1.一種基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺,其特征在于:包括由微流控芯片制成的微流控通道及其內(nèi)的SERS襯底,以及SERS探針和探測抗體;
所述微流控通道為十字交叉形,橫向通道內(nèi)為所述SERS襯底,垂直的縱向通道內(nèi)通入所述SERS探針和探測抗體,交叉區(qū)域即為檢測區(qū)域;
所述SERS襯底由金屬納米粒子通入所述微流控通道內(nèi)得到,所述SERS襯底上連接有捕獲抗體;
所述SERS探針由金屬納米粒子分別與拉曼報告分子、二抗連接,然后用BSA進行金屬表面空隙的填補制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺,其特征在于:所述微流控芯片為PDMS芯片。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺,其特征在于:所述捕獲抗體不少于兩種。
4.一種基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:包括以下步驟:
首先,制備SERS探針:
步驟1).制備金屬納米粒子;
步驟2).在步驟1)中得到的金屬納米粒子表面接上拉曼報告分子;
步驟3).在步驟2)中將連接有拉曼報告分子的金屬納米粒子表面連接上捕獲抗體;
步驟4).在步驟3)后使用BSA填補金屬納米粒子表面的空隙形成SERS探針;
其次,制備SERS襯底:
步驟5).將PDMS芯片貼合在羥基化的玻璃片上,形成微流控通道;
步驟6).向所述微流控通道內(nèi)通入帶正電的溶液;
步驟7).將步驟1)中的金屬納米粒子通入所述微流控通道內(nèi),得到SERS襯底;
步驟8).重復步驟6)和步驟7)兩到三次,形成多層SERS襯底;
步驟9).在步驟8)得到的SERS襯底上連接上捕獲抗體;
步驟10).在步驟9)的基礎(chǔ)上通入BSA進行填補金屬表面空隙;
然后,抗體檢測:
步驟11).取下PDMS芯片等待玻璃表面干燥后,在與原來PDMS芯片垂直的方向貼合上新的PDMS芯片;
步驟12).在步驟11)的基礎(chǔ)上通入BSA;
步驟13).在步驟12)后進一步向新的微流通道內(nèi)通入待測溶液;
步驟14).在步驟13)的基礎(chǔ)上向新的微流控通道內(nèi)通入與步驟9)對應(yīng)的探測抗體;
步驟15).在步驟14)后將步驟4)所制備的SERS探針通入到新的微流控通道內(nèi);
最后,SERS光譜成像:
步驟16).對步驟11)所形成的通道交叉區(qū)域進行SERS光譜成像。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:所述步驟2)、3)、4)、9)、10)、12)中的拉曼報告分子、捕獲抗體、BSA通過化學鍵插入到金屬納米粒子表面。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:所述步驟6)、7)、8)、9)、10)、12)、13)、14)、15)中向微流控通道內(nèi)通入試劑的方法為通過注射泵將裝有試劑的注射器中的試劑通過PE管連接鋼針,然后鋼針插入到所述微流控通道內(nèi)的方式注射,通過調(diào)注射泵參數(shù)控制注射的試劑量和注射速率。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:所述步驟7)中的所述SERS襯底是利用靜電吸附的原理形成。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:所述步驟13)和步驟14)中,待測溶液中的腫瘤標志物與捕獲抗體間的連接為抗原和抗體間的特異性識別。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:所述步驟15)中所述SERS探針與探測抗體的識別為SERS探針上的二抗與所述探測抗體的特異性識別。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于SERS檢測技術(shù)和微流控芯片的多種腫瘤標志物檢測平臺的方法,其特征在于:所述步驟13)~16)中所述待測試劑中若含有腫瘤標志物,則通入探測抗體,會形成“三明治”結(jié)構(gòu);繼續(xù)通SERS探針,即可檢測該“三明治”結(jié)構(gòu)是否已形成。