本發(fā)明屬于畜牧業(yè)領(lǐng)域，尤其是涉及一種高效液相色譜測定泰拉霉素含量的方法。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)在畜牧業(yè)規(guī)?；呀?jīng)是普遍現(xiàn)象。在豬、牛的規(guī)?；B(yǎng)殖中，呼吸道感染是難控制的疫病之一，并且對畜牧業(yè)生產(chǎn)危害嚴重。泰拉霉素在畜牧業(yè)中的應(yīng)用，能夠有效的降低和避免由呼吸道感染導(dǎo)致的經(jīng)濟損失。泰拉霉素是廣譜抗菌藥，其具有吸收迅速、生物利用度高、低殘留、半衰期長、藥效持久、胃腸外單次給藥即能提供全程治療等特點，主要用于放線桿菌、支原體、巴氏桿菌、副嗜血桿菌引起的豬、牛的呼吸系統(tǒng)疾病。泰拉霉素的使用減少了病原傳播，便于規(guī)?；芾?。泰拉霉素在畜牧業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著重要的作用。為了保障畜牧養(yǎng)殖業(yè)和社會食品安全，建立簡便、準確、可靠的泰拉霉素質(zhì)量控制方法十分必要。泰拉霉素，別名土拉霉素，英文名：Tulathromycin，為動物專用的大環(huán)內(nèi)酯類半合成抗生素，屬三胺類廣譜抗生素，CAS號為217500-96-4，分子式為C41H79N3O12，分子量806，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種高效液相色譜測定泰拉霉素含量的方法，準確可靠，檢測范圍大，靈敏度高和準確性高。為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的：一種高效液相色譜測定泰拉霉素含量的方法，該方法采用島津LC-20AT高效液相色譜儀，采用紫外檢測器，檢測波長為210nm，進樣量為15μl，包括如下步驟：(1)色譜條件：色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱；流動相為乙腈與0.01％的磷酸溶液的混合物、乙腈與水的混合物或甲醇與水的混合物中的一種，其中乙腈與0.01％的磷酸溶液的體積比為60-90：10-40，乙腈與水的體積比為60-90：10-40，甲醇與水的體積比為60-90：10-40；流速為0.8-1.2ml/min，柱溫為20-40℃；(2)標準曲線繪制：稱量對照品適量，置于容量瓶中，用流動相溶解，并稀釋至刻度，作為泰拉霉素標準溶液儲備液，將上述標準溶液儲備液逐級稀釋制成泰拉霉素含量為50、100、200、500、800、1000μg/ml的溶液，分別按所述的步驟(1)的色譜條件測定，分別計算同一保留時間下的峰面積，以含量x為橫坐標，以峰面積y為縱坐標，做出標準曲線方程y＝f(x)，含量為50-1000μg/ml；(3)樣品處理：稱取樣品適量，用流動相稀釋制成適當濃度的樣品溶液，搖勻，用0.45μm有機濾頭過濾；(4)檢測待測泰拉霉素樣品中泰拉霉素的含量：將待測泰拉霉素樣品溶液分別按所述的步驟(1)的色譜條件測定，計算同一保留時間下的峰面積，帶入所述的步驟(2)所得的標準曲線方程，計算得出待測泰拉霉素樣品溶液的濃度，再通過樣品的取樣量計算出樣品中泰拉霉素的含量。優(yōu)選的，所述的步驟(1)中流動相為乙腈與0.01％的磷酸溶液的混合物，其中乙腈與0.01％的磷酸溶液的體積比為60-90：40-10；優(yōu)選的乙腈與0.01％的磷酸溶液的體積比為80：20。流動相中選用的有機溶劑為乙腈，能夠很好地與檢測波長(檢測波長較低)相匹配。0.01％磷酸溶液作為流動相可以很好地改善峰形對稱性不好和拖尾的問題。優(yōu)選的，所述的步驟(1)中流速為1.0ml/min。優(yōu)選的，所述的步驟(1)中柱溫為30℃。所述的保留時間為5.628min。相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的高效液相色譜測定泰拉霉素含量的方法具有以下優(yōu)勢：本發(fā)明所述的高效液相色譜測定泰拉霉素含量的方法經(jīng)過精密度試驗、線性關(guān)系試驗和加樣回收試驗等對方法進行了驗證，結(jié)果表明該方法準確可靠，檢測范圍大，靈敏度高和準確性高。附圖說明構(gòu)成本發(fā)明的一部分的附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當限定。在附圖中：圖1為泰拉霉素的結(jié)構(gòu)式；圖2為本發(fā)明實施例所述的泰拉霉素對照品的檢測譜圖；圖3為本發(fā)明實施例所述的泰拉霉素的線性關(guān)系圖與回歸方程。具體實施方式除非另外說明，本文中所用的術(shù)語均具有本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)理解的含義，為了便于理解本發(fā)明，將本文中使用的一些術(shù)語進行了下述定義。下面結(jié)合實施例來詳細說明本發(fā)明。一種高效液相色譜測定泰拉霉素含量的方法，該方法采用島津LC-20AT高效液相色譜儀，采用紫外檢測器，檢測波長為210nm，進樣量為15μl，包括如下步驟：(1)色譜條件：色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的反相色譜柱；流動相為乙腈與0.01％的磷酸溶液的混合物，其中乙腈與0.01％的磷酸溶液的體積比為80：20；流速為1.0ml/min，柱溫為30℃；(2)標準曲線繪制：精密稱量泰拉霉素對照品100mg，置于50ml容量瓶中，用流動相溶解，并稀釋至刻度，作為泰拉霉素標準溶液儲備液。將上述儲備液逐級稀釋制成泰拉霉素含量為50、100、200、500、800、1000μg/ml的溶液，分別按所述的步驟(1)的色譜條件測定，分別計算同一保留時間下的峰面積，以含量x為橫坐標，以峰面積y為縱坐標，得到標準曲線方程如下：y＝188001191x+196080480，R2＝0.9998，如圖3所示結(jié)果表明泰拉霉素在50-1000μg/ml范圍內(nèi)，峰面積和濃度成以上關(guān)系。(3)檢測待測泰拉霉素原料藥的含量：精密稱取原料藥，用流動相稀釋制成適當濃度的溶液，制成300μg/ml的溶液，搖勻，用0.45μm有機濾頭過濾；計算同一保留時間下的峰面積，帶入步驟(2)所得的標準曲線方程，計算出上機待測泰拉霉素樣品溶液的濃度，再通過樣品的取樣量計算出泰拉霉素原料藥中泰拉霉素的含量，泰拉霉素含量的計算方法如下：根據(jù)上式，計算出泰拉霉素原料藥含泰拉霉素98.99％(稀釋因子為樣品稀釋倍數(shù)的倒數(shù))；(4)精密度考察：對同一泰拉霉素原料藥樣品，連續(xù)6次進樣，峰面積如表1所示，譜圖如圖2所述。表1泰拉霉素6次重復(fù)進樣的面積次數(shù)123456峰面積372362037247903723608372403237235193724864峰面積RSD為0.02％，結(jié)果表明，本HPLC法檢測泰拉霉素含量精密度高，重現(xiàn)性好。(6)加樣回收試驗：精密稱取已知含量的泰拉霉素樣品適量，用流動相稀釋，制成供試品的濃度分別為上機濃度300μg/ml的80％、100％、120％，使供試品溶液中的泰拉霉素濃度分別在泰拉霉素標準曲線的低、中、高區(qū)域，按本發(fā)明項下的操作，依法測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為99.84％，RSD為0.08％，表明該方法加樣回收率好。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁1 2 3