本發(fā)明屬于尿液檢測試劑，具體涉及一種人體內(nèi)異常代謝物——酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：隨著中國人口老齡化趨勢的加劇、環(huán)境及生活方式的改變，癌癥已成為嚴(yán)重危害中國居民健康和社會(huì)發(fā)展的主要疾病之一。同時(shí)，報(bào)告中顯示，全球癌癥病例呈現(xiàn)逐年增長趨勢，由2012年的1400萬，會(huì)逐年遞增至2025年的1900萬人，到2035年將達(dá)到2400萬人。報(bào)告中還指出，中國新增癌癥病例高居第一位，而且在肝、食道、胃、肺等四種惡性腫瘤中，中國新增病例和死亡人數(shù)均居世界首位。癌癥之所以呈現(xiàn)難以治愈、死亡率高的情況，主要是缺少有效的早期確診手段，以致不能在癌前病變階段和發(fā)病早期進(jìn)行及時(shí)的治療。因此，一旦發(fā)現(xiàn)癌癥患者多半已是中晚期了，給治療增加了很大難度，所以早期診斷就成為提高癌癥治療率的關(guān)鍵。目前癌癥的檢測手段主要依靠b超、x線、ct和核磁共振等高級精密儀器，這些儀器檢測費(fèi)用昂貴，根據(jù)我國的實(shí)情難以應(yīng)用到人群癌癥篩查和早期診斷，因而很多研究者致力于尋找其他的生物化學(xué)腫瘤標(biāo)志物，以起到腫瘤早期篩查的作用。在尋找的過程中，多種血清腫瘤標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)，并被作為腫瘤診斷的重要手段之一，但血清腫瘤標(biāo)志物存在操作繁瑣、成本高、有創(chuàng)性、早期檢出率不理想等因素，不利于腫瘤的大規(guī)模篩查。而尿檢，作為一項(xiàng)基本的實(shí)驗(yàn)室檢查方法，不僅可用于泌尿系統(tǒng)疾病的診斷，對其他疾病包括惡性腫瘤都有診斷價(jià)值。近年來，尿液檢測在腫瘤篩查中的應(yīng)用越來越多。此種檢測方法取材方便、操作易行、無創(chuàng)傷、患者依從性高，對應(yīng)用于早期廣譜篩查惡性腫瘤意義重大。在癌前病變及癌癥早中期，細(xì)胞的異常增值會(huì)引起身體的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致人體內(nèi)特征氨基酸代謝異常，尿液中的酪氨酸及其代謝衍生物的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常人，因此可以通過與尿液中的以上相關(guān)物質(zhì)發(fā)生特異性反應(yīng)，即可判斷受試者體內(nèi)是否有癌細(xì)胞活動(dòng)，根據(jù)顏色即可判定體內(nèi)是否有癌細(xì)胞代謝物，從而診斷受試者是否患有癌癥。但由于尿液中成分復(fù)雜，某些微量成分或者因其他疾病導(dǎo)致的代謝異常物同樣會(huì)與檢測試劑中汞離子、亞汞離子結(jié)合生成顏色沉淀，會(huì)影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，造成誤診，因此本發(fā)明人采用在試劑中加入一些其他離子，與尿液中的干擾成分反應(yīng)，以減小其對酪氨酸及其代謝衍生物檢測的干擾，很大程度上避免了假陽性、假陰性的的出現(xiàn)，進(jìn)一步提高了檢測惡性腫瘤的陽性檢出率。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種靈敏度高、準(zhǔn)確性好的用于檢測尿液中酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑及其制備方法，用以解決提高檢測惡性腫瘤準(zhǔn)確性的問題。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑，包括hg2+、hg22+、co2+、moo42-、so42-、no3-、no2-和seo32-的水溶液。所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑中hg2+的濃度為0.62-1.53mol/l，hg22+的濃度為0.66-0.9mol/l，co2+的濃度為2.0-8.5mmol/l，moo42-的濃度為3.5-9.0mmol/l，no2-的濃度為0.5-1.5mol/l，seo32-的濃度為4.8-8.8mmol/l。本發(fā)明還提供了尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑的制備方法，包括如下步驟：1）硫酸的制備：將市售硫酸用水稀釋到原來的4-10倍，冷卻至室溫待用；2）硝酸的制備：將市售硝酸用水稀釋到原來的4-10倍，冷卻至室溫待用；3）a溶液的制備：稱取一定量硫酸汞溶于步驟1）配置的所述硫酸溶液中獲得a溶液；4）b溶液的制備：稱取一定量硝酸亞汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中獲得b溶液；5）c溶液的制備：稱取一定量亞硝酸汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中獲得c溶液；6）d溶液的制備：稱取一定量硝酸鈷溶于水中獲得d溶液；7）e溶液的制備：稱取一定量鉬酸鈉溶于水中獲得e溶液；8）f溶液的制備：稱取一定量亞硒酸溶于水中獲得f溶液；9）混合：將步驟3）、4）、5）、6）、7）和8）中制備的a、b、c、d、e和f溶液按1：2.0-3.0：0.5~2.0：0.3~1.2：0.2~0.9：0.5~1.0體積比混合，即得所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑。癌細(xì)胞的異常增值會(huì)引起身體的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致人體內(nèi)特征氨基酸代謝異常，尿液中的酪氨酸及其代謝衍生物的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常人，本發(fā)明通過試劑中的汞離子和亞汞離子與酪氨酸及其代謝衍生物絡(luò)合反應(yīng)生成紅色或類紅色沉淀，從而判定體內(nèi)是否有癌細(xì)胞活動(dòng)，是否有癌癥，此檢測方法具有靈敏度高的特點(diǎn)；另外，鈷離子、部分汞離子能與尿液中的其他陰離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)產(chǎn)生白色沉淀，減少干擾；而鉬酸根離子能與尿液中的有機(jī)化合物如葡萄糖醛酸等有機(jī)酸反應(yīng)產(chǎn)生非紅色沉淀，能與尿液中的某些電解質(zhì)絡(luò)合生成一些非紅色沉淀，還能結(jié)合因其他疾病導(dǎo)致異常代謝的血紅蛋白并使之沉淀。本發(fā)明提供了一種對人體尿液中酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑及其制備方法，此檢測試劑是在millon試劑原理的基礎(chǔ)上進(jìn)行創(chuàng)新，檢測試劑中這些離子的加入，大大減小了尿液中各種干擾成分的影響，從而降低假陽性的出現(xiàn)，提高了檢測的準(zhǔn)確率，對應(yīng)用于早期廣譜篩查惡性腫瘤意義重大。具體實(shí)施方式所有原材料均為分析純級別的普通化學(xué)制劑，制備過程也在常溫常壓下進(jìn)行。實(shí)施例一所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑，包括hg2+、hg22+、co2+、moo42-、so42-、no3-、no2-和seo32-的水溶液，其中hg2+的濃度為1mol/l，hg22+的濃度為0.69mol/l，co2+的濃度為3mmol/l，moo42-的濃度為4.5mmol/l，no2-的濃度為1.1mol/l，seo32-的濃度為5mmol/l。制備過程如下：1）硫酸的制備：將市售濃硫酸用水稀釋到原來的4倍，冷卻至室溫待用；2）硝酸的制備：將市售濃硝酸用水稀釋到原來的4倍，冷卻至室溫待用；3）a溶液的制備：稱取一定量硫酸汞溶于步驟1）配置的所述硫酸溶液中，其中hg2+的含量為2.7mol/l；4）b溶液的制備：稱取一定量硝酸亞汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg22+的含量為2.07mol/l；5）c溶液的制備：稱取一定量亞硝酸汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg2+的含量為3.3mol/l，no2-的含量為6.6mol/l；6）d溶液的制備：稱取一定量硝酸鈷溶于水中，其中co2+的含量為18mmol/l；7）e溶液的制備：稱取一定量鉬酸鈉溶于水中，其中moo42-的含量為54mmol/l；8）f溶液的制備：稱取一定量亞硒酸溶于水中，其中seo32-的含量為60mmol/l；9）混合：將步驟3）、4）、5）、6）、7）和8）中制備的a、b、c、d、e和f溶液按1：2：1：1：0.5：0.5體積比混合，即得所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑。實(shí)施例二所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑，包括hg2+、hg22+、co2+、moo42-、so42-、no3-、no2-和seo32-的水溶液，其中hg2+的濃度為1.05mol/l，hg22+的濃度為0.69mol/l，co2+的濃度為3mmol/l，moo42-的濃度為3.5mmol/l，no2-的濃度為1.0mol/l，seo32-的濃度為6mmol/l。制備過程如下：1）硫酸的制備：將市售濃硫酸用水稀釋到原來的5倍，冷卻至室溫待用；2）硝酸的制備：將市售濃硝酸用水稀釋到原來的5倍，冷卻至室溫待用；3）a溶液的制備：稱取一定量硫酸汞溶于步驟1）配置的所述硫酸溶液中，其中hg2+的含量為3.28mol/l；4）b溶液的制備：稱取一定量硝酸亞汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg22+的含量為1.66mol/l；5）c溶液的制備：稱取一定量亞硝酸汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg2+的含量為3mol/l，no2-的含量為6mol/l；6）d溶液的制備：稱取一定量硝酸鈷溶于水中，其中co2+的含量為36mmol/l；7）e溶液的制備：稱取一定量鉬酸鈉溶于水中，其中moo42-的含量為105mmol/l；8）f溶液的制備：稱取一定量亞硒酸溶于水中，其中seo32-的含量為45mmol/l；9）混合：將步驟3）、4）、5）、6）、7）和8）中制備的a、b、c、d、e和f溶液按1：2.5：1：0.5：0.2：0.8體積比混合，即得所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑。實(shí)施例三所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑，包括hg2+、hg22+、co2+、moo42-、so42-、no3-、no2-和seo32-的水溶液，其中hg2+的濃度為1mol/l，hg22+的濃度為0.7mol/l，co2+的濃度為3mmol/l，moo42-的濃度為4.0mmol/l，no2-的濃度為0.9mol/l，seo32-的濃度為5.5mmol/l。制備過程如下：1）硫酸的制備：將市售濃硫酸用水稀釋到原來的6倍，冷卻至室溫待用；2）硝酸的制備：將市售濃硝酸用水稀釋到原來的6倍，冷卻至室溫待用；3）a溶液的制備：稱取一定量硫酸汞溶于步驟1）配置的所述硫酸溶液中，其中hg2+的含量為3.3mol/l；4）b溶液的制備：稱取一定量硝酸亞汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg22+的含量為1.9mol/l；5）c溶液的制備：稱取一定量亞硝酸汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg2+的含量為2.7mol/l，no2-的含量為5.4mol/l；6）d溶液的制備：稱取一定量硝酸鈷溶于水中，其中co2+的含量為36mmol/l；7）e溶液的制備：稱取一定量鉬酸鈉溶于水中，其中moo42-的含量為48mmol/l；8）f溶液的制備：稱取一定量亞硒酸溶于水中，其中seo32-的含量為41.25mmol/l；9）混合：將步驟3）、4）、5）、6）、7）和8）中制備的a、b、c、d、e和f溶液按1：2.2：1：0.5：0.5：0.8體積比混合，即得所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑。實(shí)施例四對比例所述尿液中腫瘤標(biāo)志物酪氨酸及其代謝衍生物檢測試劑，包括hg2+、hg22+、so42-、no3-和no2-的水溶液。制備過程如下：1）硫酸的制備：將市售濃硫酸用水稀釋到原來的5倍，冷卻至室溫待用；2）硝酸的制備：將市售濃硝酸用水稀釋到原來的5倍，冷卻至室溫待用；3）a溶液的制備：稱取一定量硫酸汞溶于步驟1）配置的所述硫酸溶液中，其中hg2+的含量為3.3mol/l；4）b溶液的制備：稱取一定量硝酸亞汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg22+的含量為1.6mol/l；5）c溶液的制備：稱取一定量亞硝酸汞溶于步驟2）配置的所述硝酸溶液中，其中hg2+的含量為2.7mol/l，no2-的含量為5.4mol/l；6）混合：將步驟3）、4）和5）中制備的a、b和c溶液按1：2：1體積比混合，即得對比例檢測試劑。實(shí)施例五效果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)對象實(shí)驗(yàn)對象人數(shù)（人）年齡分布（歲）平均年齡（歲）惡性腫瘤確診患者62525-7449.65非腫瘤良性疾病患者73425-7645.53健康人80021-7950.732.實(shí)驗(yàn)方法檢測者應(yīng)停藥三天，取晨尿（空腹8h）5ml加入裝有1ml試劑（實(shí)施例一制備的檢測試劑）的安瓿瓶中，稍加振蕩靜置約5min，將沉淀顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色板對照判定結(jié)果，結(jié)果及顏色如下表1所示：表1尿液中檢測酪氨酸及其代謝衍生物判定標(biāo)準(zhǔn)檢測標(biāo)準(zhǔn)顏色陰性白色或淺黃色弱陽性淺紅色陽性紅色強(qiáng)陽性磚紅色3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果癌癥篩查：表2各組尿液比較表3不同惡性腫瘤檢測結(jié)果癌癥名乳腺癌胃癌肺癌肝癌婦科腫瘤惡性淋巴瘤其他腫瘤患者例數(shù)128120114101786321陽性數(shù)12811911399786320陽性率%100%99.2%99.1%98%100%100%95.2%如上所示，在醫(yī)院提供的625名惡性腫瘤確診患者中，診斷出陽性結(jié)果的有620名病人，檢出率達(dá)99.2%，在非腫瘤良性疾病患者組（3.7%）和健康人組（0.5%）檢出率均低于5%，說明本發(fā)明提供的尿液中檢測酪氨酸及其代謝衍生物的檢測試劑對檢測惡性腫瘤的靈敏度高，陽性率高，表3的結(jié)果也證明了此試劑能廣泛的應(yīng)用于檢測各種惡性腫瘤。實(shí)施例六對比例與實(shí)施例五的實(shí)驗(yàn)對象相同，實(shí)驗(yàn)方法也相同，其中所用的檢測試劑改為實(shí)施例四中制備的對比例檢測試劑，測試結(jié)果如表4。表4各組尿液比較通過對比例可以進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的技術(shù)方案大大降低了假陽性的概率，提高了檢測的精準(zhǔn)度。當(dāng)前第1頁12