用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，包括如下步驟：（1）配制可變價金屬的無機(jī)鹽溶液為溶液Ⅰ；（2）配制2‐甲基咪唑溶液為溶液Ⅱ；（3）將溶液Ⅰ和溶液Ⅱ混合，制成金屬有機(jī)配合物溶液；（4）將葡萄糖氧化酶水溶液加入到待測葡萄糖樣品中，用緩沖溶液稀釋，在37℃培養(yǎng)，加入過氧化物酶色源底物的二甲基亞砜溶液與所述金屬有機(jī)配合物溶液，用緩沖溶液稀釋，得到溶液A，測定溶液A在可見光區(qū)的吸光光度值，比色檢測出葡萄糖的濃度。本發(fā)明的方法可以極大的縮短檢測所用的時間，操作簡單、成本低廉，避免了使用金屬納米粒子的高成本缺點，避免使用金屬氧化物等模擬酶時需要長時間反應(yīng)的缺點。
【專利說明】用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]葡萄糖是重要的生物分子，其在血液中的含量是人體健康程度的指示劑。因此，葡萄糖含量的快速、準(zhǔn)確檢測對于監(jiān)測人體健康程度(區(qū)別健康與亞健康)、對某些疾病，如糖尿病等做出早期預(yù)警及診斷都具有重要意義
[0003]葡萄糖的檢測方法主要是電化學(xué)方法，如中國發(fā)明專利(200910067282)報道了一種基于鎳納米粒子/碳纖維復(fù)合材料的非酶電化學(xué)葡萄糖傳感器，中國發(fā)明專利(200810124404.6)公開了一種基于管狀金屬材料的非酶電化學(xué)生物傳感器。電化學(xué)傳感器的檢測靈敏度高，但是易受干擾，而且檢測需要過程需要消耗一定的能量。比色檢測是近年來興起的一種檢測方法，它利用反應(yīng)體系顏色及色度的變化實現(xiàn)對目標(biāo)物的檢測。由于可以用肉眼直接觀測比色檢測的結(jié)果，因此比色檢測方法具有結(jié)果直觀、操作簡單等特點。比色法已經(jīng)成功的用于檢測DNA、蛋白以及有害重金屬離子等。一些金屬納米粒子、金屬氧化物已經(jīng)被用于比色檢測葡萄糖。雖然這些材料表現(xiàn)出很好的葡萄糖檢測性能，但是缺點也很明顯。比如，貴金屬納米粒子成本高，難以推廣。金屬氧化物的反應(yīng)活性較低，檢測時間長。因此，需要尋找新的材料克服上述材料的缺點，推動葡萄糖比色檢測的市場化發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速、準(zhǔn)確、低成本的用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下:
[0006]一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，包括如下步驟:
[0007]( I)配制濃度為I μ M?飽和的可變價金屬的無機(jī)鹽溶液為溶液I ;
[0008](2)配制濃度為I μ M?飽和的2-甲基咪唑溶液為溶液II或濃度為I μ M?飽和的4，4’ -聯(lián)吡啶溶液為溶液II ；
[0009]所述溶液I和溶液II的溶劑為水、甲醇或乙醇；
[0010](3)將溶液I和溶液II按體積比為1:100?100:1的比例混合，制成金屬有機(jī)配合物溶液；
[0011](4)將10?50微升濃度為20毫克/毫升的葡萄糖氧化酶水溶液加入到200微升待測葡萄糖樣品中，用0.02Μ pH值為6?8的緩沖溶液稀釋至500微升，在37°C培養(yǎng)15?60分鐘，加入2?100微升濃度為50毫摩爾/升的過氧化物酶色源底物的二甲基亞砜溶液與10?100微升所述金屬有機(jī)配合物溶液，用0.2M pH值為2?4的緩沖溶液稀釋至I毫升，得到溶液A，測定溶液A在可見光區(qū)的吸光光度值，比色檢測出葡萄糖的濃度。
[0012]另一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，包括如下步驟:[0013]( I)配制濃度為I μ M?飽和的可變價金屬的無機(jī)鹽溶液為溶液I ;
[0014](2)配制濃度為I μ M?飽和的2-甲基咪唑溶液為溶液II或濃度為I μ M?飽和的4，4’ -聯(lián)吡啶溶液為溶液II ；
[0015]所述溶液I和溶液II的溶劑為水、甲醇或乙醇；
[0016](3)將溶液I和溶液II按體積比為1:100?100:1的比例混合，制成金屬有機(jī)配合物溶液；
[0017](4)用下述兩種方法之一種制備金屬有機(jī)配合物薄膜:
[0018]方法一:將步驟(3)獲得的金屬有機(jī)配合物溶液中的所述金屬有機(jī)配合物收集、烘干、壓制成膜；
[0019]方法二:在固體基底材料表面原位生長金屬有機(jī)配合物薄膜，步驟為:
[0020]a將固體基底材料浸泡于0.1?2mg/mL聚乙烯吡咯烷酮水溶液中I分鐘?I天，使所述固體基底材料表面吸附聚乙烯吡咯烷酮分子；
[0021]b將步驟a制備的材料反復(fù)依次浸泡于所述步驟(I)獲得的溶液I中I分鐘?I小時和步驟(2)獲得的溶液II中I分鐘?I小時；在固體基底材料表面原位生長出金屬有機(jī)配合物薄膜，直到金屬有機(jī)配合物薄膜的厚度為0.5?10 μ m為止；
[0022](5)將10?50微升濃度為20毫克/毫升的葡萄糖氧化酶水溶液加入到200微升待測葡萄糖樣品中，用0.02M pH值為6?8的緩沖溶液稀釋至500微升，在37°C培養(yǎng)15?60分鐘，加入2?100微升濃度為50毫摩爾/升的過氧化物酶色源底物的二甲基亞砜溶液，用0.2M pH值為2?4的緩沖溶液稀釋至I毫升，得溶液B ；
[0023](6)取I?100微升溶液B滴在所述金屬有機(jī)配合物薄膜的表面，放置5?15分鐘，觀察液滴顏色，比色檢測出葡萄糖的濃度。
[0024]所述可變價金屬為鐵、銅、金或銀。
[0025]所述無機(jī)鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽或硝酸鹽；
[0026]所述過氧化物酶色源底物為3，3’，5，5’ -四甲基聯(lián)苯胺或2，2’ -連氮
基-雙- (3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽。
[0027]所述0.02M pH值為6?8的緩沖溶液為磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液或磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液。
[0028]所述0.2M pH值為2?4的緩沖溶液為磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液，檸檬酸_氫氧化鈉-鹽酸緩沖液，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液或乙酸-乙酸鈉緩沖液。
[0029]所述固體基底材料為聚乙烯，聚苯乙烯，玻璃或纖維素薄膜。
[0030]本發(fā)明的方法用具有高的催化過氧化物反應(yīng)活性的金屬有機(jī)配合物作為過氧化物模擬酶，可以極大的縮短檢測所用的時間，操作簡單、成本低廉，避免了使用金屬納米粒子的高成本缺點，避免使用金屬氧化物等模擬酶時需要長時間反應(yīng)的缺點。
[0031]實驗測得的葡萄糖的檢測范圍為0.05?20mM，檢測限為0.0lmM。實驗測試結(jié)果重現(xiàn)性好，可用于臨床及環(huán)境中葡萄糖的檢測。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1為實施例26中所用金屬有機(jī)配合物(實施例17配制)的掃描電鏡圖。
[0033]具體的實施方式[0034]本發(fā)明的實施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好的理解本發(fā)明，但不以任何方法限制本發(fā)明。
[0035]溶液I的配制:
[0036]
【權(quán)利要求】
1.一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是包括如下步驟: (1)配制濃度為IμΜ?飽和的可變價金屬的無機(jī)鹽溶液為溶液I ; (2)配制濃度為ΙμΜ?飽和的2-甲基咪唑溶液為溶液II或濃度為ΙμΜ?飽和的4，4’ -聯(lián)吡啶溶液為溶液II ； 所述溶液I和溶液II的溶劑為水、甲醇或乙醇； (3)將溶液I和溶液II按體積比為1:100?100:1的比例混合，制成金屬有機(jī)配合物溶液； (4)將10?50微升濃度為20毫克/毫升的葡萄糖氧化酶水溶液加入到200微升待測葡萄糖樣品中，用0.02Μ pH值為6?8的緩沖溶液稀釋至500微升，在37°C培養(yǎng)15?60分鐘，加入2?100微升濃度為50毫摩爾/升的過氧化物酶色源底物的二甲基亞砜溶液與10?100微升所述金屬有機(jī)配合物溶液，用0.2M pH值為2?4的緩沖溶液稀釋至I毫升，得到溶液A，測定溶液A在可見光區(qū)的吸光光度值，比色檢測出葡萄糖的濃度。
2.一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是包括如下步驟: (1)配制濃度為ΙμΜ?飽和的可變價金屬的無機(jī)鹽溶液為溶液I; (2)配制濃度為ΙμΜ?飽和的2-甲基咪唑溶液為溶液II或濃度為ΙμΜ?飽和的4，4’ -聯(lián)吡啶溶液為溶液II ； 所述溶液I和溶液II的溶劑為水、甲醇或乙醇； (3)將溶液I和溶液II按 體積比為1:100?100:1的比例混合，制成金屬有機(jī)配合物溶液； (4)用下述兩種方法之一種制備金屬有機(jī)配合物薄膜: 方法一:將步驟(3)獲得的金屬有機(jī)配合物溶液中的所述金屬有機(jī)配合物收集、烘干、壓制成膜； 方法二:在固體基底材料表面原位生長金屬有機(jī)配合物薄膜，步驟為:a將固體基底材料浸泡于0.1?2mg/mL聚乙烯吡咯烷酮水溶液中I分鐘?I天，使所述固體基底材料表面吸附聚乙烯吡咯烷酮分子； b將步驟a制備的材料反復(fù)依次浸泡于所述步驟(I)獲得的溶液I中I分鐘?I小時和步驟(2)獲得的溶液II中I分鐘?I小時；在固體基底材料表面原位生長出金屬有機(jī)配合物薄膜，直到金屬有機(jī)配合物薄膜的厚度為0.5?10 μ m為止； (5)將10?50微升濃度為20毫克/毫升的葡萄糖氧化酶水溶液加入到200微升待測葡萄糖樣品中，用0.02M pH值為6?8的緩沖溶液稀釋至500微升，在37°C培養(yǎng)15?60分鐘，加入2?100微升濃度為50毫摩爾/升的過氧化物酶色源底物的二甲基亞砜溶液，用0.2M pH值為2?4的緩沖溶液稀釋至I毫升，得溶液B ； (6)取I?100微升溶液B滴在所述金屬有機(jī)配合物薄膜的表面，放置5?15分鐘，觀察液滴顏色，比色檢測出葡萄糖的濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是所述可變價金屬為鐵、銅、金或銀。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是所述無機(jī)鹽為鹽酸鹽、硫酸鹽或硝酸鹽；
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是所述過氧化物酶色源底物為3，3’，5，5’ -四甲基聯(lián)苯胺或2，2’ -連氮基-雙- (3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是所述0.02M pH值為6?8的緩沖溶液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液或磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是所述0.2M pH值為2?4的緩沖溶液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液或乙酸-乙酸鈉緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用金屬有機(jī)配合物對葡萄糖進(jìn)行比色檢測的方法，其特征是所述固體基底材料為聚乙烯，`聚苯乙烯，玻璃或纖維素薄膜。
【文檔編號】G01N21/78GK103439273SQ201310260524
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月26日
【發(fā)明者】翟俊峰, 劉作家, 李子意, 韓緒儒, 李聰聰 申請人:浙江斯?jié)萍加邢薰?br>