專利名稱：一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置。
背景技術(shù)：
臨床上，用PCR方法檢測(cè)HBV DNA能夠最準(zhǔn)確的反映HBV病毒的復(fù)制情況，但因其成本高、操作復(fù)雜及實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求高等諸多因素限制，難以作為常規(guī)方法來檢測(cè)HBV的感染。從理論上來說，HBcAg的檢出主要差異在HBeAg和HBeAb之間。HBcAg主要出現(xiàn)在HBV感染的早期，它的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒的復(fù)制，有較強(qiáng)的傳染性；HBeAb的出現(xiàn)則預(yù)示著病情趨向好轉(zhuǎn)，這時(shí)體內(nèi)的HBeAg逐漸消失，病毒的復(fù)制減弱，傳染性減少；HBeAg與HBcAg為病毒復(fù)制的中間產(chǎn)物，均為C基因區(qū)編碼，它們之間的密切基因位置關(guān)系決定了它們有較高的 表達(dá)符合性，所以我們認(rèn)為一般情況下可以用HBeAg及HBcAg的檢測(cè)代替PCR HBV DNA的檢測(cè)來反映HBV的復(fù)制情況。由于血清內(nèi)游離HBcAg的量極少，常規(guī)方法不易檢出，通常采用的辦法是將乙肝病毒表面抗體和乙肝病毒核心抗體同時(shí)包被到微孔板上，乙肝病毒表面抗體與乙肝病毒氏顆粒表面抗原結(jié)合，在裂解劑的作用下乙肝病毒氏顆料殼裂解，暴露出乙肝病毒核心抗原后被微孔板上的乙肝病毒核心抗體所吸附，再使過氧化物酶與染色底物反應(yīng)，最終達(dá)到檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的目的。這種方法在包被抗體時(shí),通常采用針對(duì)HBsAg和HBcAg的免疫球蛋白多抗多被，多抗作為包被抗體，效價(jià)低、特異性差，其檢測(cè)結(jié)果的靈敏度低，操作流程也較長(zhǎng)。隨著現(xiàn)代診斷醫(yī)學(xué)的發(fā)展，ELISA診斷試劑已經(jīng)從最初的合成肽抗原，發(fā)展到了基因工程抗原。合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限，只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸，而利用基因工程制備的抗原分子量更大，也具有更強(qiáng)的穩(wěn)定性，因此用基因工程抗原取代合成肽抗原已成為必然的市場(chǎng)和技術(shù)選擇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服上述技術(shù)缺點(diǎn)提供一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置。本發(fā)明解決技術(shù)問題采用的技術(shù)方案為包括一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗(yàn)箱，所述檢測(cè)方法包括檢驗(yàn)操作步驟、檢驗(yàn)試劑和檢驗(yàn)結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗(yàn)箱體內(nèi)設(shè)有加樣吸管、微孔板、洗板機(jī)、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標(biāo)板和加熱管。所述檢驗(yàn)方法為雙抗體夾心法檢測(cè)HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時(shí)包被固相載體。所述檢驗(yàn)試劑為，促進(jìn)劑，工作濃度O. 4 400mg/ml的抗-HBsAg,裂解劑,工作濃度1% 9%的咿-40、0· 05% I. 5%的巰基乙醇、O. 05 I. 0M/PH7. 5的Tris組成的混合液，標(biāo)記物，工作濃度為I : 350 I : 1400的HRP-抗-HBcAg。所述檢驗(yàn)操作步驟為,微孔板每孔加待檢血清100 μ 1,37°C孵育60min后,加促進(jìn)劑每孔50 μ 1，微型震蕩器振蕩lmin，37°C孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μ 1，37°C孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37°C孵育10 15min，比色。所述便攜檢驗(yàn)箱內(nèi)部中空，間隔設(shè)有控溫室和震蕩室，所述控溫室內(nèi)設(shè)有加熱管、微孔板支架、微孔板和洗板機(jī)，所述震蕩室內(nèi)設(shè)有微型震蕩器、試劑瓶架、試管架和真空抽氣裝置，所述便攜檢驗(yàn)箱體頂部設(shè)有震蕩器定時(shí)開關(guān)、酶標(biāo)板和加樣吸管。所述試管架上設(shè)有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設(shè)有促進(jìn)劑瓶、裂解劑瓶和顯色劑瓶，所述洗板機(jī)上設(shè)有洗板機(jī)開關(guān)。所述加熱管上設(shè)有溫控板和加熱定時(shí)開關(guān)，所述試管架上設(shè)有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設(shè)有促進(jìn)劑瓶、裂解劑瓶和標(biāo)記物瓶，所述洗板機(jī)上設(shè)有洗板機(jī)開關(guān)。 所述便攜檢驗(yàn)箱背側(cè)面設(shè)有電源開關(guān)，所述電源開關(guān)與加熱管、洗板機(jī)、微型震蕩器、真空抽氣裝置分別形成電氣通路。本發(fā)明所具有的有益效果是本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、快速，實(shí)用性強(qiáng)，便攜性高，與PCR探針檢測(cè)HBV-DNA陽(yáng)性結(jié)果符合率為92. 3%，與乙型肝炎兩對(duì)半檢測(cè)HBV陽(yáng)性結(jié)果符合率為94. 1%，達(dá)到實(shí)際臨床檢驗(yàn)要求，適合基層醫(yī)療單位使用，有效滿足HBV快速檢測(cè)的臨床需要。


附圖I為本發(fā)明配套便攜裝置的俯視示意圖。附圖2為本發(fā)明配套便攜裝置的縱切面示意圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做以下詳細(xì)說明。如圖所示，本發(fā)明包括一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗(yàn)箱，所述檢測(cè)方法包括檢驗(yàn)操作步驟、檢驗(yàn)試劑和檢驗(yàn)結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗(yàn)箱體I內(nèi)設(shè)有加樣吸管21、微孔板6、洗板機(jī)7、微型震蕩器10、真空抽氣裝置19、酶標(biāo)板18和加熱管4 ；所述檢驗(yàn)方法為雙抗體夾心法檢測(cè)HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時(shí)包被固相載體。所述檢驗(yàn)試劑為，促進(jìn)劑，工作濃度O. 4 400mg/ml的抗-HBsAg，裂解劑，工作濃度1% 9%的咿-40、0· 05% I. 5%的巰基乙醇、O. 05 I. 0M/PH7. 5的Tris組成的混合液，標(biāo)記物，工作濃度為I : 350 I : 1400的HRP-抗-HBcAg。所述檢驗(yàn)操作步驟為,微孔板6每孔加待檢血清100 μ 1,37°C孵育60min后,加促進(jìn)劑每孔50μ 1，微型震蕩器振蕩lmin，37°C孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μ 1，37°C孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37°C孵育10 15min,比色。所述便攜檢驗(yàn)箱體I內(nèi)部中空，間隔設(shè)有控溫室2和震蕩室3，所述控溫室2內(nèi)設(shè)有加熱管4、微孔板支架5、微孔板6和洗板機(jī)7,所述震蕩室3內(nèi)設(shè)有微型震蕩器10、試劑瓶架14、試管架12和真空抽氣裝置19，所述便攜檢驗(yàn)箱體頂部設(shè)有震蕩器定時(shí)開關(guān)11、酶標(biāo)板18和加樣吸管21。所述加熱管4上設(shè)有溫控板8和加熱定時(shí)開關(guān)9，所述試管架12上設(shè)有待檢血清試管13，所述試劑瓶架14上設(shè)有促進(jìn)劑瓶15、裂解劑瓶16和標(biāo)記物瓶17，所述洗板機(jī)7上設(shè)有洗板機(jī)開關(guān)22。所述便攜檢驗(yàn)箱背側(cè)面設(shè)有電源開關(guān)20，所述電源開關(guān)20與加熱管4、洗板機(jī)7、微型震蕩器10、真空抽氣裝置19分別形成電氣通路。實(shí)施例按常規(guī)方法在聚苯乙烯微孔板上同時(shí)包被單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg，入洗板機(jī)洗滌3次，拍干；每孔加待檢血清100μ 1，進(jìn)控溫室，在37°C環(huán)境下孵育60min ;每孔加促進(jìn)劑50μ 1，進(jìn)微型震蕩器振蕩lmin，進(jìn)控溫室，在37°C環(huán)境下孵育20min，洗板4次，拍干；每孔加裂解劑100 μ 1，進(jìn)控溫室，37°C環(huán)境下孵育20min，洗板4次。每孔加酶標(biāo)記物HRP-抗-HBcAglOO μ 1，進(jìn)溫控室，在37°C環(huán)境下孵育60min，進(jìn)洗板·機(jī)，洗板4次，拍干；每孔加100 μ I底物顯色液，進(jìn)微型震蕩器振蕩lmin，在室溫環(huán)境下放置5 20分鐘；每孔加2mol/L H2S0450 μ I終止反應(yīng)；比色，判定結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于包括一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗(yàn)箱，所述檢測(cè)方法包括檢驗(yàn)操作步驟、檢驗(yàn)試劑和檢驗(yàn)結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗(yàn)箱體內(nèi)設(shè)有加樣吸管、微孔板、洗板機(jī)、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標(biāo)板和加熱管。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述檢驗(yàn)方法為雙抗體夾心法檢測(cè)HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時(shí)包被固相載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述檢驗(yàn)試劑為，促進(jìn)劑，工作濃度O. 4 400mg/ml的抗-HBsAg，裂解劑，工作濃度1% 9%的咿-40、0· 05% I. 5%的巰基乙醇、O. 05 I. 0M/PH7. 5的Tris組成的混合液，標(biāo)記物，工作濃度為I : 350 I : 1400的HRP-抗-HBcAg。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述檢驗(yàn)操作步驟為，微孔板每孔加待檢血清IOOy 1，37°C孵育60min后，加促進(jìn)劑每孔50μ 1，微型震蕩器振蕩lmin，37°C孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μ 1，37°C孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37°C孵育10 15min，比色。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述便攜檢驗(yàn)箱內(nèi)部中空，間隔設(shè)有控溫室和震蕩室，所述控溫室內(nèi)設(shè)有加熱管、微孔板支架、微孔板和洗板機(jī)，所述震蕩室內(nèi)設(shè)有微型震蕩器、試劑瓶架、試管架和真空抽氣裝置，所述便攜檢驗(yàn)箱體頂部設(shè)有震蕩器定時(shí)開關(guān)、酶標(biāo)板和加樣吸管。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述加熱管上設(shè)有溫控板和加熱定時(shí)開關(guān)，所述試管架上設(shè)有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設(shè)有促進(jìn)劑瓶、裂解劑瓶和標(biāo)記物瓶，所述洗板機(jī)上設(shè)有洗板機(jī)開關(guān)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述便攜檢驗(yàn)箱背側(cè)面設(shè)有電源開關(guān)，所述電源開關(guān)與加熱裝置、洗板機(jī)、微型震蕩器、真空抽氣裝置分別形成電氣通路。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，本發(fā)明包括一種直接檢測(cè)乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗(yàn)箱，所述檢測(cè)方法包括檢驗(yàn)操作步驟、檢驗(yàn)試劑和檢驗(yàn)結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗(yàn)箱體內(nèi)設(shè)有加樣吸管、微孔板、洗板機(jī)、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標(biāo)板和加熱管。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、快速，實(shí)用性強(qiáng)，便攜性高，與PCR探針檢測(cè)HBV-DNA陽(yáng)性結(jié)果符合率為92.3％，與乙型肝炎兩對(duì)半檢測(cè)HBV陽(yáng)性結(jié)果符合率為94.1％，達(dá)到實(shí)際臨床檢驗(yàn)要求，適合基層醫(yī)療單位使用，有效滿足HBV快速檢測(cè)的臨床需要。
文檔編號(hào)G01N33/543GK102914652SQ20121039815
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者徐連江, 李升玲, 李翠霞 申請(qǐng)人:徐連江