本發(fā)明涉及分子生物學和醫(yī)學領(lǐng)域，尤其是涉及一種用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型及方法。
背景技術(shù)：
：隨著癌癥發(fā)病率和死亡率的增加，癌癥不僅是中國人死亡的主要原因，也是嚴重威脅人類健康和制約經(jīng)濟社會發(fā)展的重大公共健康問題。腫瘤的早期診斷意味著可以提早干預(yù)治療，對患者的預(yù)后意義重大。目前，用于腫瘤的診斷主要依賴于傳統(tǒng)的腫瘤組織臨床病征、放射影像、生化檢測和病理等方面的，而且其中大部分方法有創(chuàng)的，給患者帶來痛苦，且對實施此項技術(shù)的醫(yī)師有較高要求。對腫瘤的無創(chuàng)檢查方法主要是血清腫瘤標志物，例如AFP、癌胚抗原CEA、CA199等，但是診斷的靈敏度和特異性較低。因此，尋找具有較高靈敏度和特異性的腫瘤標志物對腫瘤患者的早診早治具有重要意義。為了降低獲取的腫瘤組織局限性，基于血液的液體活檢方法對組織樣本分析成為近些年的流行趨勢，目前主要包括血漿游離DNA（cfDNA）和循環(huán)腫瘤細胞(CTC)的檢測。迄今為止，對于腫瘤進行早期篩查的液體活檢方法尚未完全成熟，原因是血液中的分子無法特異性描述原發(fā)性腫瘤的特征。近年來的研究顯示，對腫瘤相關(guān)血小板(tumoreducatedplatelet)的檢測可能會使基于腫瘤血液的癌癥診斷變得更有效率。血小板，是外周血中第二豐富的細胞類型，來源于骨髓巨核細胞的循環(huán)無核碎片，它的顯著特征是可止血和促進傷口愈合?，F(xiàn)有技術(shù)中，還沒有對應(yīng)成熟的技術(shù)利用腫瘤相關(guān)血小板對腫瘤進行較為準確的診斷。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型及方法，不僅可作為腫瘤早期診斷和罹患風險評估的生物標志物組合，檢測可獲得良好的腫瘤診斷價值，同時能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤早期篩查、輔助腫瘤病理鑒定及臨床診斷，提高患者的生存率。為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：一種用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型，該模型包括PCR檢測特異性引物，所述PCR檢測特異性引物包括SEQIDNO.1的F端引物和RT引物、SEQIDNO.2的F端引物和RT引物、SEQIDNO.3的F端引物和RT引物、SEQIDNO.4的F端引物和RT引物、SEQIDNO.5的F端引物和RT引物、SEQIDNO.6的F端引物和RT引物、SEQIDNO.7的F端引物和RT引物、SEQIDNO.8的F端引物和RT引物以及SEQIDNO.9的F端引物和RT引物。進一步地，所述PCR檢測特異性引物用以臨床診斷腫瘤血小板RNA生物標志物組合，所述腫瘤血小板RNA生物標志物組合包括以下血小板RNA：CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)。進一步地，所述腫瘤血小板RNA生物標志物組合在使用時按照以下公式系數(shù)進行分配，所述公式為：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)。本發(fā)明還包括一種用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測方法，該方法包括以下步驟：1)制備樣本：制備待測人血漿樣本，以健康人血漿樣本作為正常對照；2)提取RNA：提取血小板總RNA；3)逆轉(zhuǎn)錄：將血小板總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；4)PCR檢測：以cDNA為模板，在PCR檢測特異性引物和實時定量嵌合熒光法PCR檢測試劑盒的聯(lián)合應(yīng)用下進行實時熒光定量PCR技術(shù)檢測SEQIDNO.1—SEQIDNO.9在待測人血小板和健康人血小板中的表達量，并采用2ΔCt表示待測樣本中目的RNA表達量相對于管家基因GAPDH(ENSG00000111640)變化的倍數(shù)；5)用算式計算Y值：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)；ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164在血小板中的表達量(2ΔCt值)，ΔCt=目的基因的Ct值–內(nèi)參基因(GAPDH)平均Ct值,目的基因Ct值為用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測到的目的CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)基因的Ct值；6)結(jié)果評判：當Y值小于5.28時判為陽性(罹患腫瘤)，反之為陰性(未罹患腫瘤)。基于上述技術(shù)方案，相比于現(xiàn)有技術(shù)本發(fā)明具有以下優(yōu)點：本發(fā)明不僅可以作為腫瘤早期診斷和罹患風險評估的生物標志物組合，檢測可獲得良好的腫瘤診斷價值，同時可以實現(xiàn)腫瘤早期篩查、輔助腫瘤病理鑒定及臨床診斷，提高患者的生存率。附圖說明圖1為本發(fā)明的工作流程圖。圖2為本發(fā)明中腫瘤血小板RNA生物標志物組合聯(lián)合檢測的ROC曲線圖。圖3為腫瘤患者和健康人的Y值分布圖。具體實施方式下面結(jié)合附圖和具體的實施例來對本發(fā)明用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型及方法做進一步地詳細闡述，以求更為清楚明了地理解其結(jié)構(gòu)類型和使用方式，但不能以此來限定本發(fā)明專利的保護范圍。一種用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型，該模型包括PCR檢測特異性引物，所述PCR檢測特異性引物包括SEQIDNO.1的F端引物和RT引物、SEQIDNO.2的F端引物和RT引物、SEQIDNO.3的F端引物和RT引物、SEQIDNO.4的F端引物和RT引物、SEQIDNO.5的F端引物和RT引物、SEQIDNO.6的F端引物和RT引物、SEQIDNO.7的F端引物和RT引物、SEQIDNO.8的F端引物和RT引物以及SEQIDNO.9的F端引物和RT引物。所述PCR檢測特異性引物用以臨床診斷腫瘤血小板RNA生物標志物組合，所述腫瘤血小板RNA生物標志物組合包括以下血漿：CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)。所述腫瘤血小板RNA生物標志物組合在使用時按照以下公式系數(shù)進行分配，所述公式為：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)。表1所述RNA的SEQ-ID以及其正反向引物SEQ-ID基因名ForwardprimerReverseprimer1CD79A(ENSG00000105369)CATTGATGGTGAGCCTGGGTCGGCTGTGATGATTCGGT2CD81(ENSG00000110651)GTATCTGGAGCTGGGAGACAATTGGCGATCTGGTCCTTGTT3SYTL1(ENSG00000142765)TCTCTCGACCGCATGCTCATCGTAGTGCAGCGCGAAGT4CENPC(ENSG00000145241)TCCGGTTTTCAACGAGACTCTTTCAACTTCGCCCAGAAAGA5TTN(ENSG00000155657)CCTTCGAATTCCGCCTAAAATTTTTCAATGTGGAACCTCCC6RHOH(ENSG00000168421)TTTCTTCGGCATTCTGCAACCCTCCAAAGCCTAGTCTTCAA7ZNF101(ENSG00000181896)TGCTGGACACAAACGATCTGATTGGTGTTACTGTGCGCCGT8TRABD2A(ENSG00000186854)TGCTCCCCAGGGACATCTACTTCCGGCAATAGCATTGAAGA9TRAC(ENSG00000229164)TCAGCGATTCAGCCTCCTATCAGGCCAGACAGTCAACTGA如圖1所示，一種用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測方法，該方法包括以下步驟：1)制備樣本：制備待測人血漿樣本，以健康人血漿樣本作為正常對照；2)提取RNA：提取血小板總RNA；3)逆轉(zhuǎn)錄：將血小板總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；4)PCR檢測：以cDNA為模板，在PCR檢測特異性引物和實時定量嵌合熒光法PCR檢測試劑盒的聯(lián)合應(yīng)用下進行實時熒光定量PCR技術(shù)檢測SEQIDNO.1—SEQIDNO.9在待測人血小板和健康人血小板中的表達量，并采用2ΔCt表示待測樣本中目的RNA表達量相對于管家基因GAPDH(ENSG00000111640)變化的倍數(shù)；5)用算式計算Y值：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)；其中，ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)，GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164)在腫瘤血小板中的表達量(2ΔCt值)；ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164在血小板中的表達量(2ΔCt值)，ΔCt=目的基因的Ct值–內(nèi)參基因(GAPDH)平均Ct值,目的基因Ct值為用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測到的目的CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)基因的Ct值；6)結(jié)果評判：當Y值小于5.28時判為陽性(罹患腫瘤)，反之為陰性(未罹患腫瘤)。實施例采用上述的腫瘤血小板RNA腫瘤診斷的檢測方法對50例腫瘤患者及20健康人(正常對照)血漿中目的腫瘤血小板RNA的表達量進行檢測，即CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854),TRAC(ENSG00000229164)的表達量(2△Ct值)。具體檢測方法，包括以下步驟:1.腫瘤血小板RNA的采集與保存采集受試者靜脈血4ml于EDTA抗凝管中，輕輕顛倒數(shù)次后靜置10min（室溫環(huán)境下在1h內(nèi)離心分離血漿），于室溫120g離心20min，分兩層，吸取上層血漿（透明淡黃色液體，血脂高的樣本為乳濁樣），每400μl轉(zhuǎn)移至一個新無RNAseEP管中，-80℃保存。將保存的血漿置于冰上溶解，室溫下360g離心20min，吸取上層血漿（即血小板）300μl并轉(zhuǎn)移至含30μl的RNAlater（LifeTechnologies）管中，4℃孵育過夜。用mirVanaRNA提取試劑盒(LifeTechnologies)按說明書提取。下層血漿5000rmp離心10min后，-80°C凍存待用，方法簡述如下：(1)將血漿與等體積2XDenaturingSolution混合，在冰水浴中孵育5min。(2)加入與混合液體等體積的Acid-Phenol:Chloroform，渦旋30～60s混勻，12000r/min離心20min，分三層，吸取上層透明液體500μl，轉(zhuǎn)移至新的無RNAseEP管中。(3)加入1.25倍體積的100%乙醇，混勻后轉(zhuǎn)移到離心柱中（≤700μl）并裝載到收集管上，4000r/min離心30s，棄收集液，重復(fù)此步驟使所有液體通過離心柱。(4)加入洗液1700μl到離心柱上，靜置1min，離心15s。(5)加入洗液2/3500μl到離心柱上，靜置1min，離心15s，重復(fù)一次。(6)加入熱激后的ElutionSolution50μl到離心柱上，靜置1min，離心1min，收集離心液。(7)RNA6000Picochip(Agilent)對RNA的濃度和質(zhì)量進行測定。2.cDNA合成按照試劑盒操作說明規(guī)定的標準操作步驟，對所提取的RNA樣本進行逆轉(zhuǎn)錄，獲取cDNA；取干凈EP管中加1μLrandom6mers,1μLdNTP,7μLRNasefreedH2O,1μLTempRNA,吹勻，放入PCR儀中，設(shè)定程序：65℃,5min；再加4μL5*buffer,0.5μLRNaseinhibitor,1μLRTase,4.5μLRNasefreedH2O,吹勻，放入PCR儀中，設(shè)定程序：30℃,10min42℃,50min95℃,5min。3.RT-QPCR使用Takara公司的SYBR@PremixExTaqTM(TliRNaseHPlus)試劑盒，按照試劑盒操作說明所規(guī)定的標準操作步驟：30μL體系，15μLSYBRMIX+0.6μLprimer-R+11.8μLddH2O+2μLcDNA，標準兩步法反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性10min40cycles95℃15s60℃1min；之后根據(jù)2△Ct的方法計算所有組織中9條目的RNA和內(nèi)參mRNAGAPDH的表達量。4.結(jié)果分析如圖2和圖3所示，其中，例舉上述RNA基因聯(lián)合檢測應(yīng)用在個人的腫瘤診斷中，其九條RNA的表達量分別是：CD79A(ENSG00000105369)=4.367212,CD81(ENSG00000110651)=3.154837,SYTL1(ENSG00000142765)=7.553681,CENPC(ENSG00000145241)=6.658126,TTN(ENSG00000155657)=6.224972,RHOH(ENSG00000168421)=5.448671,ZNF101(ENSG00000181896)=5.385524,TRABD2A(ENSG00000186854)=3.559716,TRAC(ENSG00000229164)=6.235487。利用利Y值計算公式可得：Y=8.6155大于5.28，則表明此志愿者未患有腫瘤。通過受試工作者曲線(ROC)分析RNA的聯(lián)合診斷效能，利用公式Y(jié)=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)擬合9個RNA檢測數(shù)據(jù)得到的ROC曲線如圖2所示，ROC曲線下面積為92.5%，診斷效能高。采用2△Ct對定量法分析數(shù)據(jù)，Logistic回歸方程(判斷公式)：Y=0.0148108×ACD79A(ENSG00000105369)+0.07848907×BCD81(ENSG00000110651)+0.1531495×CSYTL1(ENSG00000142765)+0.08874548×DCENPC(ENSG00000145241)+0.05914998×ETTN(ENSG00000155657)+0.22891517×FRHOH(ENSG00000168421)+0.5210493×GZNF101(ENSG00000181896)+0.05066299×HTRABD2A(ENSG00000186854)+0.31206518×ITRAC(ENSG00000229164)，其中ACD79A(ENSG00000105369)是CD79A(ENSG00000105369)在血漿中的表達量(2ΔCt值),BCD81(ENSG00000110651)是CD81(ENSG00000110651)在血漿中的表達量(2ΔCt值),CSYTL1(ENSG00000142765)是SYTL1(ENSG00000142765)在血漿中的表達量(2ΔCt值),DCENPC(ENSG00000145241)是CENPC(ENSG00000145241)在血漿中的表達量(2ΔCt值),ETTN(ENSG00000155657)是TTN(ENSG00000155657)在血漿中的表達量(2ΔCt值),FRHOH(ENSG00000168421)是RHOH(ENSG00000168421)在血漿中的表達量(2ΔCt值),GZNF101(ENSG00000181896)是ZNF101(ENSG00000181896)在血漿中的表達量(2ΔCt值),HTRABD2A(ENSG00000186854)是TRABD2A(ENSG00000186854)在血漿中的表達量(2ΔCt值),ITRAC(ENSG00000229164)是TRAC(ENSG00000229164在血漿中的表達量(2ΔCt值)，ΔCt=目的基因Ct值–內(nèi)參基因Ct值，目的基因Ct值指的是實時熒光定量PCR技術(shù)檢測到的目的基因的Ct值，目的基因是指CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)和TRAC(ENSG00000229164)。結(jié)果50例腫瘤患者和20例健康人(正常對照)的Y值如表2所示，可見71%腫瘤患者的Y值均小于5.28。因此，當Y<5.28時，即預(yù)測概率值<5.28時才判為陽性(患腫瘤)，反之為陰性(未患腫瘤)，證明對上述基因的聯(lián)合檢測可獲得良好的腫瘤診斷價值，因此CD79A(ENSG00000105369),CD81(ENSG00000110651),SYTL1(ENSG00000142765),CENPC(ENSG00000145241),TTN(ENSG00000155657),RHOH(ENSG00000168421),ZNF101(ENSG00000181896),TRABD2A(ENSG00000186854)，TRAC(ENSG00000229164)組合可作為腫瘤早期診斷和罹患風險評估的生物標志物。表250例腫瘤患者和20例健康人（正常對照）的Y值編號評分(Y值)組別12.428121腫瘤患者22.48863腫瘤患者32.503916腫瘤患者42.799115腫瘤患者52.849653腫瘤患者62.97098腫瘤患者72.997302腫瘤患者83.065475腫瘤患者93.170404腫瘤患者103.296256腫瘤患者113.323515腫瘤患者123.352802腫瘤患者133.356327健康人143.379242腫瘤患者153.406207腫瘤患者163.468006腫瘤患者173.489337腫瘤患者183.500599腫瘤患者193.502231腫瘤患者203.580153腫瘤患者213.598405腫瘤患者223.611938腫瘤患者233.716721腫瘤患者243.781669腫瘤患者253.852145腫瘤患者263.857838腫瘤患者273.919833腫瘤患者283.932668健康人293.941747腫瘤患者303.985031腫瘤患者314.092127腫瘤患者324.096202腫瘤患者334.106992腫瘤患者344.141384腫瘤患者354.14155腫瘤患者364.365938腫瘤患者374.375088腫瘤患者384.516429腫瘤患者394.564401腫瘤患者404.588491腫瘤患者414.633284腫瘤患者424.7872腫瘤患者434.793377腫瘤患者444.79555腫瘤患者454.815989腫瘤患者464.869563腫瘤患者474.933796腫瘤患者485.046824腫瘤患者495.211091腫瘤患者505.256569腫瘤患者515.285875健康人526.790469健康人536.876531健康人547.083108腫瘤患者557.151574健康人567.553954健康人577.56079健康人587.772101健康人597.80082健康人608.036599健康人618.310503健康人628.670087腫瘤患者639.05824健康人649.270311健康人659.615263健康人669.858009健康人679.939603健康人6810.3842健康人6910.6205健康人7010.88067健康人目前臨床常用生物標志物如CEA等用于腫瘤診斷的靈敏度僅為4.7～20.8%，即使聯(lián)合使用其它標志物時的靈敏度也只有69.1%(HeCZ,ZhangKH,LiQ,etal.CombineduseofAFP,CEA,CA125andCA19-9improvesthesensitivityforthediagnosisofgastriccancer.BMCGastroenterol2013.13:87.)。以上數(shù)據(jù)表明，使用RNA聯(lián)合標志物診斷腫瘤的靈敏度能達到92.5%，高于目前臨床常用生物標志物靈敏度。盡管有2名腫瘤患者和2名正常人被此方法檢測的數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差，但考慮到腫瘤的異質(zhì)性和個體之間的差異(如臨床中經(jīng)常有如下情況：正常人CEA值高于正常上限，腫瘤患者CEA值卻在正常范圍內(nèi))，這種結(jié)果符合臨床醫(yī)學規(guī)律，表明本發(fā)明標志物組合聯(lián)合篩選方法真實、有效，可以被接受和實施。毫無疑問，本發(fā)明用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型及方法除了上述實施例中講述的類型和方式以外，還包括其他類似的結(jié)構(gòu)組成方式和使用方式?？偠灾?，本發(fā)明還包括其他對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的變換和替代。<110>上海厚承醫(yī)學科技有限公司<120>用于腫瘤早期篩查的腫瘤血小板RNA定量檢測模型及方法<130>（編號：）<160>10<210>1<211>19<212>DNA<213>CD79A<214>人工合成<220>正向引物<400>1CATTGATGGTGAGCCTGGG<220>反向引物TCGGCTGTGATGATTCGGT<210>2<211>21<212>DNA<213>CD81<214>人工合成<220>正向引物<400>2GTATCTGGAGCTGGGAGACAA<220>反向引物TTGGCGATCTGGTCCTTGTT<210>3<211>19<212>DNA<213>SYTL1<214>人工合成<220>正向引物<400>3TCTCTCGACCGCATGCTCA<220>反向引物TCGTAGTGCAGCGCGAAGT<210>4<211>21<212>DNA<213>CENPC<214>人工合成<220>正向引物<400>4TCCGGTTTTCAACGAGACTCT<220>反向引物TTCAACTTCGCCCAGAAAGA<210>5<211>21<212>DNA<213>TTN<214>人工合成<220>正向引物<400>5CCTTCGAATTCCGCCTAAAAT<220>反向引物TTTTCAATGTGGAACCTCCC<210>6<211>20<212>DNA<213>RHOH<214>人工合成<220>正向引物<400>6TTTCTTCGGCATTCTGCAAC<220>反向引物CCTCCAAAGCCTAGTCTTCAA<210>7<211>21<212>DNA<213>ZNF101<214>人工合成<220>正向引物<400>7TGCTGGACACAAACGATCTGA<220>反向引物TTGGTGTTACTGTGCGCCGT<210>8<211>21<212>DNA<213>TRABD2A<214>人工合成<220>正向引物<400>8TGCTCCCCAGGGACATCTACT<220>反向引物TCCGGCAATAGCATTGAAGA<210>9<211>19<212>DNA<213>TRAC<214>人工合成<220>正向引物<400>9TCAGCGATTCAGCCTCCTA<220>反向引物TCAGGCCAGACAGTCAACTGA當前第1頁1 2 3