本發(fā)明涉及一種玉米赤霉烯酮的適配體親和柱及其制備方法和用途。屬食品安全檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

玉米赤霉烯酮( zearalenone, ZEN) 又稱F-2 毒素, 是一種2, 4-二羥基苯甲酸內(nèi)酯類化合物, 具雌激素活性, 化學(xué)名稱為6-( 10-羥基-6-氧基碳烯基)-β雷鎖酸-μ-內(nèi)酯。是由禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌等產(chǎn)生的真菌毒素。它廣泛存在于自然界, 對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育有著重要的作用,具有很強(qiáng)的雌性激素作用,可引起豬、大鼠、小鼠、家禽等多種動(dòng)物和人的雌激素過(guò)多綜合征, 還具有生殖發(fā)育毒性、免疫毒性、基因毒性及可疑致癌性等。主要污染玉米、小麥、大麥等糧谷類作物,。Plcinta 對(duì)世界上近二十個(gè)國(guó)家的谷物和動(dòng)物飼料中的真菌毒素含量做了一個(gè)調(diào)查, 發(fā)現(xiàn)大多數(shù)國(guó)家的谷物和動(dòng)物飼料中都不同程度地受到ZEN 的污染并導(dǎo)致家禽的毒害, 我國(guó)的江蘇、四川、河北、上海郊區(qū)等地也發(fā)生過(guò)因ZEN 導(dǎo)致豬中毒的事件。為了控制ZEN 對(duì)人和動(dòng)物產(chǎn)生的危害,至2003 年,世界上已有19 個(gè)國(guó)家制訂了食品中ZEN 限量標(biāo)準(zhǔn),而且歐盟于2005 年制定了食品中ZEN 統(tǒng)一限量標(biāo)準(zhǔn)。例如澳大利亞規(guī)定谷物中ZEN 的含量不能超過(guò)50ng/g,意大利規(guī)定在谷物和谷類產(chǎn)品當(dāng)中ZEN 的含量不能超過(guò)100ng/g, 而在法國(guó), 植物油和谷類當(dāng)中ZEN 的含量必須低于200ng/g 。目前,中國(guó)尚未建立食品中ZEN 的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法, 為保護(hù)中國(guó)在世界糧食貿(mào)易中的經(jīng)濟(jì)利益和消費(fèi)者健康,迫切需要建立測(cè)定ZEN 的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法,并制訂其限量標(biāo)準(zhǔn)。

目前玉米赤霉烯酮的檢測(cè)方法有薄層層析法、高效液相色譜法（HPLC）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、酶聯(lián)免疫分析法等。

其中薄層層析法是最早使用也是最廣泛使用的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法，其優(yōu)點(diǎn)是適合于沒(méi)有經(jīng)過(guò)專門培訓(xùn)的人員操作,且成本低,無(wú)需價(jià)格昂貴的儀器,。但是薄層層析法對(duì)樣品處理繁瑣，實(shí)驗(yàn)過(guò)程復(fù)雜，所需檢測(cè)周期較長(zhǎng)，容易受到雜質(zhì)的干擾。測(cè)定時(shí)用目測(cè)半定量,主觀影響較大,靈敏度不高等,已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代檢測(cè)要求。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EL ISA ）檢測(cè)方法檢測(cè)特異、快速、靈敏度高、并且成本較低。成本低的特點(diǎn),適用于基層機(jī)構(gòu)大量樣品的篩選和普查,可以大大節(jié)省時(shí)間和費(fèi)用,因此越來(lái)越受到基層檢驗(yàn)單位的歡迎。ELISA方法的主要問(wèn)題是容易造成假陽(yáng)性。因此主要用于基層的篩查檢測(cè)。

高效液相色譜法(HPLC)具有準(zhǔn)確度高、靈敏性強(qiáng)、可微量測(cè)定等優(yōu)點(diǎn),是目前常用于食品中毒素檢測(cè)的方法。但因其對(duì)樣品中毒素純度的要求較高,導(dǎo)致檢測(cè)成本高、周期長(zhǎng),無(wú)法滿足大批量樣品快速篩選的需要,所以使用受到限制。今年來(lái)發(fā)展起來(lái)的免疫親和柱-高效液相色譜（IAC-HPLC)）將免疫親和純化技術(shù)與高效液相色譜相結(jié)合。使HPLC的使用更加廣泛。免疫親和柱作為一種新的凈化技術(shù),在真菌毒素的分析檢測(cè)中應(yīng)用越來(lái)越廣泛。它是將特異性抗體結(jié)合到活化的固相載體上填充而成。當(dāng)樣品提取液通過(guò)柱子時(shí),其中的抗原與抗體結(jié)合,其他雜質(zhì)則通過(guò)水溶液洗掉,再用有機(jī)溶劑將抗原即毒素洗脫下來(lái),從而使樣品中的毒素得以凈化。Angelo 等[J Chromatogra2phy A ,1998 ,815 :133～140.9 ]用乙腈2水(90 ∶10) 提取玉米樣品,用VicamZEN 免疫親和柱進(jìn)行純化,并用反相HPLC 檢測(cè)。在0. 1～10 μg/ g 的加標(biāo)水平的回收率為93 %～99. 5 %,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6 % ,檢出限為3 ng/ g ,信噪比3 ∶1 。

免疫親和柱具有操作簡(jiǎn)單，特異性高的優(yōu)點(diǎn)。但是由于抗體獲得困難，免疫親和柱通常比較昂貴。并且由于抗體本身是一種蛋白質(zhì)，其活性受到周圍環(huán)境的影響。保存不當(dāng)或者操作不當(dāng)很容易造成抗體失活從而影響免疫親和柱的效率。

適配體是一段核酸序列，通常為DNA或者RNA序列。 單鏈的核酸序列可以形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而能與靶點(diǎn)特異性結(jié)合。通過(guò)多次的富集和篩選，能夠篩選到與靶點(diǎn)有高親和力的特異性適配體。Herman等描述了核酸適配體的結(jié)合特異性，[Science 287,820-825].核酸適配體相對(duì)于抗體來(lái)說(shuō)更穩(wěn)定，不易受到環(huán)境的影響，并且核酸適配體可以化學(xué)合成，保證序列的準(zhǔn)確性。[Song. Trends Analy. Chem 2008.27(2)]。

核酸適配體被應(yīng)用于小分子的檢測(cè)，在專利CN105505940A中，描述了一種黃曲霉毒素B1的適配體DNA傳感器。通過(guò)黃曲霉毒素B1的適配體，及多條互補(bǔ)探針序列制備DNA傳感器，通過(guò)酶底物反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素B1的檢測(cè)。在專利CN105400790A中，描述了一種黃曲霉毒素的檢測(cè)方法。利用黃曲霉毒素B1的適配體與蔗糖酶結(jié)合，通過(guò)酶與糖底物的相互作用，依靠血糖儀實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素B1的檢測(cè)。上述都是利用適配體實(shí)現(xiàn)真菌毒素的檢測(cè)。

利用適配體進(jìn)行真菌毒素分離的報(bào)道較少，在專利CN104399283中，描述了一種黃曲霉毒素B1的適配體親和柱。該專利利用環(huán)氧基活化的瓊脂糖微球，將黃曲霉毒素B1的適配體偶聯(lián)，制備成親和柱。實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素B1的分離。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種玉米赤霉烯酮適配體親和柱及其制備方法和用途

在本發(fā)明中，我們利用SELEX系統(tǒng)，從適配體文庫(kù)中篩選出來(lái)一條高特異性、高親和力的的新的玉米赤霉烯酮的DNA適配體。適配體修飾后與N-羥基琥珀酰亞胺活化的載體通過(guò)共價(jià)鍵進(jìn)行偶聯(lián)。經(jīng)過(guò)洗滌和封閉得到玉米赤霉烯酮的特異性載體。載體裝柱后就形成了高親和力的玉米赤霉烯酮適配體親和柱

該親和柱操作簡(jiǎn)便，純化玉米赤霉烯酮效率高。能耐受有機(jī)溶劑，并且可以重復(fù)使用。樣本經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的處理后就可以進(jìn)行純化，得到純度很高的玉米赤霉烯酮。用于高效液相色譜檢測(cè)和熒光儀檢測(cè)。

具體操作如下：

本發(fā)明最大的優(yōu)勢(shì)就是利用了核酸適配體的特性，通過(guò)多輪的富集、洗滌、擴(kuò)增等步驟，篩選出針對(duì)玉米赤霉烯酮的特異性適配體。通過(guò)序列測(cè)定得到適配體的序列

核酸適配體相對(duì)于抗體來(lái)說(shuō)，具有適應(yīng)環(huán)境廣泛，能夠耐受高溫、能耐受有機(jī)溶劑并且操作方便等優(yōu)點(diǎn)。最主要的，適配體在制備過(guò)程中不需要經(jīng)過(guò)動(dòng)物體內(nèi)的過(guò)程，而是通過(guò)化學(xué)合成來(lái)獲得。因此，生產(chǎn)周期短，并且可以通過(guò)合成條件保證序列的準(zhǔn)確性

以核酸適配體為基礎(chǔ)制備的親和柱具有特異性好，玉米赤霉烯酮結(jié)合量大，純化效率高的特點(diǎn)。

玉米赤霉烯酮適配體親和柱及其制備方法說(shuō)明如下

1.選擇N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）修飾的瓊脂糖載體sepharose4B，進(jìn)行活化

取1gN-羥基琥珀酰亞胺修飾的瓊脂糖，加入用50ml 1mM的HCl，溶脹30min后，凝膠用100ml 1mM HCl洗滌6次，再用100ml超純水洗滌

2.將活化好的瓊脂糖凝膠sepharose4B用偶聯(lián)緩沖液（0.1M的NaHCO₃，0.8M NaCl，PH8.2）洗滌3次。加入20mol/L的氨基修飾的玉米赤霉烯酮適配體，室溫偶聯(lián)8小時(shí)

3.將偶聯(lián)好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體用20mM，PH7.4的磷酸緩沖液PBS洗滌3次

4.封閉

將偶聯(lián)好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體中加入100mmol/L的Tris.Cl PH8.0 ，室溫反應(yīng)2小時(shí)

5.將封閉好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體用20mM，PH7.4的磷酸緩沖液PBS洗滌3次

6.裝柱

將玉米赤霉烯酮—瓊脂糖載體根據(jù)需要裝入層析柱中，可根據(jù)需要制備不同容量的玉米赤霉烯酮親和柱。層析柱的結(jié)構(gòu)如附圖1所示。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明充分的利用了核酸適配體的優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)多輪的篩選和富集。得到了高特異性高親和力的玉米赤霉烯酮核酸適配體。該適配體能夠特異性的結(jié)合樣本中的玉米赤霉烯酮，降低了抗體親和柱經(jīng)常遇到的交叉反應(yīng)性。親和柱效率大幅度提高

核酸適配體不受操作環(huán)境和有機(jī)溶劑的影響，尤其適合真菌毒素類的脂溶性物質(zhì)的純化。相比較，由于免疫親和柱中的抗體不耐有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑常常會(huì)造成抗體的失活而使親和柱效率降低

此外，由于有機(jī)溶劑導(dǎo)致抗體失活，因此免疫親和柱通常為一次性使用。而核酸適配體親和柱可以耐受有機(jī)溶劑，可以重復(fù)使用多次，大幅度降低了使用成本

2.本發(fā)明使用的核酸適配體可以通過(guò)化學(xué)合成法獲得，可以保證序列的正確性。大幅度降低了不同批次間的變異。而相對(duì)來(lái)說(shuō)，不同批次的抗體來(lái)自于不同的小鼠或者兔子，導(dǎo)致抗體間質(zhì)量變異較大，使親和柱質(zhì)量存在差別

3.使用本發(fā)明純化玉米赤霉烯酮操作簡(jiǎn)便，幾步就可以得到純度較高的玉米赤霉烯酮。更方便操作者使用

4.使用本發(fā)明的產(chǎn)品得到的玉米赤霉烯酮純度很高，后續(xù)不用再做別的純化處理就可以直接用于高效液相色譜檢測(cè)或者熒光檢測(cè)。節(jié)省了操作者的時(shí)間和費(fèi)用。

附圖說(shuō)明

圖1：玉米赤霉烯酮適配體親和柱結(jié)構(gòu)組份示意圖

A：進(jìn)樣口塞；B：活塞適配器；C：穩(wěn)定箍；D：上篩板；E：柱體；F：載體填料； G：下篩板；H：出樣口堵頭

圖2：玉米赤霉烯酮適配體親和柱外觀結(jié)構(gòu)圖

A：進(jìn)樣口塞；B：活塞適配器；C：穩(wěn)定箍；D：上篩板；E：柱體；F：載體填料； G：下篩板；H：出樣口堵頭

圖3：玉米樣品中加入玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜檢測(cè)圖

圖4：飼料樣品中加入玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜檢測(cè)圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：利用氨基修飾的玉米赤霉烯酮適配體制備親和柱

本發(fā)明制備玉米赤霉烯酮適配體親和柱的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案如下：

1.載體活化

選擇N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）修飾的瓊脂糖載體sepharose4B，進(jìn)行活化

取1gN-羥基琥珀酰亞胺修飾的瓊脂糖，加入用50ml 1mM的HCl，溶脹30min后，凝膠用100ml 1mM HCl洗滌6次，再用100ml超純水洗滌

2.將活化好的瓊脂糖凝膠sepharose4B用偶聯(lián)緩沖液（0.1M的NaHCO₃，0.8MNaCl，PH8.2）洗滌3次。加入20mol/L的氨基修飾的玉米赤霉烯酮適配體，室溫偶聯(lián)8小時(shí)

3.將偶聯(lián)好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體用20mM，PH7.4的磷酸緩沖液PBS洗滌3次

4.封閉

將偶聯(lián)好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體中加入100mmol/L的Tris.Cl PH8.0 ，室溫反應(yīng)2小時(shí)

5.將封閉好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體用20mM，PH7.4的磷酸緩沖液PBS洗滌3次

6.裝柱

將交聯(lián)后的玉米赤霉烯酮-瓊脂糖凝膠用10毫升20mM PBS PH7.4重懸，然后裝入空的親和純化柱柱體中

1)取空的柱體，加入下方篩板，加入1mlPBS，使其自然流干

2)加下方出樣口堵頭，在柱體中加入1ml上述處理后的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖凝膠載體，靜止5分鐘，使載體自然沉降

3)加入上方篩板，按壓篩板，使其到達(dá)載體上方

4)加入活塞適配器，適配器有一個(gè)壓緊作用，使上方篩板緊貼載體

5)從下方將穩(wěn)定箍套在柱體上，使其緊貼進(jìn)樣口

6)拔掉出樣口堵頭，用注射器取5mlPBS，將注射器接在進(jìn)樣口上，緩慢的將PBS注入親和柱中，使出液速度保持在1-2滴/秒。直至全部液體注入親和柱

7)套上出樣口堵頭，套上進(jìn)樣口塞，將制備好的玉米赤霉烯酮適配體親和柱放入4℃保存。

實(shí)施例2：利用生物素修飾的玉米赤霉烯酮適配體制備親和柱

本發(fā)明制備玉米赤霉烯酮適配體親和柱的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案如下：

1.取1ml鏈霉親和素（SA）修飾的瓊脂糖凝膠sepharose4B，用10ml超純水洗滌3次

2.將（SA）修飾的瓊脂糖凝膠sepharose4B用偶聯(lián)緩沖液（0.02M的PBS，0.8M NaCl，PH7.4）洗滌3次。加入20mol/L的生物素修飾的玉米赤霉烯酮適配體，室溫偶聯(lián)4小時(shí)

3.將偶聯(lián)好的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖載體用20mM，PH7.4的磷酸緩沖液PBS洗滌3次

4.裝柱

將玉米赤霉烯酮—瓊脂糖載體根據(jù)需要裝入層析柱中，可根據(jù)需要制備不同容量的玉米赤霉烯酮親和純化柱

1)取空的柱體，加入下方篩板，加入1mlPBS，使其自然流干

2)加下方出樣口堵頭，在柱體中加入1ml上述處理后的玉米赤霉烯酮適配體-瓊脂糖凝膠載體，靜止5分鐘，使載體自然沉降

3)加入上方篩板，按壓篩板，使其到達(dá)載體上方

4)加入活塞適配器，適配器一個(gè)壓緊作用，使上方篩板緊貼載體

5)從下方將穩(wěn)定箍套在柱體上，使其緊貼進(jìn)樣口

6)拔掉出樣口堵頭，用注射器取5mlPBS，將注射器接在進(jìn)樣口上，緩慢的將PBS注入親和柱中，使出液速度保持在1-2滴/秒。直至全部液體注入親和柱

7)套上出樣口堵頭，套上進(jìn)樣口塞，將制備好的玉米赤霉烯酮適配體親和柱放入4℃保存。

實(shí)施例3：利用玉米赤霉烯酮適配體親和柱純化和檢測(cè)玉米樣品中的玉米赤霉烯酮

本實(shí)施例利用正常的玉米樣本定量加入玉米赤霉烯酮的標(biāo)準(zhǔn)品，然后用玉米赤霉烯酮適配體親和柱進(jìn)行純化，純化后用高效液相色譜檢測(cè)。測(cè)定回收率

1.玉米樣品處理

按照每克樣品60納克的標(biāo)準(zhǔn)，在粉碎后的玉米樣品中添加玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品

1)提取

----20g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過(guò)2mm分樣篩），加入100mL提取液（80%乙腈-水溶液）混勻；

----高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min，或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min，用快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液；

----取10mL濾液加入40mL 0.01M PBST稀釋，再用微纖維濾紙過(guò)濾，并收集濾液作為上樣液；

----取25mL上樣液過(guò)免疫親和柱凈化

稀釋倍數(shù)：1

2)凈化

----將免疫親和柱連接于10.0 ml一次性注射器下。按照前處理要求，準(zhǔn)確移取相應(yīng)體積的樣品提取液注入一次性注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接調(diào)節(jié)開(kāi)關(guān)，使液體以1～2滴/秒的速度流出；

----待液體排干后，首先用0.1%Tween-20水溶液洗滌10mL，再用蒸餾水或去離子水洗滌10mL，流速2～3滴/秒；

----待液體排干后，更換新針筒，上樣2ml乙腈，用刻度試管接洗脫液，流速1滴/秒；

----洗脫后液體用氮?dú)庠?30℃條件下吹至近干；

----用10%乙腈水溶液溶解并定容到1ml；

---洗脫液用0.22μm微孔濾器過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于HPLC分析

2.洗脫產(chǎn)物用高效液相色譜HPLC檢測(cè)

高效液相色譜檢測(cè)結(jié)果顯示，從檢測(cè)結(jié)果可以看出，在1g的粉碎后玉米樣品中加入60ng的玉米赤霉烯酮，用本發(fā)明的適配體親和柱可以回受到60.6ng?；厥章蕿?01%。色譜圖見(jiàn)附圖3。

實(shí)施例4：利用玉米赤霉烯酮適配體親和柱純化和檢測(cè)飼料樣品中的玉米赤霉烯酮

1.前處理

按照每克樣品500納克的標(biāo)準(zhǔn)，在粉碎后的玉米樣品中添加玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品；

1)25g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過(guò)2mm分樣篩）加入5g 氯化鈉與125mL提取液（70%甲醇-水溶液）混勻；

2)高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min，或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min，用快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液；

3)取10mL濾液加入20mL蒸餾水稀釋（稀釋后的液體pH值應(yīng)保證在6~8之間，可用1M“NaOH”或“HCl”進(jìn)行調(diào)節(jié)），再用微纖維濾紙過(guò)濾，并收集濾液作為上樣液；

4)取15mL上樣液過(guò)免疫親和柱凈化

2.凈化

1)將親和柱連接于10.0 ml一次性注射器下。按照前處理要求，準(zhǔn)確移取相應(yīng)體積的樣品提取液注入一次性注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接調(diào)節(jié)開(kāi)關(guān)，使液體以1～2滴/秒的速度流出；

2)待液體排干后，用蒸餾水或去離子水洗滌2次，每次10mL；

3)待液體排干后，上樣1mL甲醇，流速1滴/秒，收集洗脫液并定容至1mL；

4)洗脫液用0.22μm微孔濾器過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于HPLC分析；

5)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)下表

色譜圖見(jiàn)附圖4。

實(shí)施例5：玉米赤霉烯酮適配體親和柱重復(fù)使用柱容量的變化

本實(shí)施例利用定量的玉米赤霉烯酮的標(biāo)準(zhǔn)品，然后用玉米赤霉烯酮適配體親和柱進(jìn)行純化。親和柱上的玉米赤霉烯酮用有機(jī)溶劑洗脫后，用高效液相色譜檢測(cè)其濃度。親和柱重新平衡后重復(fù)上樣和洗脫，測(cè)定洗脫的玉米赤霉烯酮濃度。主要目的是測(cè)試玉米赤霉烯酮適配體親和柱的重復(fù)使用性

1.配制5ug/ml的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品

2.取出玉米赤霉烯酮適配體親和柱，打開(kāi)進(jìn)樣口塞，進(jìn)樣口與注射器針筒連接，注射器接入到氣控操作架上

3.打開(kāi)出樣口塞，用10mmol/L PBS PH7.4洗滌親和柱3次，每次10毫升，調(diào)節(jié)氣孔操作架氣泵壓力，使液體以3滴/秒的流速流出

4.取100ul上述配制的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，總量5ug，加入親和柱柱中，調(diào)節(jié)流量至1-2滴/秒。直至樣品全部流出親和柱

5.用蒸餾水洗滌純化柱3次，每次5毫升

6.加入1ml甲醇，收集洗脫產(chǎn)物

7.洗脫產(chǎn)物用高效液相色譜HPLC檢測(cè)

8.親和柱用超純水洗滌3次，每次10ml，然后用10mmol/L PBS PH7.4洗滌親和柱3次，每次10毫升

9.再次上樣100ul玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，總量500ng

10. 按照上述操作洗滌及洗脫，洗脫產(chǎn)物用高效液相色譜檢測(cè)其濃度

11. 再重復(fù)步驟8.9.10三次。檢測(cè)洗脫產(chǎn)物的濃度

12. 計(jì)算總共5次的玉米赤霉烯酮適配體親和柱純化的回收率

高效液相色譜檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4：

從上述結(jié)果可以看出，玉米赤霉烯酮適配體親和柱重復(fù)使用5次后，其結(jié)合能力沒(méi)有明顯的降低。

玉米赤霉烯酮適配體序列

5’-TTCACGGTAGCACGCATAGGCATATCACATTACAGATAGTAATGTACCATAGATAGATGACATCTGACCTCTGTGCTGCT-3’ -3