一種肝復(fù)樂膠囊的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體設(shè)及一種肝病藥物的質(zhì)量控制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝癌是一種原發(fā)于肝細(xì)胞和肝內(nèi)膽巧的惡性腫瘤，又稱原發(fā)性肝癌。本病初起無 明顯的癥狀和體征，隨著病情的發(fā)展，出現(xiàn)肝膽進(jìn)行性的腫大、疼痛、厭食、乏力、身體明顯 消瘦，腹部明顯脹滿，黃痘低熱和高熱。肝癌的病因病機(jī)：①邪毒侵襲，外界邪毒乘虛侵襲人 體或肌表而入，或潛于體內(nèi)，使臟腑功能失調(diào)，氣全逆亂，日久導(dǎo)致氣聚血凝。②情志失調(diào)， 百病皆生于氣，情志失調(diào)，必傷肝，導(dǎo)致肝失疏泄。氣機(jī)逆亂，血液運(yùn)行受阻，疲血結(jié)聚于肝。 ③飲食不節(jié)，喜好嗜食炙烤肥甘，或飲酒無度，損傷脾胃，更有飲用污水饋腐之物，致使邪毒 直傷脾胃，水谷運(yùn)化失常，水濕停聚有形之濕凝聚成塊結(jié)于脅部，若日久不清，濕邪代熱成 毒，濕熱邪毒相博，郁蒸肝膽發(fā)為癖黃。
[0003] 肝復(fù)樂膠囊由21味藥組成。適用于W肝疲脾虛為主證的原發(fā)性肝癌，癥見上腹 腫塊，脅肋疼痛，神疲乏力，食少納呆，腕腹脹滿，屯、煩易怒，口苦咽干等。方中黨參、黃巧補(bǔ) 中益氣健脾；大黃活血桂疲通經(jīng)；上整蟲破血逐疲消賛；整甲軟堅(jiān)散結(jié)，五者共為方中之主 藥。輔W白術(shù)、巧等、慧巧仁益氣健脾除濕；陳皮理氣調(diào)中，燥濕化疲；桃仁、蘇木活血桂疲， 通經(jīng)止痛；郁金活血桂疲，行氣止痛；柴胡、香附疏肝解郁，理氣止痛；牡頗軟堅(jiān)散結(jié)。佐W 重樓、半枝蓮、敗醬草清熱解毒；茵陳葛清利濕熱，退黃痘；木通滲利水濕；沉香行氣止痛。 諸藥合用，共奏健脾理氣，化疲軟堅(jiān)，清熱解毒之功。適用于肝癌、肝硬化、肝腹水等肝病；同 時可作為護(hù)肝用藥使用。臨床資料表明對于乙型肝炎肝硬化患者的肝功能及肝纖維化血清 學(xué)指標(biāo)有改善作用。也可用其它消化道腫瘤，乳腺癌，子宮癌，酒精肝損傷的輔助治療，有明 顯的保肝護(hù)肝作用。
[0004] 因?yàn)楦螐?fù)樂是多味藥材的組合物，含有多種有機(jī)活性成分，因此基于現(xiàn)代檢測科 學(xué)手段，提出檢測和控制肝復(fù)樂膠囊的方法十分必要，W使生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量更穩(wěn)定，更有 效、更科學(xué)地確保藥物療效。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽〇化]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，本發(fā)明確定了肝復(fù)樂膠囊主要活性成分，納入質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)；本發(fā)明目的是提出一種肝復(fù)樂膠囊的質(zhì)量控制方法，對其進(jìn)行鑒別，從有效成分上 進(jìn)行確定，使肝復(fù)樂膠囊活性成分得到有效控制。
[0006] 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案為：
[0007] 一種肝復(fù)樂膠囊的質(zhì)量控制方法，包括對有效成分的檢測，對有效成分的檢測步 驟為： 陽00引（1)取肝復(fù)樂膠囊的內(nèi)容物6g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液置水浴 上蒸干，蒸干的殘?jiān)铀芙?，用正下醇飽和水溶液提?次，每次20ml，合并提取液的正 下醇相，用W正下醇飽和水溶液洗合并的正下醇相2次，每次20ml，棄去洗液中的水相，收 集的正下醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，加入中性氧化侶柱上，用40%甲醇溶液100ml洗脫， 收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液A;
[0009] 取黃巧甲巧對照品溶液和供試品溶液A，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，Wl〇°CW下放 置的13:7:2=氯甲燒一甲醇一水下層溶液為展開劑，展開，取出，驚干，噴W10%硫酸乙醇 溶液，在105°C烘至斑點(diǎn)顯色清晰；365nm紫外光下檢視；
[0010] 似取肝復(fù)樂膠囊的內(nèi)容物12g，加甲醇50ml加熱回流1小時，濾過，濾液置水浴 上蒸干，蒸干的殘?jiān)?mol/L硫酸溶液50ml，加熱回流1小時，放冷，加入S氯甲燒50ml， 回流提取30分鐘，靜置自然冷卻后，取分層后的水相再加入=氯甲燒50ml，回流提取一次， 合并=氯甲燒相，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液B;
[0011] 取大黃酪對照品溶液、供試品溶液B，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，W石油酸一甲酸 乙醋一甲酸15:5:1的上層溶液為展開劑，展開，取出，驚干，置365nm紫外光下檢視； 陽01引 做取肝復(fù)樂膠囊的內(nèi)容物12g，加水150ml，置沸水浴中加熱1小時，用脫脂棉趁 熱濾過，濾液加氯化鋼20g，用乙酸乙醋提取3次，每次30ml，合并乙酸乙醋提取液，通過鋪 有無水硫酸鋼的漏斗過濾，濾液置水浴上蒸干，蒸干的殘?jiān)蛹状家?氯甲燒1 :1混合液 1ml使溶解，作為供試品溶液C;
[0013] 取茵陳對照藥材溶液和供試品溶液C，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，W49:1 =氯甲 燒一乙醇為展開劑，展開，取出，驚干，置365nm紫外光下檢視；
[0014] (4)采用薄層色譜法試驗(yàn)，取蘇木對照藥材溶液及供試品溶液C，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，W10 :4 :1=氯甲燒一丙酬一甲酸為展開劑，展開，取出，驚干，放置6小時W上；
[0015] (5)取郁金對照藥材溶液，采用薄層色譜法，吸取郁金對照藥材溶液及供試品溶液 C點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，W17 :3正己燒一醋酸乙醋為展開劑，展開，取出，驚干，噴W 10%憐鋼酸乙醇溶液，置105°C烘至斑點(diǎn)顯色清晰；
[0016] (6)取肝復(fù)樂膠囊的內(nèi)容物lOg，加甲醇30ml，置水浴上加熱回流1小時，濾過，濾 液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加于聚酷胺柱（內(nèi)徑10mm，高約17cm)上，用水 50ml洗脫，棄去洗脫液，再用70 %乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?2ml使溶解，作為供試品溶液D;
[0017] 用薄層色譜法試驗(yàn)，取澄皮巧對照品溶液和供試品溶液D，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板 上，W100:17:15的醋酸乙醋一甲醇一水為展開劑，展開6cm，取出，驚干，再W20:10:1:1的 甲苯一乙酸乙醋一甲酸一水的上層溶液為展開劑，展開10cm，取出，驚干，噴氯化侶試 液，置365nm紫外光下檢視。
[0018] 步驟（1)至化）中，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光 斑點(diǎn)，則表明該樣品合格。
[0019] 本發(fā)明中，如無特別說明，有機(jī)溶劑的比都是體積比。
[0020] 薄層色譜載藥量是有限的，濃度太高出現(xiàn)的就是不是點(diǎn)，而是條狀，無法鑒別；濃 度太低，點(diǎn)就不明顯，也無法鑒別。本申請的發(fā)明人經(jīng)試驗(yàn)摸索，確定了薄層色譜法中，步驟 (1)和似、妨取對照品溶液和供試品溶液各10y1點(diǎn)樣，步驟做取茵陳對照藥材溶液和 供試品溶液C各5y1點(diǎn)樣，步驟（4)取蘇木對照藥材溶液10y1及供試品溶液C5y1點(diǎn) 樣，步驟（6)取澄皮巧對照品溶液和供試品溶液D各5y1點(diǎn)樣。
[0021] 其中，所述步驟（1)中，正下醇飽和水溶液提取3次后，合并提取液的正下醇相用 氨試液30ml洗涂1次，棄去氨洗液；所述氨洗液是用質(zhì)量百分濃度25-28%的氨水400ml， 加水至1000ml制得。
[0022] 其中，步驟（1)中，所述黃巧甲巧對照品溶液是W黃巧甲巧對照品，加甲醇制成的 每1ml中含Img的溶液。
[0023] 其中，所述步驟（2)中，對照品溶液的制備方法為：取大黃酪對照品，加=氯甲燒 制成每1ml中含0. 4mg的溶液；
[0024] 所述步驟（3)至巧）中，對照品溶液的制備方法為：取茵陳對照藥材6g，或蘇木對 照藥材Ig，或郁金對照藥材Ig，按照供試品溶液C的制法溶解、過濾、蒸干，蒸干的殘?jiān)蛹?醇一S氯甲燒1 :1混合液1ml溶解。
[0025] 其中，所述步驟化）中，澄皮巧對照品溶液為每1ml中含澄皮巧0.02mg的甲醇溶 液。
[00%] 進(jìn)一步地，所述步驟（6)中，如果澄皮巧對照品溶液和供試品溶液D在薄層板相同 高度的位置有相同顏色的斑點(diǎn)，則進(jìn)行步驟（7)的液相色譜檢測；如果供試品溶液D在薄層 板相同高度的位置沒有相同顏色的斑點(diǎn)，則判定樣品不合格。
[0027] 本發(fā)明提出步驟（7)液相色譜檢測，具體為： 陽02引取肝復(fù)樂膠囊的內(nèi)容物，精密稱取0. 48~0. 52g，加入甲醇50ml，稱定重量，置水 浴上加熱回流2小時，放冷，再稱定重量、加甲醇補(bǔ)足重量，過濾取濾液，濾液進(jìn)入液相色譜 儀測定含量，檢測的澄皮巧色譜峰在2000W上為合格。
[0029] 其中，液相色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇一4%醋酸溶液 (25:75)為流動相，檢測波長284nm。
[0030] 其中，液相色譜檢測用外標(biāo)法確定澄皮巧的含量，澄皮巧工作曲線繪制為：精密稱 取澄皮巧對照品，加甲醇使溶解，配制成濃度為1X10 3mg/mL至50X10 3mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液， 吸取5y1，注入液相色譜儀檢測，W溶液濃度（yg/mU為X軸，峰面積（mAU)為Y軸，作線 性回歸方程。
[0031] 本發(fā)明的有益效果為：
[0032] 肝復(fù)樂膠囊含有黨參、整甲（醋制）、重樓、白術(shù)（炒）、黃巧、陳皮、±整蟲、大黃、 桃仁、半枝蓮、敗醬草、巧等、慧巧仁、郁金、蘇木、牡頗、茵陳、木通、香附（制）、沉香、柴胡。
[0033] 其中，郁金味辛、苦，性寒；歸屯、、肝、膽經(jīng)?；钛鼓埽恍袣饨庥?；清屯、涼血；疏肝利 膽。主胸腹脅肋諸痛；婦女痛經(jīng)；經(jīng)閉；癥瘤結(jié)塊；熱病神昏；癒狂；驚痛；吐血；贓備；血淋； 砂淋；黃痘。郁金在處方中起著君藥的作用，將其鑒別納入質(zhì)量控制對于肝復(fù)樂