專利名稱：基于苯氧基烷基和烷氧基-或苯氧基-苯基烷基配體的新色譜介質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的色譜介質(zhì)及其用于分離和純化小分子的用途。更具體地，本發(fā)明公開了一種新的疏水性色譜介質(zhì)，其通過將含有C-O-C鍵的苯氧基烷基、烷氧基-苯基或苯氧基苯基類型的配體鍵合至固體載體而制備。該介質(zhì)還可以具有疏水性封端。在本發(fā)明中提供的新的色譜介質(zhì)特別有用于分離各種基于疏水性和η-H相互作用的分子。此外，該新的介質(zhì)可以通過僅使用高含水量的流動相來分離高水溶性的化合物。
背景技術(shù)：
反相HPLC介質(zhì)廣泛地應(yīng)用于分離多種基本化合物如藥物、農(nóng)用化學(xué)品和肽及小分子蛋白質(zhì)。多種直徑、孔徑、孔體積、表面積和硬度定義明確的、結(jié)構(gòu)上合適的球形硅膠顆粒和聚合物顆粒適合于分析型和制備型的HPLC。此外，廣泛地使用經(jīng)極性配體和非極性配體修飾的、在化學(xué)上不同的硅膠基固定相介質(zhì)和聚合物載體介質(zhì)。公知的是除了所使用的配體的化學(xué)性質(zhì)如氰基、氨基、二醇、和C4，C8或C18和苯基配體之外，剩余SiOH基團(tuán)的分布在分離過程中也具有重要的作用。一般而言，大多數(shù)色譜介質(zhì)都基于聚合物顆?；蚬枘z顆粒，其具有不規(guī)則的至球形顆粒的形狀、不同的粒徑和孔徑。最常見的色譜介質(zhì)是通過將一系列鏈長為1-30個碳原子的烷基鍵合至聚合物或硅膠顆粒而制備的。十八烷基(C18)最常見的，接著是C8和C4結(jié)合的硅膠。下一步研究是使用封端，其中較小的試劑(TMS，三甲基甲硅烷基氯化物)用來對未反應(yīng)的Si-OH基團(tuán)進(jìn)行封端。鍵合的程度隨硅膠的類型變化，其反映在碳載量(carbon loading)中，如從表面覆蓋的百分比可見的，表面覆蓋的百分比大致為固定相比例的指導(dǎo)， 并因此大致為柱的整體保持性的指導(dǎo)。在反相色譜中使用含水有機(jī)流動相，分離是基于分析物在流動相和固定相之間的分配，并受到分析物的極性和疏水性的控制。洗脫液的強(qiáng)度受到有機(jī)改性劑(通常是甲醇、 乙腈或THF)比例的控制。由于各改性劑與分析物和介質(zhì)的配體的相互作用會是不同的，任何分析物化合物的選擇性或相對保留取決于各分子的極性和流動相的洗脫強(qiáng)度。常見的是在流動相中使用多種以及變化量的溶劑以從柱中洗脫感興趣的化合物。然而，對于使用色譜單元操作進(jìn)行制備的方法應(yīng)用，出于安全性和經(jīng)濟(jì)的原因，將會高度優(yōu)選能夠使用盡可能少量的有機(jī)溶劑來洗脫小分子。然而，不可能使用現(xiàn)有的色譜介質(zhì)，因?yàn)榇蠖鄶?shù)分離的發(fā)生是基于在流動相中的分配，而不是基于分析物與配體之間的強(qiáng)力的相互作用。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過在介質(zhì)中存在一些配體，我們能夠?qū)崿F(xiàn)更好的分離，因?yàn)槠涮峁┝硕喾N相互作用位點(diǎn)，包括疏水性范德華相互作用、π-π相互作用和氫鍵。盡管出于經(jīng)濟(jì)或效率目的，洗脫液的有機(jī)組分的通常優(yōu)選為甲醇或乙腈，但是出于多種原因，理想的洗脫溶劑將會是水。許多不同的反相介質(zhì)已知在市場上可以從許多制造商包括Mallinckrodt Baker, Inc.獲得，但是除非有特定的相互作用，否則相似類型的柱之間的選擇性差異通常少于改變洗脫溶劑所引起的差異。本發(fā)明的一個目的是顯示本文記載的新反相介質(zhì)不僅表現(xiàn)出獨(dú)特的分離而且僅
4使用水作為流動相洗脫感興趣的化合物。此外，該介質(zhì)可以用于使用高含水量的流動相分離水溶性分析物。發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種反相色譜介質(zhì)，其選自下式表示的介質(zhì)[X-C6H4-(O)m-(CH2)Jq-Z和所述式的疏水性封端的介質(zhì)，其中η為1至4、優(yōu)選2至4的數(shù)，并更優(yōu)選3或4，再更優(yōu)選3，m為0或1，優(yōu)選 1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、苯基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子和更優(yōu)選2 至4個碳原子的烷基，其中X優(yōu)選為H，當(dāng)m為0時，X選自苯氧基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子、更優(yōu)選1至2個碳原子且再更優(yōu)選1個碳原子的烷氧基，其中X優(yōu)選為甲氧基，Z為硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體(chromatographic support)的骨架， q為等于連接至所述硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時，m= 1時X不為H。本發(fā)明提供的所述式的這種封端介質(zhì)在硅膠色譜載體的骨架上具有硅烷醇部分的疏水性封端，或者在親水性聚合物色譜載體的骨架上具有羥基、胺或亞胺部分的封端。該式的新色譜介質(zhì)是如下制備的使(a)色譜介質(zhì)載體，其選自(1)在硅膠骨架的表面上具有羥基的硅膠載體或(2) 在聚合物骨架的表面上具有羥基、胺或亞胺基團(tuán)的親水性聚合物載體，與(b)下式的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)[X-C6H4- (0) m- (CH2) n] p-Si (Y) 4_p其中ρ為1至3的數(shù)，優(yōu)選為1，Y為氯、溴、碘或在烷氧基中具有1至4個碳原子的烷氧基，優(yōu)選為氯，m、η和X如上所定義，其中下式的配體[X-C6H4-(O)m-(CH2) J-經(jīng)由硅膠骨架上的羥基或經(jīng)由親水性聚合物骨架上的羥基、胺或亞胺基團(tuán)連接至硅膠或親水性聚合物載體的骨架，從而提供下式的反相色譜介質(zhì)[X-C6H4-(O)m-(CH2)Jq-Z其中η為1至4、優(yōu)選2至4的數(shù)，并更優(yōu)選3或4，再更優(yōu)選3，m為0或1，優(yōu)選 1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、苯基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子和更優(yōu)選2 至4個碳原子的烷基，其中X優(yōu)選為H，當(dāng)m為0時，X選自苯氧基和具有1至6個碳原子、 優(yōu)選1至4個碳原子、更優(yōu)選1至2個碳原子且再更優(yōu)選1個碳原子的烷氧基，其中X優(yōu)選為甲氧基，Z為硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時，m= 1時X不為H。反應(yīng)物以硅膠或親水性聚合物載體與反應(yīng)物為約20 1至約2 1、優(yōu)選約13 1至約5 1和更優(yōu)選7 1的重量比與硅膠載體或親水性聚合物載體反應(yīng)。如果期望上述式的反相色譜介質(zhì)具有疏水性封端，那么這種介質(zhì)可以與任何合適的疏水性封端反應(yīng)物反應(yīng)，使封端反應(yīng)物與硅膠骨架上任何剩余的硅烷醇基團(tuán)或者與親水性聚合物色譜載體的骨架上的任何剩余的羥基、胺或亞胺基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，所得具有連接至硅膠或親水性聚合物載體的骨架的這些配體的色譜介質(zhì)提供了在含水的流動相中分離分析物的能力。此外，當(dāng)所述色譜介質(zhì)已經(jīng)被疏水性封端
5時，所得封端的介質(zhì)與親水性封端的介質(zhì)相比具有增加的在水性介質(zhì)中的穩(wěn)定性，以及增加的與配體或封端基團(tuán)的疏水性相互作用從而增加保留性質(zhì)。此外，并且出人意料的是，該疏水性封端的介質(zhì)允許在高含水量的流動相中進(jìn)行分離。附圖的簡要說明本發(fā)明通過附圖所示的本發(fā)明實(shí)施方案進(jìn)行解釋，但是并不局限于此，在各附圖中

圖1為分離對乙酰氨基酚(acetaminophen)的應(yīng)用例1的分離色譜圖；圖2為分離咖啡因的應(yīng)用例2的分離色譜圖；圖3為分離碘克沙醇(iodixanol)的應(yīng)用例3的分離色譜圖；圖4為分離碘克沙醇的應(yīng)用例4的分離色譜圖；圖5為分離含有尿嘧啶、苯酚、m-DETA和聯(lián)苯的混合物的應(yīng)用例5的分離色譜圖； 和圖6為分離碘克沙醇的對比應(yīng)用例的分離色譜圖。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了一種反相色譜介質(zhì)，其選自下式表示的介質(zhì)[X-C6H4-(O)m-(CH2)Jq-Z和所述式的疏水性封端的介質(zhì)，其中η為1至4、優(yōu)選2至4的數(shù)，并更優(yōu)選3或4，再更優(yōu)選3，m為0或1，優(yōu)選 1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、苯基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子和更優(yōu)選2 至4個碳原子的烷基，其中X優(yōu)選為H，當(dāng)m為0時，X選自苯氧基和具有1至6個碳原子、 優(yōu)選1至4個碳原子、更優(yōu)選1至2個碳原子且再更優(yōu)選1個碳原子的烷氧基，其中X優(yōu)選為甲氧基，Z為硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時，m= 1時X不為H。本發(fā)明提供的所述式的這種封端介質(zhì)在硅膠色譜載體的骨架上具有硅烷醇部分的疏水性封端，或者在親水性聚合物色譜載體的骨架上具有羥基、胺或亞胺部分的封端。該式的新色譜介質(zhì)是如下制備的使(a)色譜介質(zhì)載體，其選自(1)在硅膠骨架的表面上具有羥基的硅膠載體或(2) 在聚合物骨架的表面上具有羥基、胺或亞胺基團(tuán)的親水性聚合物載體，與(b)下式的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)[X-C6H4- (0) m- (CH2) n] p_Si (Y) 4_p其中ρ為1至3的數(shù)，優(yōu)選為1，Y為氯、溴、碘或在烷氧基部分具有1至4個碳原子的烷氧基，優(yōu)選為氯，m、η和X如上所定義，其中下式的配體[X-C6H4-(O)m-(CH2) J-經(jīng)由硅膠骨架上的羥基或經(jīng)由親水性聚合物骨架上的羥基、胺或亞胺基團(tuán)連接至硅膠或親水性聚合物載體的骨架，從而提供下式的反相色譜介質(zhì)[X-C6H4-(O)m-(CH2)Jq-Z其中η為1至4、優(yōu)選2至4的數(shù)，并更優(yōu)選3或4，再更優(yōu)選3，m為0或1，優(yōu)選 1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、苯基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子和更優(yōu)選2 至4個碳原子的烷基，其中X優(yōu)選為H，當(dāng)m為0時，X選自苯氧基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子、更優(yōu)選1至2個碳原子且再更優(yōu)選1個碳原子的烷氧基，其中X優(yōu)選為甲氧基，Z為硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時，m= 1時X不為H。反應(yīng)物以硅膠或親水性聚合物載體與反應(yīng)物為約20 1至約2 1、優(yōu)選約13 1至約5 1和更優(yōu)選7 1的重量比與硅膠載體或親水性聚合物載體反應(yīng)。如果期望上述式的反相色譜介質(zhì)具有疏水性封端，那么這種介質(zhì)可以與任何合適的疏水性封端反應(yīng)物反應(yīng)，使封端反應(yīng)物與硅膠骨架上任何剩余的硅烷醇基團(tuán)或者與親水性聚合物色譜載體的骨架上的任何剩余的羥基、胺或亞胺基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。反應(yīng)物以硅膠或親水性聚合物載體與反應(yīng)物為約20 1至約2 1、優(yōu)選約 13 1至約5 1和更優(yōu)選約7 1的重量比與硅膠載體或親水性聚合物反應(yīng)。如果期望上述式的反相色譜介質(zhì)具有疏水性封端，那么這種介質(zhì)可以與任何合適的疏水性封端反應(yīng)物反應(yīng)，使封端反應(yīng)物與硅膠骨架上任何剩余的硅烷醇基團(tuán)或者與親水性聚合物色譜載體的骨架上的任何剩余的羥基、胺或亞胺基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。本發(fā)明可以采用以下任何合適的疏水性封端反應(yīng)物，所述疏水性封端反應(yīng)物能夠與硅膠骨架上的未反應(yīng)硅烷醇基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，或者與親水性聚合物色譜載體的骨架上剩余的未反應(yīng)羥基、胺或亞胺基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。合適的封端反應(yīng)物包括，但不限于六甲基二硅氮烷 (hexamethyldisilaZane)、1_(三甲基甲硅烷基)咪唑，以及三烷基鹵代硅烷如三甲基氯硅烷和三乙基氯硅烷。六甲基二硅氮烷和1_(三甲基甲硅烷基)咪唑優(yōu)選作為封端反應(yīng)物， 甚至更優(yōu)選六甲基二硅氮烷。通常，未封端的物質(zhì)與合適的封端試劑使用硅膠對試劑的比為5 1至10 1的比值在合適的溶劑如甲苯中在室溫或高達(dá)90°C的溫度反應(yīng)多達(dá)M小時。所得產(chǎn)物用合適的溶劑如甲苯洗滌，并在85°C干燥。本發(fā)明的一個實(shí)施方案包括一種將分析物從含有分析物的溶液中分離的方法，所述方法包括(a)提供填充有下式的反相色譜介質(zhì)的色譜柱[X-C6H4-(O)m-(CH2)Jq-Z其中η為1至4、優(yōu)選2至4的數(shù)，并更優(yōu)選3或4，再更優(yōu)選3，m為0或1，優(yōu)選 1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、苯基和具有1至6個碳原子、優(yōu)選1至4個碳原子和更優(yōu)選2 至4個碳原子的烷基，其中X優(yōu)選為H，當(dāng)m為0時，X選自苯氧基和具有1至6個碳原子、 優(yōu)選1至4個碳原子、更優(yōu)選1至2個碳原子且再更優(yōu)選1個碳原子的烷氧基，其中X優(yōu)選為甲氧基，Z為硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時，m = 1時X不為H，或者所述反相色譜介質(zhì)具有疏水性封端；(b)將該分析物的溶液注射進(jìn)入該填充柱；和(c)洗脫該分析物。本發(fā)明具有這些連接至硅膠或親水性聚合物載體的骨架的配體的色譜介質(zhì)，特別是那些具有苯氧基烷基配體、尤其是苯氧基丙基配體和烷氧基苯基烷基配體、特別為甲氧基苯基丙基配體的色譜介質(zhì)，提供了在高含水量的流動相中分離分析物的能力。例如本發(fā)明的具有苯氧基丙基配體的介質(zhì)能夠從其他相關(guān)雜質(zhì)中分離碘克沙醇，即5_[乙?；?[3_[乙?；鵢[3，5_ 二(2，3_ 二羥基丙基氨基甲?；?-2，4，6_三碘-苯基]氨基]-2-羥基-丙基]氨基]-N，N' -二(2，3_ 二羥基丙基)-2，4，6_三碘-苯-1，3-二甲酰胺，而不使用任何有機(jī)介質(zhì)，因此碘克沙醇可以使用水作為唯一的洗脫液而分離。類似地，介質(zhì)，尤其是本發(fā)明的具有苯氧基丙基配體的介質(zhì)，能夠使用水作為流動相洗脫對乙酰氨基酚。將對乙酰氨基酚裝載到填充有本發(fā)明介質(zhì)的柱上，并且用水洗脫，如應(yīng)用例1中所示的尖銳峰。根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方案，一種反相介質(zhì)通過使3-苯氧基丙基三氯硅烷 (C9H11Cl3OSi, CAS No. 60333-76-8)與球狀硅膠(40-60微米，120 A )在甲苯/甲醇混合物中在室溫反應(yīng)約16-20小時而制備。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，50g硅膠在250ml甲苯(含5ml甲醇)中漿化，并向其中加入7. 5g苯氧基丙基三氯硅烷，室溫反應(yīng)約6小時。該漿料用甲醇洗滌，并在85°C干燥。表面覆蓋(基于％ C)為179yg/m2。將所得介質(zhì)填充入分析柱6X250mm)和半制備型柱(10X250mm)中，并測試在不同條件下多種小分子的分離。用于本發(fā)明介質(zhì)的硅膠或親水性聚合物載體可以為任何合適的羥基化的硅膠或合適的親水性聚合物。用于介質(zhì)的硅膠(silica gel)載體可以為不規(guī)則的或球形的，粒徑通常在約2 μ m至約250 μ m的范圍內(nèi)，并且孔徑為約30A至約2000A。類似地，用于本發(fā)明顆粒(beads)介質(zhì)的親水性聚合物可以為不規(guī)則的或球形的，粒徑通常在2μπι至 250 μ m的范圍內(nèi)，并且孔徑為約30A至約2000A。親水性聚合物優(yōu)選為選自聚甲基丙烯酸酯(polymethacrylate)、羥基化的苯乙烯-二乙烯基苯、羥基化的二乙烯基苯、纖維素或瓊脂糖的聚合物顆粒，在表面上具有羥基、胺或亞胺基。例如，羥基化的聚甲基丙烯酸酯可以衍生自甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)和二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDM)之間的聚合并接著發(fā)生酸式水解或堿式水解。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本發(fā)明介質(zhì)用于從高含水量的流動相中分離分子量約2000或更少、甚至約1500或更少以及1000或更少的小分子。在本發(fā)明中合成的物質(zhì)與已知的用苯基丁基配體制備的硅膠介質(zhì)(對比合成例) 比較其碘克沙醇洗脫行為(對比應(yīng)用例)。合成例1將50g硅膠(平均粒徑50 μ m,孔徑130 A )置于比圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器禾口正氣壓入口 (positive nitrogen pressure inlet))中，向其中力口入 250ml 甲苯禾口 5ml 甲醇，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將7. 5g的3-苯氧基丙基三氯硅烷加入該燒瓶中，室溫攪拌約16小時。過濾漿料，并用250ml甲醇洗滌，在85°C干燥過夜。元素分析C，6. 32%;H, 0.90%。表面覆蓋179 μ g/m2。合成例2將200g硅膠(平均粒徑20 μ m,孔徑130 A )置于2L圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口)中，向其中加入IOOOml甲苯和20ml甲醇，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將 30. Og的3-苯氧基丙基三氯硅烷加入該燒瓶中，室溫攪拌16小時。過濾漿料，并用IOOOml 甲醇洗滌，在85°C干燥過夜。元素分析C，6. 57% ;H，1.00%。表面覆蓋203 μ g/m2。合成例3將120g硅膠(平均粒徑10 μ m,孔徑140 A )置于IL圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口)中，向其中加入500ml甲苯和15ml甲醇，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將
818g的3-苯氧基丙基三氯硅烷加入該燒瓶中，室溫攪拌約16小時。過濾漿料，并用500ml 甲醇洗滌，在85°C干燥過夜。元素分析(，5.92%;!1，0.78%。表面覆蓋198 μ g/m2。合成例4將150g硅膠(平均粒徑50 μ m,孔徑130 A )置于2L圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口)中，向其中加入750ml甲苯和15ml甲醇，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將 22. 5g的甲氧基苯基丙基三氯硅烷(CAS No. 163155-57-5)加入該燒瓶中，室溫攪拌約16小時。過濾漿料，并用750ml甲醇洗滌，在85°C干燥過夜。元素分析C，6. 49% ;H，0. 95%。表面覆蓋175 μ g/m2。合成例5將1. OKg硅膠(平均粒徑50 μ m,孔徑120 A )置于比圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口 )中，向其中加入5L甲苯和IOOml甲醇，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將 150g的3-苯氧基丙基三氯硅烷加入該燒瓶中，室溫攪拌約16小時。過濾漿料，并用250ml 甲醇洗滌，在85°C干燥過夜。元素分析C，6. 38% ;H，1. 13%。表面覆蓋169 μ g/m2。對比合成例將50g硅膠(平均粒徑50 μ m,孔徑130 A )置于比圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口)中，向其中加入250ml甲苯和5ml甲醇，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將7. 5g 的4-苯基丁基三氯硅烷加入該燒瓶中，室溫攪拌約16小時。過濾漿料，并用250ml甲醇洗滌，在85°C干燥過夜。元素分析C，7. 51% ;H，1. 13%。表面覆蓋213 μ g/m2。合成例6將IOOg與3-苯氧基丙基(C = 6. 06%)鍵合的硅膠(平均粒徑50 μ m，孔徑130 A )置于2L圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口 )中，向其中加入500ml甲苯，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將12. 5g的六甲基二硅氮烷(CAS No. 999-97-3)加入該燒瓶中，室溫攪拌約16-20小時。過濾漿料，并用500ml甲苯洗滌2次，用500ml甲醇洗滌3次，在85°C 干燥過夜。元素分析C，7.0% ;H，1.3%。表面覆蓋196 μ g/m2。合成例7IOOg與3-苯氧基丙基(C = 6. 06 % )鍵合的硅膠(平均粒徑50 μ m,孔徑130A )置于2L圓底燒瓶(配有漏斗、攪拌器和正氮壓入口 )中，向其中加入500ml甲苯，室溫攪拌。在小于1分鐘內(nèi)將12. 5g的1_(三甲基硅烷基)咪唑)(CAS No. 18156-74-6)加入該燒瓶中，室溫攪拌約16-20小時。過濾漿料，并用500ml甲苯洗滌2次，用500ml甲醇洗滌 3次，在85°C干燥過夜。元素分析C，7. 11% ;H，0. 89%。表面覆蓋199 μ g/m2。應(yīng)用例1將如合成例1所制的含有連接至硅膠的苯氧基丙基配體的色譜介質(zhì)，填充入分析柱(4. 6X250mm)中。將5μ 1的含lmg/ml對乙酰氨基酚的水溶液注射入柱中，并使用 0. 85ml/分鐘的流速洗脫，然后使用水作為流動相在M5nm監(jiān)控洗脫多達(dá)約45分鐘的時間段。所得色譜圖示于圖1中。應(yīng)用例2將如合成例2所制的含有連接至硅膠的苯氧基丙基配體的色譜介質(zhì)，填充入分析柱(4. 6X250mm)中。將5 μ 1的水溶液(含lmg/ml咖啡因)注射入柱中，并使用0. 85ml/ 分鐘的流速洗脫，然后使用水作為流動相在M5nm監(jiān)控洗脫多達(dá)約45分鐘，和30分鐘的梯度從100%水至50%甲醇和50%水的洗脫。所得色譜圖為圖2，示出了在73分鐘洗脫咖啡因。應(yīng)用例3將如合成例3所制的含有連接至硅膠的苯氧基丙基配體的色譜介質(zhì)，填充入半制備型柱(10mmX250mm)中，將25 μ 1的含2. 5mg/ml碘克沙醇的水溶液注射入柱中，并使用 4. 02ml/分鐘的流速。僅使用水作為流動相，碘克沙醇在33. 7分鐘洗脫。所得色譜圖為圖 3。應(yīng)用例4將如合成例4所制的含有連接至硅膠的甲氧基苯基丙基配體的色譜介質(zhì)，填充入半制備型柱(10mmX250mm)中，將25 μ 1的含2. 5mg/ml碘克沙醇的水溶液注射入柱中，并使用4.0aiil/分鐘的流速。僅使用水作為流動相，碘克沙醇在33. 1分鐘洗脫。所得色譜圖為圖4。應(yīng)用例5將如合成例5所制的含有連接至硅膠的苯氧基丙基配體的色譜介質(zhì)，填充入半制備型柱(10mmX250mm)中，將50 μ 1的溶液(含尿嘧啶、苯酚、m_DETA和聯(lián)苯的混合物)注射入柱中，并使用50/50乙腈水作為流動相，以aiil/分鐘的流速。所得色譜圖示于圖5中。對比應(yīng)用例將如對比合成例所制的含有連接至硅膠的苯基丁基配體的色譜介質(zhì)，填充入分析柱(4. 6X250mm)中。將5 μ 1的含2. 5mg/ml碘克沙醇的水溶液注射入柱中，流速為0. 85ml/ 分鐘。使用具有苯基丁基配體的介質(zhì)和水作為流動相并不在水中洗脫碘克沙醇，甚至多至 45分鐘也不能。而且苯基丁基配體介質(zhì)要求30%甲醇洗脫碘克沙醇。碘克沙醇在63分鐘用在流動相中的約30%甲醇洗脫。所得色譜圖示于圖6中。這與本發(fā)明的介質(zhì)(應(yīng)用例 3，圖3)的對比表明碘克沙醇可以從高含水量的溶液中洗脫并分離出來。盡管已經(jīng)在此參考具體的實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，可以不偏離本文所公開的本發(fā)明概念的精神和范圍對本發(fā)明進(jìn)行改變、調(diào)節(jié)和變化。因此，這些落在所附權(quán)利要求書精神和范圍內(nèi)的改變、調(diào)節(jié)和變化也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.反相色譜介質(zhì)，其選自下式表示的介質(zhì)[X-C6H4-(O)ffl-(CH2)Jq-Z和所述式的疏水性封端的介質(zhì)，其中η為1至4的數(shù)，m為0或1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、具有1至6個碳原子的烷基和苯基，當(dāng)m為0時，X選自具有1至6個碳原子的烷氧基和苯氧基，Z為硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時， m = 1時X不為H。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的反相色譜介質(zhì)，其中Z為硅膠載體骨架。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的反相色譜介質(zhì)，其中Z為硅膠載體骨架，乂為禮!11=1且11= 3。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的反相色譜介質(zhì)，其中所述介質(zhì)具有疏水性封端，并且所述疏水性封端是通過六甲基二硅氮烷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的反相色譜介質(zhì)，其中Z為硅膠載體骨架，X為甲氧基，m= 0且η =3。
6.制備下式的反相色譜介質(zhì)的方法[X-C6H4-(O)ffl-(CH2)Jq-Z其中η為1至4的數(shù)，m為0或1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、具有1至6個碳原子的烷基和苯基，當(dāng)m為0時，X選自具有1至6個碳原子的烷氧基和苯氧基，Z為硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時， m = 1時X不為H，所述方法包括使(a)色譜介質(zhì)載體，其選自(1)在硅膠骨架的表面上具有羥基的硅膠載體或(2)在聚合物骨架的表面上具有羥基、胺或亞胺基團(tuán)的親水性聚合物載體，與(b)下式的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)[X-C6H4- (0) m- (CH2) JP-Si (Y) 4_p其中P為1至3的數(shù)，Y選自氯、溴、碘和在烷氧基部分具有1至4個碳原子的烷氧基， 且m、n和X如上所定義，和(c)任選地，使所得的下式的反相色譜介質(zhì)[X-C6H4-(O)ffl-(CH2)Jq-Z與疏水性封端反應(yīng)物反應(yīng)以提供所述介質(zhì)的疏水性封端。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中ρ= 1，硅膠或親水性聚合物載體與反應(yīng)物反應(yīng)的重量比范圍為約20 1至約2 1。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中Z為硅膠載體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中ρ= 1，X為H，m= 1，η = 3，Y為氯，且所得介質(zhì)與疏水性封端試劑反應(yīng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述封端試劑為六甲基二硅氮烷。
11.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中ρ= 1，X為甲氧基，m = 0，η = 3，且Y為氯。
12.將分析物從含有分析物的溶液中分離的方法，所述方法包括(a)提供填充有反相色譜介質(zhì)的色譜柱，所述反相色譜介質(zhì)選自下式的介質(zhì)[X-C6H4-(O)ffl-(CH2)Jq-Z和所述式的疏水性封端的介質(zhì)，其中η為1至4的數(shù)，m為0或1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、具有1至6個碳原子的烷基和苯基，當(dāng)m為0時，X選自具有1至6個碳原子的烷氧基和苯氧基，Z為硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠色譜載體或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時， m = 1時X不為H;(b)將該分析物的溶液注射進(jìn)入該填充柱；和(c)洗脫該分析物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中Z為硅膠載體。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中Z為硅膠載體，乂為扎!11=1且11= 3。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述介質(zhì)具有疏水性封端，并且所述疏水性封端是通過六甲基二硅氮烷。
16.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中Z為硅膠載體，X為甲氧基，m= 0和η = 3。
17.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述分析物為對乙酰氨基酚，且所述對乙酰氨基酚的洗脫在水流動相中進(jìn)行。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中在所述介質(zhì)中，Z為硅膠載體，X為H，m=l且η=3。
19.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述分析物為碘克沙醇，所述碘克沙醇的洗脫在水流動相中進(jìn)行。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中在所述介質(zhì)中，Z為硅膠載體，X為甲氧基，m= 0且 η = 3。
21.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述分析物為分子量為約200或更少的分析物，所述分析物的洗脫在水流動相中進(jìn)行。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中在所述介質(zhì)中，Z為硅膠載體，X為H，m= 1和η = 3，并且所述介質(zhì)具有通過六甲基二硅氮烷的疏水性封端。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中在所述介質(zhì)中，Z為硅膠載體，X為甲氧基，m= 0和 η = 3。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種反相色譜介質(zhì)，其選自式[X-C6H4-(O)m-(CH2)n]q-Z表示的介質(zhì)和所述式的疏水性封端的介質(zhì)，其中n為1至4的數(shù)，m為0或1，當(dāng)m為1時，X選自基團(tuán)H、苯基和具有1至6個碳原子的烷基，當(dāng)m為0時，X選自苯氧基和具有1至6個碳原子的烷氧基，Z為硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架，q為等于連接至所述硅膠或親水性聚合物色譜載體的骨架的配體的數(shù)量的數(shù)，條件是，當(dāng)所述式的反相色譜介質(zhì)未被疏水性基團(tuán)封端時，m＝1時X不為H。這些新的色譜物質(zhì)是如下制備的使(a)色譜介質(zhì)載體，其選自(1)在硅膠骨架的表面上具有羥基的硅膠載體或(2)在聚合物骨架的表面上具有羥基、胺或亞胺基團(tuán)的親水性聚合物載體，與(b)式[X-C6H4-(O)m-(CH2)n]p-Si(Y)4-p的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)，其中p為1至3的數(shù)，Y為氯、溴、碘和在烷氧基部分具有1至4個碳原子的烷氧基，m、n和X如上所定義，以及任選地，使所得介質(zhì)與疏水性封端反應(yīng)物反應(yīng)。所得色譜介質(zhì)具有連接至硅膠或親水性聚合物載體的骨架的這些配體，這種色譜介質(zhì)提供了在含水的流動相中分析物分離的能力。
文檔編號B01D15/32GK102215953SQ200980146157
公開日2011年10月12日 申請日期2009年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月19日
發(fā)明者B·西亞加拉詹, 南度·德奧卡 申請人:安萬托特性材料股份有限公司