本發(fā)明涉及屬于癌癥體外臨床檢測
技術領域：
，尤其涉及CA215檢測試劑盒及其制備、使用方法與應用。
背景技術：
：近半個世紀以來，腫瘤的發(fā)病率和死亡率逐年升高，成為醫(yī)學界熱點中的熱點。20世紀70年代，美國提出的向“腫瘤進軍”反映了社會對腫瘤死亡率居高不下的焦慮，同時，在過去的幾十年中，腫瘤標志在技術上和定義上有了突破，這一切都促使了腫瘤標志研究的快速發(fā)展。CA215是腫瘤相關抗原，該抗原是1987年對從培養(yǎng)的卵巢癌細胞提取的單克隆抗體RP215發(fā)現(xiàn)的。RP215被證明與位于主要由大多數(shù)癌細胞中表達的免疫球蛋白重鏈(一般稱為CA215)碳水化合物相關的表位發(fā)生反應。由于CA215是高度與癌細胞或癌組織相關聯(lián)的，且一般不能在正常人組織中發(fā)現(xiàn)，除了在增生上皮細胞或組織，例如皮膚、食道、子宮頸以及幾個免疫特殊部位，包括神經(jīng)，眼睛和睪丸。CA215作為一個泛癌生物標志物具有潛在應用價值，并且可以與其它已知的癌癥生物標志物的并行比較來記錄CA215的在人類許多不同類型的癌癥的免疫診斷的臨床應用。發(fā)現(xiàn)癌癥患者和正常人血清CA215水平是顯著差異(P<0.001)。由于臨床分期，在卵巢癌的情況下，相比正常個體其陽性率范圍從58-86％不等。對于宮頸癌患者，在癌癥晚期的階段陽性率分別高達66-94％。宮頸癌和卵巢癌這些臨床研究的結果還表明，平均血清CA215水平在術前階段并在一周外科手術或化療或放療之前之內維持在相當高的水平。相反，當手術操作或化療或放療七天后測定，血清CA215水平顯著下降?；谶@些研究，可以得出結論認為，癌癥患者的子宮頸和卵巢癌之間的手術切除或化學治療導致在CA215水平在統(tǒng)計學上顯著減少。結果表明，CA215在癌癥患者最可能從腫瘤部位產(chǎn)生，且該腫瘤負荷可由癌癥患者的血清CA215水平充分地反映檢測到。因此，癌癥患者的血清CA215水平的例行檢測對監(jiān)測癌癥發(fā)展的計劃之后治療或手術治療的狀態(tài)是有益的。作為一個泛癌標志物，CA215比癌胚抗原(carcino-embryonicantigen，CEA)或β2微球蛋白更好，在大多數(shù)癌癥中具有更高的顯示陽性檢出率。對于大多數(shù)人類癌癥CA215陽性檢出率都比較高，包括卵巢癌。然而，在子宮頸癌的情況下，使用CA215組合檢測比單獨用CA125有更高的檢出率，檢出率從13％提升至81％。然而，對于卵巢癌用CA215和CA125的組合也有更好的檢出率，檢測率從59％提升至82％。對于肺癌，CA215和CYFRA21-1組合檢測也具有較好的陽性檢出率。對于肝癌，CEA或甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)與CA215的組合似乎有更高的陽性檢出率?？傊?，其他癌癥生物標志物與CA215的組合可以提高在常規(guī)臨床診斷癌癥中的陽性檢出率。上世紀70年代中期Arakawe首次報道用發(fā)光信號進行酶免疫分析，利用發(fā)光的化學反應分析超微量物質，特別是用于臨床免疫分析中檢驗超微量活性物質。目前，這一技術已從實驗室的稀有技術過渡到臨床醫(yī)學的常規(guī)檢測手段。化學發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)是將化學發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。其檢測原理與放射免疫(Radioimmunoassay，RIA)和酶免疫((enzymeimmunoassay，EIA)相似，不同之處是以發(fā)光物質作為底物，并借助其自身的發(fā)光強度直接進行測定。在化學發(fā)光免疫分析中包含兩個部分，即免疫反應系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng)。免疫反應系統(tǒng)，其基本原理同酶聯(lián)免疫技術(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)?；瘜W發(fā)光分析系統(tǒng)的原理在于免疫反應中的酶作用于發(fā)光底物。發(fā)光底物在酶的作用下，底物發(fā)生化學反應并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體，當其回到穩(wěn)定的基態(tài)時，可同時發(fā)射出光子。利用發(fā)光信號測量儀器即可測量光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣品中的待測物質的量成正比。由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質的含量?；瘜W發(fā)光免疫分析既具有放射免疫的高靈敏度，又具有酶聯(lián)免疫的操作簡便、快速的特點，易于標準化操作。且測試中不使用有害的試劑，試劑保持期長，應用于生物學、醫(yī)學研究和臨床實驗診斷工作，成為非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種CA215檢測試劑盒，可以定量檢測人類癌癥標志物CA215的濃度，具有準確性高、特異性高、精密度好、靈敏度高和穩(wěn)定性能好的優(yōu)點。一種CA215檢測試劑盒，其包括抗CA215抗體包被的微孔反應板、酶結合物、化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B以及校準品；其中，所述酶結合物為酶標記的抗CA215抗體，所述酶結合物的標記酶為辣根過氧化物酶；所述化學發(fā)光底物A含有魯米諾，所述化學發(fā)光底物B含有過氧化氫；所述校準品采用CA215純品配制，其標示濃度分別為0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml、100AU/ml；所述抗CA215抗體包被的微孔反應板按照以下方法制備：包被：抗CA215抗體采用包被液稀釋后，取微孔反應板，將稀釋的抗CA215抗體加入到所述微孔反應板的微孔中，每個微孔的加入量為l00μl，室溫(18～25℃)放置12～24小時；封閉：棄去包被液，在吸水紙上拍干，再加入封閉液250μl/孔，室溫(18～25℃)放置6～24小時；穩(wěn)定：棄去封閉液，再加入穩(wěn)定液250μl/孔，室溫(18～25℃)放置4～24小時；封袋：棄去穩(wěn)定液，在吸水紙上拍干，室溫下真空干燥箱中抽真空16～24小時，然后立即進行真空封袋，貼上標簽后于2～8℃保存。優(yōu)選的，所述微孔反應板材料為不透明的聚苯乙烯或聚乙烯。優(yōu)選的，所述包被液的配制方法如下：取lmol/L的Na2HPO477.4ml和lmol/L的Na2HPO422.6ml混勻，加去離子水定容至1000ml，再稀釋10倍使用。優(yōu)選的，所述封閉液為含有質量分數(shù)為3％的BSA、1％的酪蛋白和0.05％的防腐劑的磷酸鹽緩沖液，所述防腐劑為Proclin-300，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4。優(yōu)選的，所述穩(wěn)定液為含有質量分數(shù)為4％的蔗糖和0.05％的防腐劑的磷酸鹽緩沖液，所述防腐劑為Proclin-300，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4。優(yōu)選的，所述校準品根據(jù)如下方法制備：用pH7.4的磷酸鹽緩沖液將CA215純品稀釋成不同濃度點，并定標得到各種標示濃度的校準品，所述磷酸鹽緩沖液包括質量分數(shù)為3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐劑，其中防腐劑為Proclin-300。優(yōu)選的，所述CA215檢測試劑盒還包括濃縮洗滌液，所述濃縮洗滌液為pH7.0～8.0的磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液包括質量分數(shù)為17％的氯化鈉和2.5％的吐溫-20。本發(fā)明同時提供一種CA215檢測試劑盒的制備方法，所述CA215檢測試劑盒包括抗CA215抗體包被的微孔反應板、酶結合物、化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B、校準品以及濃縮洗滌液，其制備方法包括如下步驟：1)制備抗CA215抗體包被的微孔反應板：包被：抗CA215抗體采用包被液稀釋后，取微孔反應板，將稀釋的抗CA215抗體加入到所述微孔反應板的微孔中，每個微孔的加入量為l00μl，室溫(18～25℃)放置12～24小時；封閉：棄去包被液，在吸水紙上拍干，再加入封閉液250μl/孔，室溫(18～25℃)放置6～24小時；穩(wěn)定：棄去封閉液，再加入穩(wěn)定液250μl/孔，室溫(18-25℃)放置4～24小時；封袋：棄去穩(wěn)定液，在吸水紙上拍干，室溫下真空干燥箱中抽真空16～24小時，然后立即進行真空封袋，貼上標簽后于2～8℃保存；2)制備酶結合物：抗CA215抗體與用于標記的辣根過氧化物酶采用過碘酸鹽氧化法交聯(lián)，通過梯度稀釋確定所述酶結合物的使用濃度，用包含質量分數(shù)為0.85％的氯化鈉、3％的BSA、0.05％的EDTA和0.05％的防腐劑的pH7.4磷酸鹽緩沖液保存酶結合物，其中防腐劑為Proclin-300；3)分裝化學發(fā)光底物A和化學發(fā)光底物B；直接將采購的化學發(fā)光底物A和化學發(fā)光底物B分裝，其中，所述化學發(fā)光底物A含有魯米諾，所述化學發(fā)光底物B含有過氧化氫；4)配制校準品系列：采用pH7.4磷酸鹽緩沖液稀釋CA215純品，得到校準品，所述磷酸鹽緩沖液包括質量分數(shù)為3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐劑，其中防腐劑為Proclin-300，所述校準品系列的標示濃度分別為0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml和100AU/ml；5)配制濃縮洗滌液：稱取28g磷酸氫二鈉，170g氯化鈉，量取25ml吐溫-20，用水定容至1000ml，調節(jié)pH7.0～8.0；6)將抗CA215抗體包被的微孔反應板、酶結合物、化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B、校準品以及濃縮洗滌液組裝成所述CA215檢測試劑盒。優(yōu)選的，所述封閉液為含有質量分數(shù)為3％的BSA、1％的酪蛋白和0.05％的防腐劑的磷酸鹽緩沖液，所述防腐劑為Proclin-300，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4。本發(fā)明同時提供上文所述的CA215檢測試劑盒的使用方法，包括如下步驟：取出CA215檢測試劑盒，將所述CA215檢測試劑盒平衡至室溫，并將所述檢測試劑盒中的試劑取出備用；稀釋濃縮洗滌液：將所述濃縮洗滌液用新鮮的純化水稀釋50倍后備用；配制發(fā)光底物：將化學發(fā)光底物A和化學發(fā)光底物B按1:1的體積比混勻后配制成發(fā)光底物；取出待測的血清樣本平衡至室溫；取出抗CA215抗體包被的微孔反應板，往微孔反應板的每個微孔內分別加入100μl校準品和待測的血清樣本，混合均勻，置37℃恒溫箱孵育60分鐘；洗滌：棄去所述微孔反應板的微孔內的液體，采用稀釋后的濃縮洗滌液沖洗所述微孔反應板，然后拍干；往所述微孔反應板的每個微孔內加入100μl酶結合物，充分混勻，置37℃恒溫箱孵育60分鐘；洗滌：棄去所述微孔反應板的微孔內的液體，采用稀釋后的濃縮洗滌液沖洗所述微孔反應板，然后拍干；每個孔內加入100μl發(fā)光底物，充分混勻后立刻加入至化學發(fā)光免疫分析儀中檢測；直接從化學發(fā)光免疫分析儀上讀取發(fā)光值或根據(jù)預設于化學發(fā)光免疫分析儀中的CA215檢測劑量-反應標準曲線獲得待測血清樣本的濃度值并導出。相較于現(xiàn)有技術，本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒及其制備方法和使用方法，具有以下有益效果：一、CA215作為一個泛癌癥生物標志物可用于診斷人類癌癥的潛在風險，本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒可以定量檢測出病人血清CA215的含量，也可與其它癌癥標志物聯(lián)合用于癌癥的輔助診斷及相關病人治療效果的監(jiān)測，如與AFP、CEA、CA125、CA19-9、CA15-3或Cyfra21-1聯(lián)合用檢測，相比于單獨檢測單一生物標志物，可以觀察到更高的癌癥檢測率，在臨床上具有廣泛的應用前景。二、本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒具有高特異性、高靈敏度和良好的精密度，而且操作簡便、快速、穩(wěn)定性好和檢測結果準確。三、本發(fā)明提供的抗CA215抗體包被微孔反應板的步驟中封閉和穩(wěn)定分開進行，增強了包被板的穩(wěn)定性。四、本發(fā)明提供的抗CA215抗體包被微孔反應板的步驟中，包被、封閉和穩(wěn)定的時間范圍比常用時間寬，給實驗操作者帶來極大的方便，且包被過程在室溫環(huán)境下進行，與常用的37度和4度不同，減少了儀器的使用。五、本發(fā)明提供的封閉液配方，封閉效果更好，減少了非特異性結合。六、本發(fā)明提供的用于配制校準品的磷酸鹽緩沖液包括質量分數(shù)為3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐劑，使配制的校準品穩(wěn)定性優(yōu)于常規(guī)的緩沖液。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中：圖1為本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒CA215檢測劑量-反應標準曲線；圖2為本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒的制備方法步驟流程圖；圖3為本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒的使用方法步驟流程圖。具體實施方式下面將結合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。本發(fā)明的技術原理如下：本發(fā)明采用化學發(fā)光免疫分析技術檢測泛癌標志物CA215的濃度值，提供的CA215檢測試劑盒用CA215單克隆抗體包被微孔反應板，在微孔反應板中加入CA215校準品或待測血清樣本，微孔反應板上包被的CA215單克隆抗體與CA215抗原分子結合，再加入辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)標記的CA215單克隆抗體進行反應，微孔反應板上包被的CA215單克隆抗體和辣根過氧化物酶標記的CA215單克隆抗體分別與CA215抗原分子的不同表位結合，形成“三明治”結構。沒有結合的辣根過氧化物酶標記的CA215單克隆抗體在洗滌步驟中被除去。加入發(fā)光底物，在發(fā)光儀上讀取發(fā)光值(RLU)，發(fā)射的光的強度與樣品中的CA215濃度成正比，通過CA215檢測劑量-反應標準曲線即可定量獲得CA215的濃度值，CA215檢測劑量-反應標準曲線如圖1所示。實施例中用于包被的抗CA215抗體和用于標記辣根過氧化物酶的抗CA215抗體均由GregoryLee，Ph.D.贈予。配制校準品中的CA215純品購于chemux公司，化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B均購自北京科躍中楷生物技術有限公司，直接分裝即可使用。實施例一CA215檢測試劑盒所述CA215檢測試劑盒包括抗CA215抗體包被的微孔反應板、酶結合物、化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B、校準品以及濃縮洗滌液，其中微孔反應板中包被的抗CA215抗體為CA215單克隆抗體。所述微孔反應板材料為不透明的聚苯乙烯或聚乙烯。所述酶結合物為酶標記的抗CA215抗體，所述酶結合物的標記酶為辣根過氧化物酶，所述抗CA215抗體和所述辣根過氧化物酶采用過碘酸鹽氧化法交聯(lián)得到，其中，所述抗CA215抗體為CA215單克隆抗體。所述發(fā)光底物A含有魯米諾，所述發(fā)光底物B含有過氧化氫，其為商業(yè)采購，分裝即可。所述校準品采用CA215純品配制，在本實施例中，共配制了6種標示濃度的校準品，其標示濃度分別為0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml、100AU/ml。所述濃縮洗滌液為pH7.0～8.0的磷酸鹽緩沖液，包括質量分數(shù)為17％的氯化鈉和2.5％吐溫-20。請參閱圖2，為本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒的制備方法步驟流程圖。實施例二CA215檢測試劑盒的制備方法所述CA215檢測試劑盒的制備方法包括如下步驟：1)制備抗CA215抗體包被的微孔反應板：包被：抗CA215抗體采用包被液稀釋后，取微孔反應板，將稀釋的抗CA215抗體加入到所述微孔反應板的微孔中，每個微孔的加入量為l00μl，室溫(18～25℃)放置12～24小時，其中所述包被液的配制方法如下：取lmol/LNa2HPO477.4ml和lmol/LNaH2PO422.6ml混勻，加入去離子水定容至l000ml，使用時需再稀釋10倍；封閉：棄去包被液，在吸水紙上拍干，再加入封閉液250μl/孔，室溫(18～25℃)放置6～24小時，其中，所述封閉液為含有質量分數(shù)為3％的BSA、1％的酪蛋白和0.05％的防腐劑的磷酸鹽緩沖液，所述防腐劑為Proclin-300，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4；穩(wěn)定：棄去封閉液，再加入穩(wěn)定液250μl/孔，室溫(18～25℃)放置4～24小時，其中所述穩(wěn)定液為含有質量分數(shù)為4％的蔗糖和0.05％的防腐劑的磷酸鹽緩沖液，所述防腐劑為Proclin-300，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4；采用該封閉液進行封閉，效果好，減少了非特異性結合。封袋：棄去穩(wěn)定液，在吸水紙上拍干，室溫下真空干燥箱中抽16～24小時，立即進行真空封袋，貼上標簽后于2～8℃保存；在真空封袋后需檢查有無漏氣，如漏氣，需重新封袋再貼上標簽保存。該包被方法將封閉和穩(wěn)定分開進行，增加了包被板的穩(wěn)定性，同時包被、封閉和穩(wěn)定的時間范圍比常用時間長，給實驗操作者帶來了極大的方便，且包被過程在室溫環(huán)境下進行，與常用的37度和4度不同，減少了儀器的使用。2)制備酶結合物：抗CA215抗體與用于標記的辣根過氧化物酶采用過碘酸鹽氧化法交聯(lián)，通過梯度稀釋確定所述酶結合物的使用濃度，用包含質量分數(shù)為0.85％的氯化鈉、3％的BSA、0.05％的EDTA和0.05％的防腐劑的pH7.4磷酸鹽緩沖液保存酶結合物，其中防腐劑為Proclin-300。3)分裝化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B：直接采購化學發(fā)光底物A和化學發(fā)光底物B，然后分裝，其中，所述化學發(fā)光底物A含有魯米諾，所述化學發(fā)光底物B含有過氧化氫；4)配制校準品：采用pH7.4磷酸鹽緩沖液稀釋CA215純品，將CA215純品稀釋成不同濃度點，并定標得到校準品，所述磷酸鹽緩沖液包括質量分數(shù)為3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐劑，其中防腐劑為Proclin-300，所述校準品的標示濃度分別為0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml和100AU/ml。采用包括0.5％的CreamophprEL的磷酸緩沖液稀釋CA215純品配制樣準品，相對于常規(guī)的緩沖液，穩(wěn)定性更好。5)配制濃縮洗滌液：所述濃縮洗滌液為pH7.0～8.0的磷酸鹽緩沖液，包含質量分數(shù)為17％的氯化鈉和2.5％吐溫-20，其配制方法如下：稱取28g磷酸氫二鈉，170g氯化鈉，量取25ml吐溫-20，用水定容至1000ml，調節(jié)pH7.0～8.0。6)將抗CA215抗體包被的微孔反應板、酶結合物、化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B、校準品以及濃縮洗滌液組裝成所述CA215檢測試劑盒。請參閱圖3，為本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒的使用方法步驟流程圖。實施例三CA215檢測試劑盒的使用方法CA215檢測試劑盒的使用方法，包括如下步驟：S1、取出CA215檢測試劑盒，將所述CA215檢測試劑盒平衡至室溫，并將所述檢測試劑盒中的試劑取出備用：具體地，將所述CA215檢測試劑盒置室溫(18～25℃)下平衡30分鐘；S2、稀釋濃縮洗滌液：將所述濃縮洗滌液用新鮮的純化水稀釋50倍后備用；S3、配制發(fā)光底物：將化學發(fā)光底物A和化學發(fā)光底物B按1:1的體積比混勻后配制成發(fā)光底物，現(xiàn)用現(xiàn)配；S4、取出待測的血清樣本平衡至室溫：具體地，將待測的血清樣本置室溫(18～25℃)平衡30分鐘。S5、取出抗CA215抗體包被的微孔反應板，往微孔反應板的每個微孔內分別加入100μl校準品和待測的血清樣本，混合均勻，置37℃恒溫箱孵育60分鐘；具體地將微孔反應板放置于微孔架上，微孔內分別加入濃度為0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml和100AU/ml的六個校準品以及待測的血清樣本；S6、洗滌：棄去所述微孔反應板的微孔內的液體，采用稀釋后的濃縮洗滌液沖洗所述微孔反應板，然后拍干：洗滌方法如下：用稀釋后的濃縮洗滌液加滿微孔反應板的微孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干；或者用洗板機洗滌：每孔加入300μl稀釋后的濃縮洗滌液，重復4次，洗滌后拍干；S7、往所述微孔反應板的微孔內分別加入100μl/孔的所述酶結合物，充分混勻，置37℃恒溫箱孵育60分鐘；S8、洗滌：棄去所述微孔反應板的微孔內的液體，采用稀釋后的濃縮洗滌液沖洗所述微孔反應板，然后拍干；洗滌方法同步驟S6；S9、往每個孔內加入100μl發(fā)光底物，充分混勻后立刻加入至化學發(fā)光免疫分析儀中進行檢測；S10、獲取檢測結果：直接從化學發(fā)光免疫分析儀上讀取發(fā)光值或根據(jù)預設于化學發(fā)光免疫分析儀中的CA215檢測劑量-反應標準曲線獲得待測血清樣本的濃度值并導出。實施例四CA215檢測試劑盒的分析性能評價首先利用化學發(fā)光免疫分析儀對CA215標準品進行檢測，繪制檢測劑量-反應標準曲線，參見圖1所示，所述標準曲線內置于電腦軟件中，接著測試已知含量樣品和校準品等，讀取發(fā)光值或根據(jù)劑量-反應標準曲線計算出發(fā)光值對應的濃度，對所述CA215檢測試劑盒進行準確性、特異性、精密度、最低檢測限和穩(wěn)定性的評價。1)準確性CA215定量檢測試劑盒的方法學鑒定按照本領域中常規(guī)的制造及鑒定規(guī)程對實施例1的CA215檢測試劑盒進行檢定結果如下：將已知含量樣品用本發(fā)明實施例1中制備的試劑盒進行檢測，計算回收率(回收率＝回收量/加入量×100％)，結果如下表所示：加入量AU/ml222526314053回收量AU/ml21.9223.5824.9532.5840.3651.95回收率％99.6494.3295.96105.10100.9098.022)特異性將已知含量類似物用本發(fā)明實施例1中的CA215檢測試劑盒進行檢測，結果如下表所示：3)精密度檢測質控品1和質控品2的發(fā)光值，質控品1和質控品2分別做10個平行孔重復測定其發(fā)光值，計算CV值(CoefficientofVariance，離散系數(shù)，為標準偏差與平均值比值的百分比)，結果如下表所示：名稱CV％質控品14.17質控品25.64)最低檢測限重復測定標示濃度為零的校準品(或樣本稀釋液)10次，計算出發(fā)光值的均值和標準差(SD)，將的反應量代入CA215檢測劑量-反應曲線，計算出相應濃度值，即為最低檢測限，結果如下表所示：5)穩(wěn)定性試劑盒中各組分置37℃7天后測試準確性、精密度、最低檢測限和曲線相關系數(shù)，結果如下：將以上結果匯總得出：檢測項目檢驗標準檢驗結果準確性回收率在85％～115％符合標準特異性本試劑盒測定結果應不大于1AU/ml符合標準精密度CV(％)小于15％(n＝10)符合標準最低檢測限小于1AU/ml符合標準穩(wěn)定性試劑盒中各組分置37℃至少7天符合標準從上述匯總表可以看到說明所述CA215檢測試劑盒各項性能指標均合格，且具有準確性高、特異性高、精密度好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的優(yōu)點。實施例五：正常人的CA215的含量和臨界值的確定隨機抽取120例健康人血清用實施例1中的CA215檢測試劑盒進行測定，匯總所有測定值，以百分位數(shù)法確定其臨界值(95％位數(shù)的參考限)，最終確定臨界值為6.3AU/ml。實施例六：隨機抽取60例卵巢癌患者血清，用實施例1中的制備的CA215定量試劑盒進行測定，匯總所有測定值，平均濃度為51.016AU/ml，顯著高于健康人血清測值。實施例七：隨機抽取60例宮頸癌患者血清，用實施例1中的制備的CA215定量試劑盒進行測定，匯總所有測定值，平均濃度為70.143AU/ml，顯著高于健康人血清測值。本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒及其制備方法和使用方法，具有以下有益效果：一、CA215作為一個泛癌癥生物標志物可用于診斷人類癌癥的潛在風險，本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒可以定量檢測出病人血清CA215的含量，也可與其它癌癥標志物聯(lián)合用于癌癥的輔助診斷及相關病人治療效果的監(jiān)測，如與AFP、CEA、CA125、CA19-9、CA15-3或Cyfra21-1聯(lián)合用檢測，相比于單獨檢測單一生物標志物，可以觀察到更高的癌癥檢測率，在臨床上具有廣泛的應用前景。二、本發(fā)明提供的CA215檢測試劑盒具有高特異性、高靈敏度和良好的精密度，而且操作簡便、快速、穩(wěn)定性好和檢測結果準確。三、本發(fā)明提供的抗CA215抗體包被微孔反應板的步驟中封閉和穩(wěn)定分開進行，增強了包被板的穩(wěn)定性。四、本發(fā)明提供的抗CA215抗體包被微孔反應板的步驟中，包被、封閉和穩(wěn)定的時間范圍比常用時間寬，給實驗操作者極大的方便，且包被過程在室溫環(huán)境下進行，與常用的37度和4度不同，減少了儀器的使用。五、本發(fā)明提供的封閉液配方，封閉效果更好，減少了非特異性結合。六、本發(fā)明提供的用于配制校準品的磷酸鹽緩沖液包括質量分數(shù)為3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐劑，使配制的校準品穩(wěn)定性優(yōu)于常規(guī)的緩沖液。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。當前第1頁1 2 3