1.一種香加皮的有效成分測定方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)對照品溶液的制備
稱取綠原酸、4-甲氧基水楊醛、杠柳毒苷對照品,加甲醇制得混合對照品溶液;
(2)供試品溶液的制備
取香加皮干燥粉碎,過篩,精密稱取,加入甲醇溶液,提取20-50min,放冷,離心,取上清液,即得供試品溶液;
(3)測定法:
吸取混合對照品溶液和供試品溶液,注入超高效液相色譜儀,得到色譜圖,根據(jù)色譜圖計算供試品中相應(yīng)成分的含量;
其中,所述超高效液相色譜儀的色譜條件如下:
色譜柱選自:C18色譜柱,
流動相:0.1%-1%磷酸水溶液-甲醇流動相,進(jìn)行梯度洗脫,流動相的流速為0.1-0.5mL/min,柱溫30-40℃,
檢測波長:220-230nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,其中,步驟(1)中混合對照品溶液中綠原酸、4-甲氧基水楊醛、杠柳毒苷的濃度范圍分別為0.332mg·L-1-33.2mg·L-1、1.61mg·L-1-161.1mg·L-1、0.968mg·L-1-96.8mg·L-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,流動相為0.1%磷酸水溶液-甲醇,梯度程序如下:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,梯度程序如下:0~3min,10%~25%甲醇;3~8min,25%~37%甲醇;8~11.5min,37%~45%甲醇;11.5~13min,45%~57%甲醇;13~19min,57%~90%甲醇;19~20min,90%甲醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,梯度程序如下:
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,所述步驟(3)中,溶液的進(jìn)樣量為0.5-2μL。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,所述步驟(2)中提取方法為超聲提取、回流提取、索氏提取。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,其特征在于,所述步驟(2)中香加皮的稱樣量為0.125g-1.000g。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法,采用該方法得到的指紋圖譜相對保留時間為:
10.一種香加皮超高液相指紋圖譜的建立方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)對照品溶液的制備
分別取綠原酸、4-甲氧基水楊醛、杠柳毒苷對照品,加甲醇溶解制成質(zhì)量濃度分別為0.332mg·L-1-33.2mg·L-1、1.61mg·L-1-161.1mg·L-1、0.968mg·L-1-96.8mg·L-1的混合對照品貯備液;
(2)供試品溶液的制備
取香加皮干燥粉碎,過篩,精密稱取,加入30%甲醇溶液,采用超聲提取、回流提取或者索氏提取40min,放冷,離心,取上清液,即得供試品溶液;
(3)獲得色譜圖
以對照品溶液作為參照物,將供試品溶液和對照品溶液注入超高效液相色譜儀,得到色譜圖,
其中,所述超高效液相色譜儀的色譜條件如下:
色譜柱選自:C18色譜柱,
流動相:0.1%磷酸水溶液-甲醇流動相,進(jìn)行梯度洗脫,梯度程序為0~3min,10%~25%甲醇;3~8min,25%~37%甲醇;8~11.5min,37%~45%甲醇;11.5~13min,45%~57%甲醇;13~19min,57%~90%甲醇;19~20min,90%甲醇;流動相的流速為0.3mL/min,柱溫35℃,
檢測波長:220nm;
(4)生成對照指紋圖譜:
選擇合格的多批香加皮樣品的指紋圖譜,以綠原酸、4-甲氧基水楊醛、杠柳毒苷峰為參比峰,得到17個共有峰的圖譜,按中位數(shù)法計算生成標(biāo)準(zhǔn)對照指紋圖譜,其中,指紋圖譜相對保留時間為: