專利名稱：用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種方法，特別是一種用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的 方法。
背景技術(shù)：
核磁共振技術(shù)是一種用來研究物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)及物理特性的光譜學(xué)方法，尤其是近 年脈沖傅里葉變換核磁共振以及超導(dǎo)核磁共振的引用，二維、三維、固體高分辨核磁共振譜 圖的出現(xiàn)，提高了核磁共振譜儀的靈敏度和信息量，成為了現(xiàn)代中藥研究不可或缺的結(jié)構(gòu) 分析工具。目前使用核磁共振技術(shù)測(cè)定中藥的氫譜、碳譜等操作時(shí)，都是用水、甲醇、乙醚、丙 酮、正丁醇等萃取劑分別提取中藥的水溶成分和油溶成分，揮干萃取劑后再將提取物溶解 于重水、氘代二甲基亞砜等內(nèi)標(biāo)物然后進(jìn)行測(cè)定。在這里，氘代二甲基亞砜?jī)H作為內(nèi)標(biāo)物而 非萃取劑，其他萃取劑提取的水溶成分或油溶成分只是中藥的部分成分，其中的熱敏、易氧 化、易水解、易變性的成分在萃取過程中有可能被破壞，揮發(fā)成分也可能隨萃取劑揮干而散 失，由此得到的核磁共振譜圖可能是不完整和失真的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種直接用二甲基亞砜作為萃取劑對(duì)中藥材和制劑進(jìn)行 提取分析，能一次性將水溶、油溶、揮發(fā)等中藥的所有成分完全提取的用核磁共振技術(shù)分析 中藥二甲基亞砜提取液的方法。本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達(dá)到一種用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞 砜提取液的方法，其特征在于制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前 處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定的萃取劑量用二甲基亞砜替代原萃取劑，在18. 45°C 189°C的溫度 下，用中藥常用的提取方法提取，濾過，為供試品溶液，采用常用核磁共振儀器系統(tǒng)，根據(jù)核 磁共振儀器系統(tǒng)和中藥特性選擇各系統(tǒng)參數(shù)，對(duì)供試品溶液定性定量測(cè)定其所含成分，從 而得到包含了中藥所有成分在內(nèi)的核磁共振譜圖、分子結(jié)構(gòu)和物理特性。本發(fā)明的目的還可以通過以下措施來達(dá)到如果用常用方法提取的提取液粘度 大，可采用離心分離，取上清液為供試品溶液，替代濾過。所述的各系統(tǒng)參數(shù)包括工作頻率、 譜寬、溫度、累加次數(shù)。所述的中藥常用提取方法包括超聲法提取，采用超聲處理15 120 分鐘提取，濾過。所述的中藥常用萃取方法還包括滲漉法、浸漬法、煎煮法、回流法、蒸餾法、 升華法、旋流法、逆流法、壓榨法、微波法。所述的常用核磁共振儀器系統(tǒng)包括連續(xù)波核磁共 振譜儀、脈沖傅里葉核磁共振譜儀和超導(dǎo)核磁共振譜儀。本方法適用于氫譜、碳譜、氧譜、磷 譜、硅譜常規(guī)一維測(cè)試，C0SY、HMQC、HMBC、M0ESY譜二維測(cè)試，以及各種多維NMR譜測(cè)試。提 取溫度可采用25°C。所述的二甲基亞砜還可與0.5% 70%水混合，作為萃取劑。二甲基 亞砜與水的混合液對(duì)中藥的提取溫度為_20°C 100°C。本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)
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1、用二甲基亞砜作為萃取劑對(duì)中藥材和制劑進(jìn)行提取分析，能在高于18. 45°C的 室溫用超聲法一次性快速將水溶、油溶、揮發(fā)等中藥的所有成分完全提取，并能避免活性成 分揮發(fā)、水解、氧化、變性，最大限度保存了它們的生物活性。且操作簡(jiǎn)便安全、提取時(shí)間短。2、用核磁共振技術(shù)分析中藥的二甲基亞砜提取液，定性定量測(cè)定其所含成分；分 析其所含成分的分子結(jié)構(gòu)和物理特性；測(cè)定其所含成分經(jīng)細(xì)胞、細(xì)菌、動(dòng)物等吸收、轉(zhuǎn)化、分 布、排除、代謝后的變化，了解活性成分、毒性成分以及各種成分相互之間的作用機(jī)理，并為 化學(xué)合成篩選先導(dǎo)化合物。3、二甲基亞砜還可與水以任意比例混合，平衡無機(jī)鹽等水溶成分的溶解率，并能 在0 °c以下的低溫進(jìn)行中藥提取。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明下面將結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳述實(shí)施例一制備供試品溶液，按《中國(guó)藥典》的規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按 同一項(xiàng)下規(guī)定的萃取劑量用二甲基亞砜替代原萃取劑，在25°C的溫度下，超聲處理30分鐘 提取，濾過，如果提取液粘度大，可采用離心分離，取上清液為供試品溶液。如果供試品含生 物酶、蛋白質(zhì)等易氧化、易變性、熱敏成分，應(yīng)采用滲漉法或浸漬法制備供試品溶液。本方法適用于常規(guī)一維測(cè)試包括氫譜、碳譜(含DEPT)、氧譜、磷譜、硅譜等；各種 二維譜測(cè)試如C0SY、HMQC、HMBC、M0ESY譜等；各種多維NMR譜測(cè)試。其方法與現(xiàn)有技術(shù)相 同。以氫譜測(cè)定為例選用JE0L-FX60Q型核磁共振譜儀，工作頻率為60兆赫，譜寬為 1000赫茲，STMS= SDMS0+2. 50，25°C室溫測(cè)定，平均累加次數(shù)為100次。結(jié)果是供試品 溶液所有成分的IHNMR譜圖。藥理分析由于二甲基亞砜具有誘導(dǎo)干細(xì)胞成熟為肌肉細(xì)胞的重要功能，是其他 常用的中藥萃取劑無法比擬的，將中藥的二甲基亞砜提取液透過細(xì)胞層次ADME/Tox研究 系統(tǒng)(例如Cac0-2、MDCK細(xì)胞單層吸收模型)或與細(xì)胞、細(xì)菌共育和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，通過它們吸 收、轉(zhuǎn)化、分布、排除、代謝，取樣用核磁共振技術(shù)分析，比對(duì)中藥成分前后發(fā)生的變化，將活 性成分、毒性成分和各種成分之間相互作用的機(jī)理用現(xiàn)代技術(shù)手段加以分析，使傳統(tǒng)中醫(yī) 藥理論體系與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)模式接軌，并為化學(xué)合成篩選先導(dǎo)化合物。以細(xì)胞層次上的實(shí)驗(yàn)為例，在ADME/Tox研究系統(tǒng)中，將Caco_2或MDCK細(xì)胞接種 在專用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)的Transwell池中，經(jīng)細(xì)胞匯合、分化達(dá)到細(xì)胞單層完整時(shí)，將中藥 的二甲基亞砜提取液注入池子的頂端，然后在不同的時(shí)間從池子的底端抽取經(jīng)細(xì)胞擴(kuò)散吸 收、代謝后的產(chǎn)物和池子頂端的中藥二甲基亞砜提取液，用核磁共振技術(shù)進(jìn)行分析，比對(duì)各 種成分前后發(fā)生的變化，了解它們的作用機(jī)理。也可將中藥的二甲基亞砜提取液加入細(xì)胞 培養(yǎng)基(液)中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間(如溫育兩天)，取樣用核磁共振技術(shù)分析，比對(duì)各 種成分前后發(fā)生的變化。特別是其中胞漿酶活性的大小直接對(duì)應(yīng)死亡細(xì)胞的數(shù)量，是研究 中藥毒副作用的方法之一。通過細(xì)胞、細(xì)菌和動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，從中藥的活性成分中篩選出適合于化學(xué)合成的 先導(dǎo)化合物，為新藥的研發(fā)提供一條便捷的途徑。
實(shí)施例二制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定 的萃取劑量用二甲基亞砜替代原萃取劑，在18. 450C的溫度下，超聲處理15分鐘提取，濾 過，如果提取液粘度大，可采用離心分離，取上清液為供試品溶液。其它步驟及原理與實(shí)施 例一相同。實(shí)施例三制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定 的萃取劑量用二甲基亞砜替代原萃取劑，在189°C的溫度下，超聲處理120分鐘提取，濾過， 為供試品溶液。其它步驟及原理與實(shí)施例一相同，本操作適用于石決明等中藥。實(shí)施例四制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定 的萃取劑量用二甲基亞砜替與0.5%水混合，代替原萃取劑，在-20°C的溫度下，浸漬48小 時(shí)，壓榨提取，濾過，為供試品溶液。其它步驟及原理與實(shí)施例一相同，本操作適用于中藥鮮 品的提取。實(shí)施例五制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定 的萃取劑量用二甲基亞砜替與70%水混合，代替原萃取劑，在100°C的溫度下，煎煮2小時(shí) 提取，濾過，為供試品溶液。其它步驟及原理與實(shí)施例一相同。實(shí)施例六制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定 的萃取劑量用二甲基亞砜與35%水混合，代替原萃取劑，在45°C的溫度下，超聲處理30分 鐘提取，濾過，如果提取液粘度大，可采用離心分離，取上清液為供試品溶液。其它步驟及原 理與實(shí)施例一相同，本操作能平衡提取液中的無機(jī)鹽含量。
權(quán)利要求
1.一種用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征在于制備供試品 溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定的萃取劑量用二甲基 亞砜替代原萃取劑，在18. 45°C 189°c的溫度下，用中藥常用的提取方法提取，濾過，為供 試品溶液，采用常用核磁共振儀器系統(tǒng)，根據(jù)核磁共振儀器系統(tǒng)和中藥特性選擇各系統(tǒng)參 數(shù)，對(duì)供試品溶液定性定量測(cè)定其所含成分，從而得到包含了中藥所有成分在內(nèi)的核磁共 振譜圖、分子結(jié)構(gòu)和物理特性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于如果用常用方法提取的提取液粘度大，可采用離心分離，取上清液為供試品溶液，替 代濾過。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于所述的各系統(tǒng)參數(shù)包括工作頻率、譜寬、溫度、累加次數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于所述的中藥常用提取方法包括超聲法提取，采用超聲處理15 120分鐘提取，濾過。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于所述的中藥常用萃取方法還包括滲漉法、浸漬法、煎煮法、回流法、蒸餾法、升華法、旋 流法、逆流法、壓榨法、微波法。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于所述的常用核磁共振儀器系統(tǒng)包括連續(xù)波核磁共振譜儀、脈沖傅里葉核磁共振譜儀 和超導(dǎo)核磁共振譜儀。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于本方法適用于氫譜、碳譜、氧譜、磷譜、硅譜常規(guī)一維測(cè)試，COSY、HMQC、HMBC、MOESY譜 二維測(cè)試，以及各種多維NMR譜測(cè)試。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于提取溫度可采用25°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征 在于所述的二甲基亞砜還可與0. 5% 70%水混合，作為萃取劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特 征在于二甲基亞砜與水的混合液對(duì)中藥的提取溫度為-20°C 100°C。
全文摘要
一種用核磁共振技術(shù)分析中藥二甲基亞砜提取液的方法，其特征在于制備供試品溶液，按規(guī)定稱取中藥材或中藥制劑，并進(jìn)行前處理，按同一項(xiàng)下規(guī)定的萃取劑量用二甲基亞砜替代原萃取劑，在18.45℃～189℃的溫度下，用中藥常用的提取方法提取，濾過，為供試品溶液，采用常用核磁共振儀器系統(tǒng)，根據(jù)核磁共振儀器系統(tǒng)和中藥特性選擇各系統(tǒng)參數(shù)，對(duì)供試品溶液定性定量測(cè)定其所含成分，從而得到包含了中藥所有成分在內(nèi)的核磁共振譜圖、分子結(jié)構(gòu)和物理特性。本發(fā)明用二甲基亞砜作為萃取劑對(duì)中藥材和制劑進(jìn)行提取分析，能在高于18.45℃的室溫用超聲法一次性快速將水溶、油溶、揮發(fā)等中藥的所有成分完全提取，并能避免活性成分揮發(fā)、水解、氧化、變性，最大限度保存了它們的生物活性。且操作簡(jiǎn)便安全、提取時(shí)間短。
文檔編號(hào)G01N24/08GK102147378SQ201110047419
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月28日
發(fā)明者周至譓 申請(qǐng)人:周至譓