本發(fā)明涉及食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種乳品中β-內(nèi)酰胺的檢測方法。
背景技術(shù)：
牛奶中的抗生素來自乳牛，乳牛被注射抗生素，是主要治療乳腺發(fā)炎，乳腺炎是奶牛常見病，抗生素的使用是業(yè)界公開的秘密，牛奶中的抗生素可能導(dǎo)致飲用者過敏，或因長期接觸抗生素而耐藥。
乳牛因注射抗生素，導(dǎo)致其產(chǎn)下的奶水中含有殘留的抗生素，由于β-內(nèi)酰胺可以水解青霉素類抗生素，所以被不法分子作為解抗劑非法添加入乳品中，從而達到掩蔽抗生素的目的，影響抗生素的殘留檢測，β-內(nèi)酰胺的產(chǎn)生是細菌藥物耐藥最常見的機制，長期食入非法添加的β-內(nèi)酰胺，對人體健康會有嚴(yán)重影響。
目前常用的檢測β-內(nèi)酰胺的方法有兩種，直接檢測法和間接檢測法，直接檢測主要是基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測試劑盒，費用高，其靈敏度差，特異性差，容易受到其他成分的干擾，間接檢測法是應(yīng)用色譜間接的測量β-內(nèi)酰胺的活性，該檢測方法精度高，但該檢測方法時間長，重復(fù)性差，不能現(xiàn)場進行測試，并且這兩種檢測方法都需要對牛奶進行預(yù)處理。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
（一）解決的技術(shù)問題
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種乳品中β-內(nèi)酰胺的檢測方法，具備測量精度高、快速和檢測費用低等優(yōu)點，解決了現(xiàn)有乳品中β-內(nèi)酰胺的檢測方法精度較低、周期長和檢測費用高的問題。
（二）技術(shù)方案
為實現(xiàn)上述乳品中β-內(nèi)酰胺測量精度高、快速和檢測費用低的目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種乳品中β-內(nèi)酰胺的檢測方法，包括以下步驟：
一、調(diào)校儀器：將酶熱生物分析儀上的蠕動泵校準(zhǔn)為0.45-0.5ml/L；
二、安裝樣品環(huán)：取市場上常見的非親水透明塑料管支撐的塑膠管一根，安裝在酶熱生物分析儀上；
三、將酶熱生物分析儀上的儀器信號放大旋鈕調(diào)至80，然后將電流表指針調(diào)至中央零點位置，確保電流表工作正常；
四、調(diào)校記錄儀：取市場上通用型記錄儀，將其電壓調(diào)至一伏左右，記錄紙滾動速度為8cm/小時；
五、取適量青霉素酶溶液于容器內(nèi)，再向容器內(nèi)添加適量的青霉素溶液，的青霉素酶混合液，從而保持青霉素酶的活性，向酶熱生物分析儀上的樣品環(huán)內(nèi)依次注射待測牛奶樣品、青霉素酶混合液，然后將注射閥由注射檔調(diào)至為上樣檔，檢測樣品8-10分鐘，待樣品的峰回落至基線時，注射下一個樣品；
六、檢測試驗結(jié)束之后，將樣品環(huán)從酶熱生物分析儀上取下，向樣品環(huán)內(nèi)注入濃度為45%-60%濃度的酒精試劑，清洗儀器及樣品環(huán)。
優(yōu)選的，所述青霉素酶溶液及青霉素溶液由以下方法可制得：
一、材料準(zhǔn)備：
磷酸二氫鈉：3-6克；
磷酸氫二鈉：15-20克；
去離子水：800-1000毫升；
青霉素樣品：50-80毫升；
青霉素酶樣品：6-10毫克；
牛奶：200-260毫升；
酒精試劑：300-400毫升；
二、配制樣品：
S1、取3-6克磷酸二氫鈉和15-20克磷酸氫二鈉置于容器中，并向容器中添加800-1000毫升的去離子水，攪拌5-10分鐘，靜置，得到磷酸鹽溶液；
S2、向磷酸鹽溶液中添加6-20毫克青霉素酶樣品，攪拌5-8分鐘，得青霉素酶溶液，置于溫度為4度的環(huán)境中儲存；
S3、取少量S1中制得的磷酸鹽溶液，并向其中添加6-10毫升的青霉素樣品，得青霉素溶液。
優(yōu)選的，所述注射樣品進樣品環(huán)與酶熱生物分析同步進行，所述含β-內(nèi)酰胺的牛奶待測樣品與青霉素酶的混合液分別在兩個獨立的流動腔進入反應(yīng)系統(tǒng)，在反應(yīng)器內(nèi)混合后產(chǎn)生催化反應(yīng)，并且放熱，酶熱生物分析儀通過檢測放出的熱量數(shù)據(jù)通過溫度傳感器轉(zhuǎn)化為溫度數(shù)值，然后顯示在酶熱生物分析儀的顯示屏上，便于試驗人員進行記錄。
優(yōu)選的，所述主要的檢測儀器如下：
A、雙通道流動控制系統(tǒng)及其混合器、反應(yīng)器和檢測器；
B、檢測傳感器為溫度傳感器，包括熱敏電阻、熱電偶、熱電堆和范文晶體管等；
C、電子測量為開爾文雙臂電橋，差分溫度測量方式，其檢測靈敏度可達0.0001攝氏度-0.00015攝氏度。
優(yōu)選的，所述酶熱生物分析儀的檢測原理是由該熱焓變化所產(chǎn)生的反應(yīng)系統(tǒng)的溫度變化為檢測信號，該溫度信號可以分為差分方式或非差分方式測定。
優(yōu)選的，所述的乳品β-內(nèi)酰胺的檢測方法可擴展至其它非含乳成分的液態(tài)食品、飲料、藥品、化妝品、化學(xué)試劑和發(fā)酵制劑等。
優(yōu)選的，所述樣品每注射一次后，及時記錄酶熱生物分析儀上顯示的溫度數(shù)據(jù)，使用相同濃度的青霉素酶溶液和青霉素溶液對待測牛奶進行依次試驗，并依次記錄溫度數(shù)據(jù)，將所得溫度數(shù)據(jù)，去掉一個最大值，去掉一個最小值，然后求和再求得平均值，即可得到待測牛奶中所含的β-內(nèi)酰胺的濃度值。
（三）有益效果
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種乳品中β-內(nèi)酰胺的檢測方法，具備以下有益效果：
1、該β-內(nèi)酰胺的檢測方法，直接對乳品中的β-內(nèi)酰胺進行分析：方法簡單，儀器操作方便，且待測奶樣品無需預(yù)處理，可直接進樣分析，測量快速，完成一次測量約8分鐘，檢測成本低，檢測一次約十元，靈敏度高，奶樣品適合原料奶、奶制品和其他液態(tài)食品中的β-內(nèi)酰胺的檢測，并且通過該酶熱生物分析儀所顯示的數(shù)據(jù)，進行求平均值后可得出乳品中的β-內(nèi)酰胺的濃度，從而判斷乳品中的β-內(nèi)酰胺的含量情況，便于工作人員了解具體情況。
具體實施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明的實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
本發(fā)明提供一種技術(shù)方案：一種乳品中β-內(nèi)酰胺的檢測方法，包括以下步驟：
一、調(diào)校儀器：將酶熱生物分析儀上的蠕動泵校準(zhǔn)為0.45-0.5ml/L，主要的檢測儀器如下：
A、雙通道流動控制系統(tǒng)及其混合器、反應(yīng)器和檢測器；
B、檢測傳感器為溫度傳感器，包括熱敏電阻、熱電偶、熱電堆和范文晶體管等；
C、電子測量為開爾文雙臂電橋，差分溫度測量方式，其檢測靈敏度可達0.0001攝氏度-0.00015攝氏度；
二、安裝樣品環(huán)：取市場上常見的非親水透明塑料管支撐的塑膠管一根，安裝在酶熱生物分析儀上；
三、將酶熱生物分析儀上的儀器信號放大旋鈕調(diào)至80，然后將電流表指針調(diào)至中央零點位置，確保電流表工作正常；
四、調(diào)校記錄儀：取市場上通用型記錄儀，將其電壓調(diào)至一伏左右，記錄紙滾動速度為8cm/小時；
五、取適量青霉素酶溶液于容器內(nèi)，青霉素酶溶液及青霉素溶液由以下方法可制得：
一、材料準(zhǔn)備：
磷酸二氫鈉：3-6克；
磷酸氫二鈉：15-20克；
去離子水：800-1000毫升；
青霉素樣品：50-80毫升；
青霉素酶樣品：6-10毫克；
牛奶：200-260毫升；
酒精試劑：300-400毫升；
二、配制樣品：
S1、取3-6克磷酸二氫鈉和15-20克磷酸氫二鈉置于容器中，并向容器中添加800-1000毫升的去離子水，攪拌5-10分鐘，靜置，得到磷酸鹽溶液；
S2、向磷酸鹽溶液中添加6-20毫克青霉素酶樣品，攪拌5-8分鐘，得青霉素酶溶液，置于溫度為4度的環(huán)境中儲存；
S3、取少量S1中制得的磷酸鹽溶液，并向其中添加6-10毫升的青霉素樣品，得青霉素溶液，再向容器內(nèi)添加適量的青霉素溶液，注射樣品進樣品環(huán)與酶熱生物分析同步進行，酶熱生物分析儀的檢測原理是由該熱焓變化所產(chǎn)生的反應(yīng)系統(tǒng)的溫度變化為檢測信號，該溫度信號可以分為差分方式或非差分方式測定，含β-內(nèi)酰胺的牛奶待測樣品與青霉素酶的混合液分別在兩個獨立的流動腔進入反應(yīng)系統(tǒng)，在反應(yīng)器內(nèi)混合后產(chǎn)生催化反應(yīng)，并且放熱，酶熱生物分析儀通過檢測放出的熱量數(shù)據(jù)通過溫度傳感器轉(zhuǎn)化為溫度數(shù)值，然后顯示在酶熱生物分析儀的顯示屏上，便于試驗人員進行記錄，的青霉素酶混合液，從而保持青霉素酶的活性，向酶熱生物分析儀上的樣品環(huán)內(nèi)依次注射待測牛奶樣品、青霉素酶混合液，然后將注射閥由注射檔調(diào)至為上樣檔，檢測樣品8-10分鐘，待樣品的峰回落至基線時，注射下一個樣品，樣品每注射一次后，及時記錄酶熱生物分析儀上顯示的溫度數(shù)據(jù)，使用相同濃度的青霉素酶溶液和青霉素溶液對待測牛奶進行依次試驗，并依次記錄溫度數(shù)據(jù)，將所得溫度數(shù)據(jù)，去掉一個最大值，去掉一個最小值，然后求和再求得平均值，即可得到待測牛奶中所含的β-內(nèi)酰胺的濃度值，乳品β-內(nèi)酰胺的檢測方法可擴展至其它非含乳成分的液態(tài)食品、飲料、藥品、化妝品、化學(xué)試劑和發(fā)酵制劑等；
六、檢測試驗結(jié)束之后，將樣品環(huán)從酶熱生物分析儀上取下，向樣品環(huán)內(nèi)注入濃度為45%-60%濃度的酒精試劑，清洗儀器及樣品環(huán)。
為了提高該乳品β-內(nèi)酰胺的檢測方法的準(zhǔn)確性，檢測者所使用的青霉素酶溶液及青霉素溶液的濃度對于檢測乳品β-內(nèi)酰胺的檢測也很關(guān)鍵，因此我們?yōu)榇偈箼z測試驗的準(zhǔn)確性、完整性和充分性，特提出配制以下幾種濃度的青霉素酶溶液及青霉素溶液的配制過程及方法。
實施例一：一種乳品β-內(nèi)酰胺的檢測所涉及的青霉素酶溶液及青霉素溶液的配制方法，包括以下步驟：
S1、取3克磷酸二氫鈉和15克磷酸氫二鈉置于容器中，并向容器中添加800毫升的去離子水，攪拌5-10分鐘，靜置，得到濃度為800U/ml的磷酸鹽溶液；
S2、制備青霉素酶溶液：向800U/ml磷酸鹽溶液中添加6毫克青霉素酶樣品，攪拌5-8分鐘，得濃度800U/ml青霉素酶溶液，置于溫度為4度的環(huán)境中儲存；
S3、制備青霉素溶液：取100毫升S1中制得的800U/ml磷酸鹽溶液，并向其中添加6毫升的青霉素樣品，得濃度為600U/ml青霉素溶液。
實施例二：一種乳品β-內(nèi)酰胺的檢測所涉及的青霉素酶溶液及青霉素溶液的配制方法，包括以下步驟：
S1、取4克磷酸二氫鈉和16克磷酸氫二鈉置于容器中，并向容器中添加880毫升的去離子水，攪拌5-10分鐘，靜置，得到濃度為900U/ml的磷酸鹽溶液；
S2、制備青霉素酶溶液：向900U/ml磷酸鹽溶液中添加7毫克青霉素酶樣品，攪拌5-8分鐘，得濃度900U/ml青霉素酶溶液，置于溫度為4度的環(huán)境中儲存；
S3、制備青霉素溶液：取100毫升S1中制得的900U/ml磷酸鹽溶液，并向其中添加7毫升的青霉素樣品，得濃度為700U/ml青霉素溶液。
實施例三：一種乳品β-內(nèi)酰胺的檢測所涉及的青霉素酶溶液及青霉素溶液的配制方法，包括以下步驟：
S1、取5克磷酸二氫鈉和18克磷酸氫二鈉置于容器中，并向容器中添加950毫升的去離子水，攪拌5-10分鐘，靜置，得到濃度為950U/ml的磷酸鹽溶液；
S2、制備青霉素酶溶液：向950U/ml磷酸鹽溶液中添加7毫克青霉素酶樣品，攪拌5-8分鐘，得濃度950U/ml青霉素酶溶液，置于溫度為4度的環(huán)境中儲存；
S3、制備青霉素溶液：取100毫升S1中制得的950U/ml磷酸鹽溶液，并向其中添加10毫升的青霉素樣品，得濃度為7600U/ml青霉素溶液。
實施例四：一種乳品β-內(nèi)酰胺的檢測所涉及的青霉素酶溶液及青霉素溶液的配制方法，包括以下步驟：
S1、取6克磷酸二氫鈉和20克磷酸氫二鈉置于容器中，并向容器中添加1000毫升的去離子水，攪拌5-10分鐘，靜置，得到濃度為1000U/ml的磷酸鹽溶液；
S2、制備青霉素酶溶液：向1000U/ml磷酸鹽溶液中添加7毫克青霉素酶樣品，攪拌5-8分鐘，得濃度1000U/ml青霉素酶溶液，置于溫度為4度的環(huán)境中儲存；
S3、制備青霉素溶液：取100毫升S1中制得的1000U/ml磷酸鹽溶液，并向其中添加7毫升的青霉素樣品，得濃度為800U/ml青霉素溶液。
本發(fā)明的有益效果是：該β-內(nèi)酰胺的檢測方法，直接對乳品中的β-內(nèi)酰胺進行分析：方法簡單，儀器操作方便，且待測奶樣品無需預(yù)處理，可直接進樣分析，測量快速，完成一次測量約8分鐘，檢測成本低，檢測一次約十元，靈敏度高，奶樣品適合原料奶、奶制品和其他液態(tài)食品中的β-內(nèi)酰胺的檢測，并且通過該酶熱生物分析儀所顯示的數(shù)據(jù)，進行求平均值后可得出乳品中的β-內(nèi)酰胺的濃度，從而判斷乳品中的β-內(nèi)酰胺的含量情況，便于工作人員了解具體情況。
盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。