本發(fā)明涉及兒茶酚胺代謝物檢測的
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測方法以及高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測4種兒茶酚胺代謝物的方法。
背景技術(shù)：
：兒茶酚胺是一種含有兒茶酚和胺基的神經(jīng)類物質(zhì)，包括腎上腺素(epinephrine，E)、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、多巴胺(dopamine，DA)，是由腎上腺髓質(zhì)和一些交感神經(jīng)元嗜鉻細(xì)胞分泌的一類非常重要的神經(jīng)遞質(zhì)，也是重要的激素物質(zhì)。這三種兒茶酚胺都是由酪氨酸為前提轉(zhuǎn)化得到的，在體內(nèi)兒茶酚胺物質(zhì)代謝后，被轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的代謝產(chǎn)物如甲氧基腎上腺素(或變腎上腺素，Metanephrine，MN)、甲氧基去甲腎上腺素(或去甲變腎上腺素，Normetaneprine，NMN)、香草扁桃酸(Vanillylmandelicacid，VMA)、高香草酸(Homovanillicacid，HVA)等。兒茶酚胺及其代謝物在人體的心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌腺、腎臟、平滑肌等組織系統(tǒng)的生理活動中起著廣泛的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)還影響人體的代謝。甲氧腎上腺素及甲氧基去甲腎上腺素為腎上腺素及去甲腎上腺素的中間產(chǎn)物，特別地，被公認(rèn)為是臨床上診斷嗜鉻細(xì)胞瘤的黃金標(biāo)準(zhǔn)，檢測靈敏度和特異度均高于90％；香草扁桃酸和高香草酸結(jié)構(gòu)相似，其中香草扁桃酸為腎上腺素和去甲腎上腺素的主要終末代謝產(chǎn)物，而高香草酸為多巴胺的終末代謝產(chǎn)物，神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者體內(nèi)可同時(shí)分泌過量的腎上腺素、去甲腎上腺素以及多巴胺，代謝產(chǎn)物香草扁桃酸和高香草酸會通過腎臟排泄，在疾病早期即升高。因此同時(shí)檢測兒茶酚胺代謝物，不僅可以間接反映體內(nèi)兒茶酚胺的代謝情況，而且對嗜鉻細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的早期診斷及鑒別有重要意義。目前常用的兒茶酚胺代謝物的檢測方法主要有放射酶學(xué)法、化學(xué)發(fā)光法、熒光法和高效液相色譜法等，這些檢測方法主要存在以下一些問題：第一，血漿樣品前處理過程復(fù)雜，并且需要起始樣品量較大；第二，現(xiàn)有檢測技術(shù)過程時(shí)間長，實(shí)驗(yàn)誤差較大，通量低；第三，由于腎上腺素和甲氧基去甲腎上腺素分子量一樣，結(jié)構(gòu)非常類似，無法用常規(guī)檢測方法區(qū)分，特異性較差；第四，現(xiàn)有檢測方法通常只能檢測其中一到兩種物質(zhì)，無法做到高通量同時(shí)檢測4種兒茶酚胺代謝物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明公開了一種高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測方法以及一種高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測4種兒茶酚胺代謝物的方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的方案是：一種高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測方法，所述方法包括以下步驟：S1樣品制備：往待測樣品中加入一定量的含有已知濃度內(nèi)標(biāo)(內(nèi)標(biāo)是同位素標(biāo)記的待測物質(zhì))的乙腈溶液，高速離心后吸取上清液；S2衍生化反應(yīng)：利用離心濃縮冷凍系統(tǒng)將上清液凍干后，在避光條件下，用衍生化試劑對上述樣品進(jìn)行衍生化反應(yīng)，以提高在質(zhì)譜上的信號響應(yīng)信號；衍生化反應(yīng)時(shí)還加入適量0.1MNa2CO3–NaHCO3緩沖溶液(pH＝11.0)，反應(yīng)條件為35℃避光反應(yīng)30min；S3樣品前處理：將衍生化反應(yīng)后的樣品調(diào)節(jié)pH至7后離心，取上清液于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析；調(diào)節(jié)pH使用甲酸水溶液，離心使用低溫離心機(jī)在18000g離心力4℃下離心5min；S4液相色譜分離：利用超高壓液相色譜以及相應(yīng)的流動相，在反向C18分析柱上對樣品進(jìn)行分離；優(yōu)選地，液相色譜條件包括：色譜柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18Column:poresizeparticlesize1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色譜柱柱溫：25度；進(jìn)樣量：15μl；流速：0.3ml/min；流動相組成：A相為20mM醋酸銨和0.1％甲酸水溶液(體積比)，B相為0.1％甲酸-乙腈溶液(體積比)；優(yōu)選地，洗脫梯度如下：時(shí)間(min)流速(mL/min)A％B％曲線值1-0.37525-230.375251340.3505064100.310906513.50.3109066150.3752511S5串聯(lián)質(zhì)譜檢測：色譜上分離后的樣品進(jìn)入到質(zhì)譜進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式檢測，根據(jù)色譜洗脫時(shí)間，設(shè)置檢測窗口以及參數(shù)；優(yōu)選地，質(zhì)譜檢測條件如下：電噴霧針電壓：3.2kV，去溶劑氣流速：800L/h，去溶劑氣溫度：400度，錐孔氣流速：50L/h，檢測為陽離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)控，檢測駐留時(shí)間為25ms，質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)控參數(shù)(每個(gè)待測物的特定反應(yīng)離子對、錐孔電壓、碰撞能量等)如下：優(yōu)選地，為了進(jìn)一步縮短色譜洗脫過程，只需要把B相濃度高的時(shí)間提前，進(jìn)一步縮短色譜柱平衡時(shí)間，如此可以使整個(gè)檢測時(shí)間可以少于5min；步驟S4液相色譜分離的洗脫梯度如下時(shí)間(min)流速(mL/min)A％B％曲線值1-0.37525-21.50.375251330.35050643.50.310906540.310906650.3752511該方案的檢測方法采用高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，檢測時(shí)間短，通量高，檢測靈敏度高，特異性好，成本低廉。高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測4種兒茶酚胺代謝物的方法，所述方法包括以下步驟：S11標(biāo)準(zhǔn)品制備：將兒茶酚胺代謝物(甲氧基腎上腺素，甲氧基去甲腎上腺素、香草基杏仁酸，高香草酸)標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈稀釋到若干個(gè)不同濃度備用，每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品中加入等量的含有已知濃度內(nèi)標(biāo)(氘代香草扁桃酸，D3-香草基杏仁酸，D3-VMA；氘代甲氧基腎上腺素，D3-甲氧基腎上腺素，D3-MN)的乙腈溶液；一般來說兒茶酚胺乙腈溶液的濃度均控制在1pmol/L～1μmol/L之間，內(nèi)標(biāo)的濃度為25nmol/L，高速離心后吸取上清液，進(jìn)行凍干；S12衍生化反應(yīng)：避光條件下，利用衍生化試劑丹磺酰氯進(jìn)行衍生化反應(yīng)使得4種兒茶酚胺代謝物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，提高在質(zhì)譜上的信號響應(yīng)信號，衍生化反應(yīng)還加入適量0.1MNa2CO3–NaHCO3緩沖溶液(pH＝11.0)，反應(yīng)條件為35℃避光30min；S13樣品前處理：反應(yīng)完后加入甲酸水溶液把混合溶液pH調(diào)至7左右，再使用低溫離心機(jī)在18000g離心力4℃下對混合溶液進(jìn)行離心分離，取上清液于96孔板用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析；S14液相色譜分離：利用超高壓液相色譜以及相應(yīng)的流動相，在反向C18分析柱上對4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)行分離；優(yōu)選地，液相色譜條件包括：色譜柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18Column:poresizeparticlesize1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色譜柱柱溫：25度；進(jìn)樣量：15μl；流速：0.3ml/min；流動相組成：A相為20mM醋酸銨和0.1％甲酸水溶液，B相為0.1％甲酸-乙腈溶液；洗脫梯度如下：時(shí)間(min)流速(mL/min)A％B％曲線值1-0.37525-230.375251340.3505064100.310906513.50.3109066150.3752511S15串聯(lián)質(zhì)譜檢測：色譜上分離后的4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)入到質(zhì)譜進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式特異性地檢測4種兒茶酚胺代謝物，根據(jù)不同的色譜洗脫時(shí)間，設(shè)置不同的檢測窗口以及參數(shù)；其中，高香草酸保留時(shí)間為5.69min，香草扁桃酸保留時(shí)間為4.87min，甲氧基腎上腺素保留時(shí)間為8.05min，甲氧基去甲腎上腺素保留時(shí)間為8.93min，內(nèi)標(biāo)香草扁桃酸-D3的保留時(shí)間為4.87min，甲氧基腎上腺素-D3的保留時(shí)間為8.93min。優(yōu)選地，質(zhì)譜檢測條件如下：電噴霧針電壓：3.2kV，去溶劑氣流速：800L/h，去溶劑氣溫度：400度，錐孔氣流速：50L/h，檢測為陽離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)控，檢測駐留時(shí)間為25ms，質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)控參數(shù)(每個(gè)待測物的特定反應(yīng)離子對、錐孔電壓、碰撞能量等)如下：S16校正方程：液相色譜上分離出的4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)入到三重四級桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式特異性地檢測4種兒茶酚胺的含量，根據(jù)信號噪音比計(jì)算得到定量檢測限與鑒定檢測限，根據(jù)比值以及已知標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)濃度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖并得到定量校正方程；S21待測樣品處理：取血漿樣本，加入含內(nèi)標(biāo)(氘代香草扁桃酸，D3-香草基杏仁酸，D3-VMA；氘代甲氧基腎上腺素，D3-甲氧基腎上腺素，D3-MN)的乙腈溶液進(jìn)行蛋白沉淀，充分沉淀后第一次離心，移取血漿上清液并進(jìn)行冷凍干燥；S22衍生化反應(yīng)：避光條件下，利用衍生化試劑丹磺酰氯對血漿上清液進(jìn)行衍生化處理使得兒茶酚胺發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；反應(yīng)完后加入甲酸水溶液調(diào)節(jié)使pH＝7，第二次離心后取樣品上清液于96孔板上備用，用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析；S23液相色譜分離：利用超高壓液相色譜以及相應(yīng)的流動相，在反向C18分析柱上對4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)行分離；優(yōu)選地，液相色譜條件包括：色譜柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18Column:poresizeparticlesize1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色譜柱柱溫：25度；進(jìn)樣量：15μl；流速：0.3ml/min；流動相組成：A相為20mM醋酸銨和0.1％甲酸水溶液，B相為0.1％甲酸-乙腈溶液；洗脫梯度如下：時(shí)間(min)流速(mL/min)A％B％曲線值1-0.37525-230.375251340.3505064100.310906513.50.3109066150.3752511S24串聯(lián)質(zhì)譜檢測：色譜上分離后的4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)入到質(zhì)譜進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式特異性地檢測4種兒茶酚胺代謝物，根據(jù)不同的色譜洗脫時(shí)間，設(shè)置不同的檢測窗口以及參數(shù)；質(zhì)譜檢測條件如下：電噴霧針電壓：3.2kV，去溶劑氣流速：800L/h，去溶劑氣溫度：400度，錐孔氣流速：50L/h，檢測為陽離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)控，檢測駐留時(shí)間為25ms，質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)控參數(shù)(每個(gè)待測物的特定反應(yīng)離子對、錐孔電壓、碰撞能量等)如下：S25兒茶酚胺代謝物的含量計(jì)算：質(zhì)譜檢測得到兒茶酚胺代謝物與內(nèi)標(biāo)的比值，將比值代入到定量校正方程，計(jì)算得到血漿中兒茶酚胺代謝物的含量。優(yōu)選地，所述步驟S14和/或S23中的液相色譜分離的洗脫梯度如下：本發(fā)明的高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測4種兒茶酚胺代謝物的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：1)可以同時(shí)定性并精準(zhǔn)定量人血漿中的4種兒茶酚胺代謝物，包括甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素、高香草酸和香草扁桃酸；2)采用乙腈進(jìn)行蛋白沉淀，丹磺酰氯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，提取后便可使用液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，前處理步驟簡單，并且可以有效去除血漿基質(zhì)干擾，特異性好；并且通過氮磺酰氯衍生化后，能有效提高檢測靈敏度；3)采用高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，檢測時(shí)間短，通量高，檢測靈敏度高，特異性好，成本低廉。附圖說明圖1、本發(fā)明的檢測方法的流程示意圖；圖2、各兒茶酚胺代謝物的色譜洗脫出峰的絕對保留時(shí)間；圖3、高香草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖4、香草扁桃酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖5、甲氧基腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖6、甲氧基去甲腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施方式為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員可以更好地理解本發(fā)明，從而對本發(fā)明的保護(hù)范圍作出明確的限定；下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明作出進(jìn)一步詳細(xì)的說明。4種兒茶酚胺(甲氧基腎上腺素，甲氧基去甲腎上腺素、香草基杏仁酸，高香草酸)標(biāo)準(zhǔn)品以及相應(yīng)同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)(氘代香草扁桃酸，D3-VMA，氘代甲氧基腎上腺素，D3-MN)均采購自SigmaAldrich公司。標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)首先用乙腈進(jìn)行溶解，然后保存在-80℃，需要進(jìn)行實(shí)際樣品檢測時(shí)，再利用乙腈將這些內(nèi)標(biāo)稀釋到約25nM濃度作為工作液。1.標(biāo)準(zhǔn)品制備：分別取0.3ml8個(gè)不同濃度的兒茶酚胺代謝物乙腈溶液到1.5mlEP管中，再分別加入0.9ml低溫保存的含內(nèi)標(biāo)氘代香草扁桃酸和氘代甲氧基腎上腺素乙腈溶液，用旋渦混合器充分混合后，用1mL的移液槍轉(zhuǎn)移1mL含內(nèi)標(biāo)氘代的兒茶酚胺代謝物乙腈溶液到另外一個(gè)1.5mlEP管，然后用離心濃縮冷凍系統(tǒng)凍干；凍干后在避光條件下，向上述1.5mlEP管加入150μl4mg/mL的丹磺酰氯乙腈溶液和50μl0.1MpH＝11.0的Na2CO3–NaHCO3緩沖溶液，旋渦混合30s，然后在35℃避光反應(yīng)30min；反應(yīng)完后通過加入5μl15％的甲酸水溶液把混合溶液pH調(diào)到7左右，混合組分使用低溫離心機(jī)在18000g離心力4℃下離心5min，取上清液100μl于96孔板用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析；液相色譜分離：利用超高壓液相色譜以及相應(yīng)的流動相，在反向C18分析柱上對樣品上清液中兒茶酚胺代謝物進(jìn)行色譜洗脫分離，通過控制洗脫條件，分離出腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴胺；液相色譜條件為：色譜柱：WatersACQUITYUPLCBEHC18Column:poresizeparticlesize1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色譜柱柱溫：25度；進(jìn)樣量：15μl；流速：0.3ml/min；流動相組成：A相(20mM醋酸銨和0.1％甲酸水溶液，體積比)，B相(0.1％甲酸-乙腈溶液，體積比)；洗脫梯度如下所示：3.質(zhì)譜檢測并制標(biāo)準(zhǔn)曲線：液相色譜上分離出的4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)入到三重四級桿質(zhì)譜進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式特異性地檢測4種兒茶酚胺代謝物的含量，并畫制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；色譜上分離后的4種兒茶酚胺代謝物進(jìn)入到WatersXevoTQD質(zhì)譜進(jìn)行檢測，利用三重四級桿質(zhì)譜中的多重反應(yīng)監(jiān)控模式特異性地檢測4種兒茶酚胺代謝物，根據(jù)不同的色譜洗脫時(shí)間，設(shè)置不同的檢測窗口以及參數(shù)；香草扁桃酸保留時(shí)間為4.88min，高香草酸保留時(shí)間為5.69min，甲氧基腎上腺素保留時(shí)間為8.05min，甲氧基去甲腎上腺素保留時(shí)間為8.93min，內(nèi)標(biāo)香草扁桃酸-D3保留時(shí)間為4.88min，內(nèi)標(biāo)甲氧基腎上腺素-D3保留時(shí)間為8.05min。如圖2所示，樣品通過超高壓液相色譜分離后，不同的兒茶酚胺代謝物質(zhì)在不同洗脫時(shí)間出峰，并且被質(zhì)譜選擇反應(yīng)監(jiān)控模式檢測到，從上到下檢測到的物質(zhì)分別為：D3-甲氧基腎上腺素，甲氧基腎上腺素，甲氧基去甲腎上腺素，高香草酸，香草扁桃酸以及D3-香草扁桃酸。質(zhì)譜為WatersXevoTQDIVD(Waters,Milford,MA)；質(zhì)譜檢測條件如下：電噴霧針電壓：3.2kV，去溶劑氣流速：800L/h，去溶劑氣溫度：400度，錐孔氣流速：50L/h，檢測為陽離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)控，檢測駐留時(shí)間為25ms，每個(gè)待測物的特定反應(yīng)離子對、錐孔電壓、碰撞能量等，如下表所示(不同類型儀器，碰撞能量、錐孔電壓值有所不同，需要獨(dú)立優(yōu)化)：質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)控參數(shù)如下：多重反應(yīng)監(jiān)控通過兩次篩選，即第一個(gè)四級桿進(jìn)行特定母離子篩選，第二個(gè)四級桿進(jìn)行母離子碎裂產(chǎn)生子離子，第三個(gè)四級桿進(jìn)行特定子離子篩選，具有非常好的檢測特異性。可以通過選擇反應(yīng)監(jiān)控檢測到的離子流，以及對應(yīng)的保留時(shí)間，來確定兒茶酚胺代謝物的檢測，再利用添加已知量的香草扁桃酸內(nèi)標(biāo)和甲氧基腎上腺素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量。表1HVA標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表2VMA標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表3MN標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表4NMN標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表1-表4是兒茶酚胺代謝物的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖3、圖4、圖5、圖6；檢測限定義為信噪比>3，定量限定義為信噪比>10，保留時(shí)間為色譜洗脫出峰的絕對保留時(shí)間，所有檢測物質(zhì)的相關(guān)系數(shù)R2均>0.99，每種兒茶酚胺的保留時(shí)間，檢出限，定量限，線性范圍以及定量校正方程分別如圖中所示；通過三日的精密度測試，包括低、中、高三個(gè)濃度，日內(nèi)日間精密度RSD均小于15％，表明檢測結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)。4種兒茶酚胺代謝物的保留時(shí)間、檢測限、定量限、線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)如下：表5兒茶酚胺代謝物保留時(shí)間及線性范圍總結(jié)4.血漿中兒茶酚胺代謝物的檢測：取0.3ml血漿樣品到1.5mlEP管中，再加入0.9ml低溫保存的含內(nèi)標(biāo)氘代香草扁桃酸和氘代甲氧基腎上腺素乙腈溶液，用旋渦混合器充分混合后，用1mL的移液槍轉(zhuǎn)移1mL含內(nèi)標(biāo)氘代香草扁桃酸的兒茶酚胺乙腈溶液到另外一個(gè)1.5mlEP管，然后用真空冷凍干燥器凍干；凍干后在避光條件下，向上述1.5mlEP管加入150μl4mg/mL的丹磺酰氯乙腈溶液和50μl0.1MpH＝11.0的Na2CO3–NaHCO3緩沖溶液，旋渦混合30s，然后在35℃避光反應(yīng)30min；反應(yīng)完后通過加入5μl15％的甲酸水溶液把混合溶液pH調(diào)到7左右，混合組分使用低溫離心機(jī)在18000g離心力4℃下離心5min，取上清液100μl于96孔板用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上樣分析；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析同步驟2)和3)，質(zhì)譜檢測得到兒茶酚胺代謝物與內(nèi)標(biāo)的比值，將比值代入到定量校正方程，計(jì)算得到血漿中兒茶酚胺代謝物的含量。本發(fā)明利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血漿中兒茶酚胺的方法創(chuàng)新型的應(yīng)用高通量液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀進(jìn)行兒茶酚胺的檢測，具有以下有益效果：采用乙腈進(jìn)行蛋白沉淀，丹磺酰氯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，提取后使用液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀檢測，前處理步驟簡單，可以有效去除血漿基質(zhì)干擾，特異性好；通過丹磺酰氯衍生化后，能有效提高檢測靈敏度；高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，同時(shí)定性并精準(zhǔn)定量血漿中包括甲氧基腎上腺素，甲氧基去甲腎上腺素，高香草酸，香草扁桃酸等4種兒茶酚胺代謝物，檢測時(shí)間短，通量高，檢測靈敏度高，特異性好，成本低廉。在本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施例中，色譜洗脫條件可以進(jìn)一步縮短，只需要把B相濃度高的時(shí)間提前，進(jìn)一步縮短色譜柱平衡時(shí)間，從而使整體檢測時(shí)間可以少于5min，洗脫條件如下：時(shí)間(min)流速(mL/min)A％B％曲線值1-0.37525-21.50.375251330.35050643.50.310906540.310906650.3752511以上對本發(fā)明實(shí)施例所提供的高通量液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測方法以及檢測4種兒茶酚胺代謝物的方法，進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個(gè)例對本發(fā)明實(shí)施例的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明實(shí)施例的方法及其核心思想；同時(shí)，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的思想，在具體實(shí)施方式以及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。當(dāng)前第1頁1 2 3