1.一種檢測(cè)口含煙制品對(duì)細(xì)胞過氧化氫酶酶活力影響的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)受試物的前處理；
(2)人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的制備；
(3)人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞濃度的計(jì)算；
(4)人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞接種；
(5)受試物的分組；
(6)受試物檢測(cè)劑量的設(shè)定；
(7)受試物培養(yǎng)品的制備；
(8)受試物的孵育；
(9)受試物孵育品的收集；
(10)受試物孵育品的裂解離心；
(11)標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定；
(12)受試物孵育品的測(cè)定；
(13)蛋白濃度測(cè)定；
(14)過氧化氫酶酶活力計(jì)算。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下具體步驟：
(1)受試物的前處理：準(zhǔn)確稱取1.0g口含煙制品，加入30mL無血清培養(yǎng)基，于37℃下靜置24h，萃取，萃取后先用定性濾紙進(jìn)行初濾除渣處理，再用0.45μm有機(jī)濾膜過濾除菌，得到待測(cè)液；
(2)人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的制備：人口腔角質(zhì)細(xì)胞復(fù)蘇后，接種到細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5vt％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察培養(yǎng)細(xì)胞的匯合和形態(tài)情況，待細(xì)胞長(zhǎng)至90％的匯合率時(shí)，移除培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用磷酸緩沖液洗兩次，加入適量0.25％的胰蛋白酶溶液，其中胰蛋白酶/磷酸鹽緩沖液的濃度單位為質(zhì)量：體積；單層孵育約1-2min，用成纖維成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基懸起，形成單細(xì)胞懸浮液；
(3)人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞濃度的計(jì)算：用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法對(duì)步驟(2)得到人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞濃度進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算出每毫升人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的活細(xì)胞數(shù)；
(4)人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液的細(xì)胞接種：將步驟(3)計(jì)數(shù)后的人口腔角質(zhì)細(xì)胞單細(xì)胞懸浮液加入OKM細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至2.0×105個(gè)/mL，再按接種量為4mL/皿，接種到60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5vt％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h；
(5)受試物的分組：將受試物分為兩組：細(xì)胞對(duì)照組和檢測(cè)樣品組；各組的構(gòu)成為：細(xì)胞對(duì)照組為OKM細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基上種植人口腔角質(zhì)細(xì)胞；檢測(cè)樣品組為在OKM細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基上種植人口腔角質(zhì)細(xì)胞并添加受試物；
(6)受試物檢測(cè)劑量的設(shè)定：將受試物，即電子煙原液分為5個(gè)非零劑量：12.5％樣品萃取液、25％樣品萃取液、50％樣品萃取液、75％樣品萃取液、100％樣品萃取液；
(7)受試物培養(yǎng)品的制備：移除步驟(4)中直徑為60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基，再按步驟(5)進(jìn)行分組，各組的構(gòu)成為：細(xì)胞對(duì)照組為OKM細(xì)胞培養(yǎng)基+人口腔角質(zhì)細(xì)胞；檢測(cè)樣品組為OKM細(xì)胞培養(yǎng)基+人口腔角質(zhì)細(xì)胞+受試物，并使檢測(cè)樣品組的最終濃度分別為步驟(6)設(shè)定的劑量；用OKM細(xì)胞培養(yǎng)基將每孔液體體積補(bǔ)足至4mL；
(8)受試物的孵育：將步驟(7)加樣后的直徑為60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿置于37℃、5vt％CO2培養(yǎng)箱中孵育24h；
(9)受試物孵育品的收集：去除步驟(8)中的培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖液洗一遍，加入適量0.25％的胰蛋白酶溶液，其中胰蛋白酶/磷酸鹽緩沖液的濃度單位為質(zhì)量：體積；單層孵育約1-2min，用成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液懸起，1000rpm低溫離心10min；
(10)受試物孵育品的裂解離心：收集步驟(9)得到的細(xì)胞，加入100μL細(xì)胞裂解液，冰浴裂解，裂解后收集細(xì)胞，1600rpm低溫離心10min，取上清液待后續(xù)測(cè)定；
(11)標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定：取0、12.5、25、50、75μL配制好的5mmol/L過氧化氫溶液至1.5mL離心管中，分別加入過氧化氫酶檢測(cè)緩沖液稀釋至最后體積為100μL混勻，各取4μL加入96孔板，加入200μL配制好的顯色液，25℃孵育至少15min后酶標(biāo)儀測(cè)定520nm處吸光度；
(12)受試物孵育品的測(cè)定：在不同離心管內(nèi)加入40μL樣品待測(cè)液，空白對(duì)照組加入40μL過氧化氫酶檢測(cè)緩沖液；隨后分別加入10μL的250mmol/L過氧化氫溶液，迅速混勻，25℃反應(yīng)5min；加入450μL過氧化氫酶反應(yīng)終止液振蕩混勻終止反應(yīng)；在塑料離心管內(nèi)加入40μL過氧化氫酶檢測(cè)緩沖液，再加入10μL已終止并混勻的上述反應(yīng)體系，混勻，從中取最終反應(yīng)體系液體10μL加入96孔板，再加入200μL配制好的顯色工作液。25℃孵育15min后測(cè)定520nm處的吸光度A520；
(13)蛋白濃度測(cè)定：測(cè)定樣品蛋白濃度；
(14)過氧化氫酶酶活力計(jì)算：
a.根據(jù)步驟(11)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：
A520＝k[過氧化氫微摩爾數(shù)]+b，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出k和b的值；
b.計(jì)算出樣品中殘余的過氧化氫摩爾數(shù)：
殘余過氧化氫微摩爾數(shù)＝(A520-b)/k
c.過氧化氫酶酶活力計(jì)算：
[樣品過氧化氫酶酶活力]＝([空白對(duì)照殘余過氧化氫微摩爾數(shù)]－[樣品殘余過氧化氫微摩爾數(shù)])×[稀釋倍數(shù)]/(5min×40μL×[蛋白濃度])。