò)食物鏈在生物體內(nèi)累積濃縮并最終傳遞到人體，對(duì)人的食用安全帶來(lái)了潛在危害。磺胺類抗生素憑借其廣譜、高效和價(jià)格低的特點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用到水產(chǎn)等各種動(dòng)物的養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中，給動(dòng)物源性食品的食用安全性帶來(lái)了潛在的風(fēng)險(xiǎn)。雖然動(dòng)物體內(nèi)磺胺類抗生素的分析方法有高效液相色譜(HPLC)、高效液相色譜三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)等檢測(cè)方法，但由于動(dòng)物組織樣品的脂肪和蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì)含量高，導(dǎo)致樣品制備方法復(fù)雜：需采用溶劑萃取、固相萃取、氮?dú)獯蹈伞艺魸饪s等多種前處理技術(shù)進(jìn)行純化、富集。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，提供一種基于磁分離一種基于磁分離快速測(cè)定動(dòng)物肌肉組織中磺胺類抗生素殘留量的方法。

為了解決背景技術(shù)所存在的問(wèn)題，本發(fā)明的一種基于磁分離快速 測(cè)定動(dòng)物肌肉組織中磺胺類抗生素殘留量的方法，它的方法為：先將動(dòng)物肌肉樣品經(jīng)酸化乙腈提取，F(xiàn)e₃O₄磁顆粒的快速相分離，上層清液經(jīng)正己烷去除脂肪，用HPLC-MS/MS分析測(cè)定磺胺類化合物含量，具體步驟如下：

(1)、制備：動(dòng)物解剖、肌肉組織勻漿，-20℃冰箱中低溫保存；

(2)、提?。簩?shí)驗(yàn)過(guò)程中，肌肉糜室溫下融解；稱取肌肉糜樣品于具蓋離心試管中，加提取溶液充分浸潤(rùn)，漩渦振蕩，加入Fe₃O₄磁性材料混合物，在外界磁鐵作用下快速相分離；

(3)、凈化：移取1mL樣品提取液上清液于離心管中，氮吹濃縮，加入1mL1‰甲酸溶液溶解殘雜，將溶液轉(zhuǎn)移到含有1mL正己烷的離心管中渦旋振蕩，離心，棄去上層正己烷相，吸取下層清液經(jīng)0.22μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。

作為優(yōu)選，所述的提取溶液由1‰(V/V)甲酸的乙腈組成；所述的Fe₃O₄磁性材料混合物由2g無(wú)水硫酸鎂、0.5g氯化鈉和100mgFe₃O₄磁性顆粒組成。

本發(fā)明的儀器參數(shù)為：液相色譜：帶自動(dòng)進(jìn)樣器，毛細(xì)管電壓3.2kV；殼氣45Arb；輔助氣10Arb；毛細(xì)管溫度350℃；蒸發(fā)溫度200℃；峰寬Q1 0.7Da、Q3 0.7Da，碰撞氣壓力1.5mTorr；反相色譜柱為kromasil C18反相色譜柱(4.0mm×100mm，5.0μm)；液體自動(dòng)進(jìn)樣器：進(jìn)樣體積3μL；三元流動(dòng)相，流動(dòng)相A：0.5％甲酸溶液(V/V)、流動(dòng)相B：甲醇。

本發(fā)明具有以下有益效果：它克服了現(xiàn)有的方法前處理過(guò)程步驟多、耗時(shí)長(zhǎng)的缺點(diǎn)，提供一種混合溶液提取，磁性分離的快速相分離，正己烷凈化，采用配置有自動(dòng)進(jìn)樣器的HPLC-MS/MS直接測(cè)定動(dòng)物肌 肉組織中磺胺類抗生素的方法，該方法的前處理簡(jiǎn)便、高效、節(jié)省溶劑，靈敏度高和成本低。

具體實(shí)施方式：

本具體實(shí)施方式采用如下技術(shù)方案：先將動(dòng)物肌肉樣品經(jīng)酸化乙腈提取，F(xiàn)e₃O₄磁顆粒的快速相分離，上層清液經(jīng)正己烷去除脂肪，用HPLC-MS/MS分析測(cè)定磺胺類化合物含量，具體步驟如下：

(1)、制備：動(dòng)物解剖、肌肉組織勻漿，-20℃冰箱中低溫保存；

(2)、提取：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，肌肉糜室溫下融解。稱取肌肉糜樣品于具蓋離心試管中，加提取溶液充分浸潤(rùn)，漩渦振蕩，加入Fe₃O₄磁性材料混合物，在外界磁鐵作用下快速相分離；

(3)、凈化：移取1mL樣品提取液上清液于離心管中，氮吹濃縮，加入1mL 1‰甲酸溶液溶解殘雜，將溶液轉(zhuǎn)移到含有1mL正己烷的離心管中渦旋振蕩，離心，棄去上層正己烷相，吸取下層清液經(jīng)0.22μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。

進(jìn)一步的，所述的提取溶液由1‰(V/V)甲酸的乙腈組成；所述的Fe₃O₄磁性材料混合物由2g無(wú)水硫酸鎂、0.5g氯化鈉和100mgFe₃O₄磁性顆粒組成。

本具體實(shí)施方式的儀器參數(shù)為：液相色譜：帶自動(dòng)進(jìn)樣器，毛細(xì)管電壓3.2kV；殼氣45Arb；輔助氣10Arb；毛細(xì)管溫度350℃；蒸發(fā)溫度200℃；峰寬Q1 0.7Da、Q3 0.7Da，碰撞氣壓力1.5mTorr；反相色譜柱為kromasil C18反相色譜柱(4.0mm×100mm，5.0μm)；液體自動(dòng)進(jìn)樣器：進(jìn)樣體積3μL；三元流動(dòng)相，流動(dòng)相A：0.5％甲酸溶液(V/V)、流動(dòng)相B：甲醇。

實(shí)施例：

實(shí)施例一：1、魚(yú)體樣品制備：鯉魚(yú)組織經(jīng)過(guò)勻漿，保存在-20℃ 冰箱中；

2、提?。呼~(yú)糜室溫下融解，稱取2g樣品于50mL具蓋離心管中，加5mL混合溶液充分浸潤(rùn)，渦旋混勻；加入Fe₃O₄磁性材料混合物(由2g無(wú)水硫酸鎂、0.5g氯化鈉和100mgFe₃O₄磁性顆粒組成)，立即渦旋混勻，防止無(wú)水硫酸鎂結(jié)塊，在外界磁鐵的作用下快速相分離；

3、凈化：移取樣品提取液上清液1mL于5mL離心管中，氮吹濃縮，加入加入1mL 1‰甲酸溶液溶解殘雜，將溶液轉(zhuǎn)移到含有1mL正己烷的5mL離心管中渦旋振蕩，離心，棄去上層正己烷相，吸取下層清液經(jīng)0.22μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾后進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。

儀器參數(shù)：HPLC-MS/MS：帶自動(dòng)進(jìn)樣器，毛細(xì)管電壓3.2kV；鞘氣45Arb；輔助氣10Arb；毛細(xì)管溫度350℃；蒸發(fā)溫度200℃；峰寬Q1 0.7Da、Q3 0.7Da，碰撞氣壓力1.5mTorr；反相色譜柱為kromasil C18反相色譜柱(4.0mm×100mm，5.0μm)；液體自動(dòng)進(jìn)樣器：進(jìn)樣體積3μL；液體自動(dòng)進(jìn)樣器：進(jìn)樣體積3μL。

實(shí)施例二：分別在空白魚(yú)樣品中添加0.1、0.25、0.5mg/kg三檔濃度的磺胺類類抗生素標(biāo)樣，提取、凈化后進(jìn)樣，計(jì)算回收率，重復(fù)5次。

鯉魚(yú)肌肉的加標(biāo)回收率如下：

以上所述，僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案所做的其它修改或者等同替換，只要不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。