本發(fā)明屬于蛋白和核酸檢測領(lǐng)域，具體的是肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

傳統(tǒng)蛋白質(zhì)檢測是以特定抗體同待檢測的蛋白質(zhì)結(jié)合，通過形成特定的抗原-抗體復(fù)合物實現(xiàn)的檢測技術(shù)。以抗體捕捉待檢測蛋白為例，是在固相介質(zhì)上包被抗體，然后與待檢測蛋白樣品孵育，洗去未結(jié)合的蛋白，最后用特異性識別抗體的標(biāo)記抗體去檢測結(jié)合的抗體，許多檢測方法都是間接檢測的。標(biāo)記包括放射性同位素，有機染料等。檢測方法中ELISA檢測(酶聯(lián)免疫吸附檢測)是臨床上廣泛應(yīng)用的。

核酸與蛋白在生物體內(nèi)相互作用是很普遍的現(xiàn)象。單鏈DNA能自身折疊形成二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)等，可以形成莖環(huán)、口袋、發(fā)卡等結(jié)構(gòu)，這對核酸和蛋白質(zhì)相互作用具有非常重要的作用。通過SELEX技術(shù)(指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術(shù))進行體外分離血清標(biāo)志物的適配體，適配體只識別特異性的血清標(biāo)志物，而與其他的蛋白不結(jié)合，通過qRT-PCR(實時熒光定量PCR)能夠動態(tài)檢測血清樣品，能夠快速分析樣品中靶分子的量，并對其進行定量，進而為肺癌檢測提供了一種新的分子生物學(xué)檢測方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒，通過qRT-PCR同時檢測適配體和基因序列，實現(xiàn)血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測的技術(shù)方法，對研究蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)具有重要意義。本發(fā)明的另一目的是提供一種肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒的應(yīng)用方法。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是：肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒，其特征是：所述試劑盒主要包括待檢測血清樣品、瓊脂磁珠、洗脫液、檢測試劑、qRT-PCR檢測體系；

所述待檢測血清樣品含有被檢測標(biāo)志物適配體和基因；

所述瓊脂磁珠用于形成瓊脂磁珠-肺癌血清復(fù)合物；

所述洗脫液是1×Binding buffer(結(jié)合緩沖液)+1％tween-20；

所述檢測試劑是肺癌血清標(biāo)志物適配體+1×Binding buffer混合液；

所述qRT-PCR檢測體系是含有靶分子適配體和基因探針和引物的常規(guī)檢測試劑。

肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒的應(yīng)用，其特征是：包括以下步驟：

(1)將瓊脂磁珠加入到待檢測血清樣品中，37℃孵育30min，形成瓊脂磁珠-待檢測血清樣品復(fù)合物，利用磁分離，分離出瓊脂磁珠，用洗脫液洗4次，每次1min，保留洗脫后的瓊脂磁珠；

(2)將上述步驟(1)中洗脫后的瓊脂磁珠加入到檢測試劑中，檢測試劑中肺癌血清標(biāo)志物適配體與瓊脂磁珠-靶蛋白形成復(fù)合物結(jié)構(gòu)，將未結(jié)合形成的肺癌血清標(biāo)志物適配體與瓊脂磁珠-靶蛋白形成復(fù)合物結(jié)構(gòu)用洗脫液洗掉，洗4次，每次1min，棄去洗脫液保留瓊脂磁珠；

(3)在步驟(2)中保留下的瓊脂磁珠中加入100μL純水，95℃下反應(yīng)5min，吸取上清；

(4)將步驟(3)中的上清進行擴增基因常規(guī)監(jiān)測。

所述待檢測血清樣品為去除血細胞、血脂的血清。

所述基因是病原體、細菌、細胞生物體內(nèi)的基因序列。

所述步驟(2)中瓊脂磁珠上連接肺癌血清標(biāo)志物和特異性適配體，與靶蛋白結(jié)合形成瓊脂磁珠-肺癌血清復(fù)合物。

所述肺癌血清標(biāo)志物適配體是由通過SELEX技術(shù)篩選得到的高特異性血清標(biāo)志物適配體組成，適配體序列可以進一步優(yōu)化，從而提高適配體的穩(wěn)定性。

所述擴增基因常規(guī)監(jiān)測是qRT-PCR檢測、基因擴增檢測、生物芯片檢測中的一種。

所述肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測是指篩選得到高特異性、強親和力的肺癌血清標(biāo)志物適配體，將靶蛋白信號轉(zhuǎn)換成核酸信號，與基因在分子水平上統(tǒng)一檢測。

本發(fā)明所述肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒的應(yīng)用，有益效果是：本發(fā)明的試劑盒是通過適配體與靶分子結(jié)合將靶分子信號轉(zhuǎn)換成核酸信號完成蛋白和基因同時檢測的方法，利用qRT-PCR進行動態(tài)及定量檢測。本發(fā)明操作簡便，實用性強，可以組裝成試劑盒或構(gòu)建成生物芯片能夠廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究與臨床診斷，具有較高的經(jīng)濟效益和社會公益。

附圖說明

圖1為肺癌血清核酸蛋白qRT-PCR檢測方法流程圖。

圖2為肺癌血清適配體特異性鑒定實時熒光定量-PCR圖。

圖中：1-陽性；2-陰性；3-空白；4，5-肺癌血清；6，7-正常人血清

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進行詳細說明，但本發(fā)明并不局限于具體實施例。

實施例

肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒，主要包括待檢測血清樣品、瓊脂磁珠、洗脫液、檢測試劑、qRT-PCR檢測體系；

所述待檢測血清樣品含有被檢測標(biāo)志物適配體和基因；

所述瓊脂磁珠用于形成瓊脂磁珠-肺癌血清復(fù)合物；

所述洗脫液是1×Binding buffer+1％tween-20；

所述檢測試劑是肺癌血清標(biāo)志物適配體+1×Binding buffer混合液；

所述qRT-PCR檢測體系是含有靶分子適配體和基因探針和引物的常規(guī)檢測試劑。

如圖1所示的肺癌血清標(biāo)志物適配體和基因同時檢測試劑盒應(yīng)用方法，包括以下步驟：

(1)制備血清樣品：采血，3000rpm離心5min，分離血清，4℃保存；

(2)瓊脂磁珠-肺癌血清標(biāo)志物復(fù)合物的形成：包被肺癌血清瓊脂磁珠50μL，加入200μL制備好的血清樣品，形成瓊脂磁珠-血清復(fù)合物，37℃，孵育30min，洗出未結(jié)合的上清液，用1×Binding buffer+1％tween-20 200μL洗4次，每次1min，加入肺癌血清腫瘤標(biāo)志物適配體孵育30min，形成瓊脂磁珠-血清-適配體復(fù)合物結(jié)構(gòu)，用1×Binding buffer+1％tween-20 200μL洗4次，每次1min，用磁分離，分離出瓊脂磁珠，然后在瓊脂磁珠中加入100μL純水，95℃，5min，吸取上清；

(3)qRT-PCR檢測：將(2)中最后收集的上清加入到qRT-PCR檢測檢測體系中，進行動態(tài)檢測及定量分析；

(4)通過計算機采集數(shù)據(jù)、分析、整理數(shù)據(jù)，得到血清標(biāo)志物和基因的分子拷貝數(shù)。

以上內(nèi)容是結(jié)合優(yōu)選技術(shù)方案對本發(fā)明所做的進一步詳細說明，不能認定發(fā)明的具體實施僅限于這些說明。對本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明的構(gòu)思的前提下，還可以做出簡單的推演及替換，都應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明的保護范圍。