本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種莪紅片質(zhì)量控制方法。

背景技術(shù)：

心腦血管疾病是嚴(yán)重危害人民健康、威脅生命、影響勞動的一種常見病、多發(fā)病，發(fā)病率高。中醫(yī)稱腦血管病為“中風(fēng)”。中風(fēng)的病因是氣虛、痰濁、火盛、血瘀等。大部分患者屬于中經(jīng)絡(luò)范圍，出現(xiàn)經(jīng)絡(luò)癥候，少數(shù)重癥者可致腎陰虧損、肝陽暴亢、挾痰挾火、橫竄經(jīng)絡(luò)、擾動心神，形成入臟入腑的閉癥或脫癥?！端貑枴り庩枒?yīng)象大論》“疏其血氣，令其調(diào)達(dá)，而致和平”，“堅者削之”，“留者攻之”的理論，以活血化瘀為治療大法。

莪術(shù)性溫，味苦、辛，功能破結(jié)散結(jié)，行血止痛，又不峻烈。經(jīng)藥理研究發(fā)現(xiàn)，莪術(shù)可增加血流量。紅花為菊科植物，入心、肝經(jīng)，具活血通經(jīng)、祛瘀止痛的作用。莪紅片方中用莪術(shù)其峻烈破血之力，《本草圖經(jīng)》“蓬莪術(shù)，古方不見用者，今醫(yī)家治積聚諸氣，為臣藥。”故以莪術(shù)為君藥。紅花《本草衍義補遺》：“紅花，破留血，養(yǎng)血”，為臣藥。君臣合力，破瘀治血養(yǎng)血以去邪，令血氣調(diào)達(dá)。

為保證制劑的穩(wěn)定性及療效，對莪紅片制定了全面的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，紅花為莪紅片中主要藥味，本法采用高效液相法對方中紅花以羥基紅花黃色素A為指標(biāo)進(jìn)行含量測定，以薄層色譜分別對紅花定性鑒別。對制劑進(jìn)行了長期穩(wěn)定性試驗，結(jié)果表明在24個月內(nèi)制劑的質(zhì)量無明顯的變化，為制定制劑的有效期提供了有力的證據(jù)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種莪紅片的質(zhì)量控制方法，該方法能夠快速、準(zhǔn)確的鑒別莪紅片中的紅花，并通過高效液相色譜法測定莪紅片中羥基紅花黃色素A的含量。

本發(fā)明公開了一種莪紅片質(zhì)量控制方法，包括利用薄層色譜法進(jìn)行紅花鑒別和利用高效液相色譜法進(jìn)行羥基紅花黃色素A含量測定。

進(jìn)一步的，所述紅花鑒別方法為：取莪紅片10片，除去包衣，研細(xì)成粉末；取所述粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞后振搖15min，靜置；吸取上清液，作為供試品溶液；

取紅花對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；

取空白樣品，同法制成空白對照溶液；

照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:3:0.4)為展開劑展開，取出，晾干；

觀察硅膠H薄層板，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，在日光下顯相同顏色的斑點。

進(jìn)一步的，所述羥基紅花黃色素A含量測定方法為：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為26:2:72的甲醇-乙睛-0.7％磷酸溶液為流動相；檢測波長為403nm，理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算≥1500；

對照品溶液的制備：精密稱取羥基紅花黃色素A對照品，加25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取莪紅片20片，除去包衣，研細(xì)成粉末，取所述粉末2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25％甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，加25％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，計算即得，本品每片含紅花以羥基紅花黃色素A計，不少于0.045mg。

進(jìn)一步的，所述羥基紅花黃色素A含量測定方法中，供試品溶液制備步驟的超聲處理功率為300W，超聲頻率為50kHz，超聲時間40分鐘。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明可以獲得包括以下技術(shù)效果：

1)本發(fā)明的莪紅片質(zhì)量控制方法，提供了鑒別藥物中紅花的方法，并采用高效液相法對方中主要藥味紅花以羥基紅花黃色素A為指標(biāo)進(jìn)行含量測定。

2)本發(fā)明的質(zhì)量控制方法能更好地控制藥品的質(zhì)量，具有較強的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真正體現(xiàn)藥品安全有效、質(zhì)量可控。

當(dāng)然，實施本發(fā)明的任一產(chǎn)品必不一定需要同時達(dá)到以上所述的所有技術(shù)效果。

附圖說明

此處所說明的附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本發(fā)明的一部分，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：

圖1所示為本發(fā)明實施例1中紅花鑒別薄層色譜圖；

圖2所示為本發(fā)明實施例2中羥基紅花黃色素A含量測定對照品高效液相色譜圖；

圖3所示為本發(fā)明實施例2中羥基紅花黃色素A含量測定供試品高效液相色譜圖；

圖4所示為本發(fā)明實施例2中羥基紅花黃色素A含量測定陰性對照高效液相色譜圖；

圖5所示為本發(fā)明實施例2中羥基紅花黃色素A含量線性曲線。

具體實施方式

以下將配合附圖及實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明的實施方式，藉此對本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段來解決技術(shù)問題并達(dá)成技術(shù)功效的實現(xiàn)過程能充分理解并據(jù)以實施。

實施例1，紅花的鑒別

取莪紅片10片，除去包衣，研細(xì)，取粉末0.5g，加80％丙酮溶液5ml，密塞后振搖15min，靜置；吸取上清液，作為供試品溶液。

取紅花對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。

取空白樣品，同法制成空白對照溶液。

照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以體積比為7:2:3:0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇溶液為展開劑展開，取出晾干，在日光下進(jìn)行檢視。

結(jié)果如圖1本發(fā)明莪紅片質(zhì)量控制方法的紅花鑒別薄層色譜圖所示，圖中1、3、5、7為紅花對照藥材，2、4、6為供試品，8為空白對照。圖中供試品色譜中，在與紅花對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點?？瞻讓φ諛悠飞V中，在與紅花對照藥材色譜相應(yīng)位置上，未見對應(yīng)的斑點。表明莪紅片中含有紅花。

實施例2，羥基紅花黃色素A的含量測定

(1)含量測定的方法

紅花為莪紅片中主要藥味，本法采用高效液相法對方中紅花以羥基紅花黃色素A為指標(biāo)進(jìn)行含量測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為26:2:72的甲醇-乙睛-0.7％磷酸溶液為流動相；檢測波長為403nm，理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計算應(yīng)不低于1500。

對照品溶液的制備：精密稱取羥基紅花黃色素A對照品，加25％甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取莪紅片20片，除去包衣，研細(xì)，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25％甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率50kHz)40分鐘，放冷，再稱定重量，用25％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照溶液的制備：取不含紅花的陰性樣品，依供試品溶液的制備方法，同法制得。

測定方法：精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算出供試品中羥基紅花黃色素A的含量，即得。

(2)含量測定的方法學(xué)研究

2.1檢測波長的確定

以甲醇-乙睛-0.7％磷酸溶液＝26:2:72為溶劑，在350-450nm范圍內(nèi)對羥基紅花黃色素A標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行掃描，羥基紅花黃色素A標(biāo)準(zhǔn)品在該溶劑中，在403nm處有最大吸收。

2.2系統(tǒng)適用性試驗

在上述色譜條件下，分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，各進(jìn)樣體積20μl，記錄色譜圖，測定結(jié)果如圖2-4所示。樣品中羥基紅花黃色素A理論塔板數(shù)計算：n＝3797(＞1500)；主峰與雜質(zhì)峰的分離度為1.3；保留時間為13.83min；陰性對照溶液在對照品吸收峰處無吸收；表明輔料及各種分解產(chǎn)物對主峰干擾較小，符合系統(tǒng)適用性試驗的要求。

2.3線性關(guān)系試驗

精密稱定2.0mg羥基紅花黃色素A對照品于50ml容量瓶中，加入25％甲醇至刻度，搖勻，分別精密量取0.5、1、2、3、4、5、6ml于10ml量瓶中，加25％甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20μl，照上述色譜條件分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積(Y)對進(jìn)樣濃度(X，μg/ml)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y＝0.2804x+0.0255，相關(guān)系數(shù)R²＝0.9997，結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A濃度在2.12～25.43μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好，見表1和圖5。

表1羥基紅花黃色素A線性關(guān)系試驗結(jié)果

2.4最小檢出量

精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液中濃度為2μg/ml的樣品20μl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積的響應(yīng)值在線性范圍內(nèi)，說明最小檢出量應(yīng)小于2μg/ml，符合要求。

2.5精密度試驗

精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液中濃度為8μg/ml的樣品20μl，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，連續(xù)測定6次。結(jié)果見表2，平均值為30.018萬，RSD＝0.94％，儀器精密度良好。

表2精密度試驗結(jié)果

2.6穩(wěn)定性試驗

取莪紅片10片，按含量測定項下方法制備得供試品溶液；精密吸取供試品溶液20μl，每隔一定時間進(jìn)樣測定一次，共測定8小時，結(jié)果見表3。RSD為1.8％，結(jié)果表明，供試品溶液在8小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

表3穩(wěn)定性試驗結(jié)果

本發(fā)明的莪紅片質(zhì)量控制方法，提供了鑒別藥物中紅花的方法，并采用高效液相法對方中主要藥味紅花以羥基紅花黃色素A為指標(biāo)進(jìn)行含量測定。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法能更好地控制藥品的質(zhì)量，具有較強的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真正體現(xiàn)藥品安全有效、質(zhì)量可控。

如在說明書及權(quán)利要求當(dāng)中使用了某些詞匯來指稱特定成分或方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)可理解，不同地區(qū)可能會用不同名詞來稱呼同一個成分。本說明書及權(quán)利要求并不以名稱的差異來作為區(qū)分成分的方式。如在通篇說明書及權(quán)利要求當(dāng)中所提及的“包含”為一開放式用語，故應(yīng)解釋成“包含但不限定于”?！按笾隆笔侵冈诳山邮盏恼`差范圍內(nèi)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠在一定誤差范圍內(nèi)解決所述技術(shù)問題，基本達(dá)到所述技術(shù)效果。說明書后續(xù)描述為實施本發(fā)明的較佳實施方式，然所述描述乃以說明本發(fā)明的一般原則為目的，并非用以限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)視所附權(quán)利要求所界定者為準(zhǔn)。

還需要說明的是，術(shù)語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的商品或者系統(tǒng)不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種商品或者系統(tǒng)所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系統(tǒng)中還存在另外的相同要素。

上述說明示出并描述了本發(fā)明的若干優(yōu)選實施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對其他實施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識進(jìn)行改動。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。