甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物及其制備方法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物及其制備方法和用途。所述甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物具有式(Ⅲ)結(jié)構(gòu)。所述制備方法包括：(1)有機溶劑中，甘草次酸與鹵代異戊烷反應(yīng)，得式(Ⅱ)化合物；(2)有機溶劑中，式(Ⅱ)化合物與苯胺或取代苯胺反應(yīng)，得所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物。本發(fā)明還公開所述衍生物的應(yīng)用。本發(fā)明的新型甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物對細菌具有明顯的抑制作用，可以應(yīng)用于制備抗菌藥物。
【專利說明】
甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物及其制備方法和用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)合成，尤其涉及一類新型甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物及其制備 方法與作為抗菌藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 甘草是一種常見的中草藥，它廣泛分布在我國的西北、西南和東北，共有八個品 種。其有效成分是甘草酸及甘草酸鹽類物質(zhì)，而甘草次酸是甘草酸經(jīng)胃酸水解或經(jīng)肝中β_ 葡萄糖醛酸酶分解形成的活性成分之一，它具有抗病毒、抗腫瘤、抗炎抗菌、抗心血管疾病、 抗氧化、保護肝細胞、免疫調(diào)節(jié)及腎上腺皮質(zhì)激素樣作用等多方面的生物活性和藥理活性。 甘草酸的藥理作用實質(zhì)上是甘草次酸的效用。
[0003] 酰胺只要是指羧基和氨基縮合后具有酰胺鍵的一類有機化合物，通常酰胺類化合 物是由氨基和羧基縮合而成。因此對甘草次酸的結(jié)構(gòu)進行修飾，合成酰胺類衍生物，增強其 菌活性，是很有意義的課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明提供了一類具有抗菌效果的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物，本 發(fā)明的另一個目的是提供其制備方法和用途。
[0005] -種甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物，它具有如下通式：
[0006]
[0007] 式(m)中，
9被至少一個甲氧基取代的苯基。
[0008] 進一步的，
為被1~2個甲氧基取代的苯基。
[0009] 進一步的，
[0010] 本發(fā)明還提供了所述甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物的制備方法，包括：
[0011] (1)有機溶劑中，甘草次酸與鹵代異戊烷反應(yīng)，得式（Π )化合物；
[0012]
[0013] (2)有機溶劑中，式（Π )化合物與苯胺或取代苯胺反應(yīng)，得所述的甘草次酸異戊烷 酰胺類衍生物；
[0014
[0015] 本發(fā)明利用甘草次酸與鹵代異戊烷反應(yīng)生成了甘草次酸異戊烷，提高了產(chǎn)物的脂 溶性，更有利于人體吸收;甘草次酸異戊烷再與苯胺或取代苯胺反應(yīng)生產(chǎn)相應(yīng)的酰胺類衍 生物，達到提高抗菌活性的目的。
[0016] 步驟(1)中，有機溶劑為DMF。反應(yīng)溫度為60~80°C，反應(yīng)時間為5~8h。
[0017] 所述的鹵代異戊烷為溴代異戊烷、氯代異戊烷或氟代異戊烷。
[0018] 步驟(2)中，有機溶劑為二氯甲烷。反應(yīng)溫度為20~30°C，反應(yīng)時間為12~16h。
[0019] 步驟(2)中，反應(yīng)體系還含有EDC和Η0ΒΤ。
[0020] 本發(fā)明還提供了所述甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物在制備藥物中的應(yīng)用。
[0021] 本發(fā)明還提供了一種藥物，包括所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物。
[0022] 以有效量的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物為活性成分，添加藥學(xué)上可接受的載 體，可以制備成相應(yīng)的藥物。
[0023] 所述的藥物為抗細菌藥物。細菌可以為革蘭氏陰性菌或革蘭氏陽性菌，具體為大 腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌等。
[0024] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果包括：
[0025] 實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的新型甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物對細菌具有明顯的抑 制作用。因此本發(fā)明的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物可以應(yīng)用于制備抗菌藥物。
【具體實施方式】
[0026] 以下將結(jié)合實施例更詳細的解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實施例僅用于說明本發(fā)明的技 術(shù)方案，本發(fā)明的范圍并不受這些實例的任何限制。
[0027] EDC: 1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽 [0028] H0BT:1-羥基苯并三唑
[0029] EA:乙酸乙酯 [0030] DMS0:二甲基亞砜
[0031] DMF:二甲基甲酰胺
[0032] 實施例1甘草次酸異戊烷酰苯胺(化合物1)的制備
[0033] ik會物1的結(jié)拔I為.
[0034]
[0035] 步驟（1):于20ml DMF中加入4.7g甘草次酸（式（I)所示）和1.25ml溴代異戊烷 (CAS: 107-82-4)，80°C加熱回流反應(yīng)5h。反應(yīng)結(jié)束后，取樣點板，EA萃取，有機相水洗后減壓 蒸餾得白色固體甘草次酸異戊烷酯(式（Π )所示）。
[0036；
[0037] 步驟（2):1.2mmolEDC、1.2mmolH0BT加入到6ml二氯甲烷中，28°C活化30min后加 入lmmol甘草次酸異戊烷酯，加入lmmol苯胺到10ml二氯甲烷中溶解，常溫(一般為25°C)下 反應(yīng)過夜(一般為12h)，EA萃取，有機相進行硅膠柱層析，EA:石油醚= 1:15沖洗，收集流出 液，減壓蒸餾得到白色固體，過濾，干燥，得到目標化合物。
[0038] 產(chǎn)率95%，Μρ: 174-176Γ .? NMR(DMS0,300MHz)，9.98(s，lH，NH)，8.42(s，lH， CH) ,7.85-7.83(d,J = 6.06Hz,lH,ArH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,lH,ArH),7.38-7.32(m, 3H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.47(m,2H,CH2),3.32(m,1H,CH),2.01(m,3H,CH),1.85-1.92(m, 8H，CH2)，1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93 (m，2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s， 3H，CH3) ·MS(ESI):615·94(C41H61NO3，[M+H] +) ·Ana 1 ·Ca 1 cd for C41H61NO3:C，79.95;H，9.98; N,2.27% .Found:C,79.63；H,9.93；N,2.35%
[0039] 實施例2甘草次酸異戊烷酰鄰甲氧苯胺(化合物2)的制備
[0040] 化合物2的結(jié)構(gòu)為：
[0041]
[0042] 制備方法同實施例1。以鄰甲氧基苯胺代替苯胺，得到目標化合物。
[0043] 白色粉末，產(chǎn)率92% ,1^163-1671^? NMR(DMS0,300MHz) ,9.98(s，lH,NH) ,8.42 (s,lH,CH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,ΙΗ,ΑγΗ),7.38-7.32(m,3H,ArH),5.56(s,lH,CH), 3.65(s,3H,0CH 3) ,3.47(m,2H,CH2) ,3.32(m,lH,CH) ,2.01(m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H, CH2) ,1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93(m， 2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s，3H， CH3) · MS (ESI): 645 · 97 (C42H63NO4，[M+H] + ) · Anal · Calcd for C42H63NO4: C，78 · 09; H，9 · 83; N， 2.17% .Found：C,78.48；H,9.93；N,2.46%
[0044] 實施例3甘草次酸異戊烷酰間甲氧苯胺(化合物3)的制備
[0045] 化合物3的結(jié)構(gòu)為：
[0046]
[0047] 制備方法同實施例1，以間甲氧基苯胺代替苯胺，得到目標化合物。
[0048] 白色粉末，產(chǎn)率91 %，Mpl94-196°C ; 4 NMR(DMS0，300MHz)，9 · 98(s，1H，NH)，8 · 42 (s,lH,CH),7.85-7.83(d,J = 6.06Hz,lH,ArH),7.68-7.62(dJ=1.23Hz,lH,ArH),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.72(s,3H,0CH3),3.47(m,2H,CH2),3.32(m,lH,CH),2.01 (m,3H,CH),1.85-1.92(m,8H,CH 2),1.55-1.67(m,10H,CH2),1.29(s,3H,CH3) ,1.10(s,3H, CH3)，1.05(s，3H，CH3)，0.93(m，2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH 3)， 0 · 66 (s，3H，CH3)，0 · 67 (s，3H，CH3) · MS(ESI): 645 · 97 (C42H63NO4，[M+H] + ) · Anal · Calcd for C42H63N〇4：C,78.09；H,9.83；N,2.17% .Found：C,78.52；H,9.68；N,2.03%
[0049] 實施例4甘草次酸異戊烷酰對甲氧苯胺(化合物4)的制備
[0050] 化合物4的結(jié)構(gòu)為：
[0051]
[0052] 制備方法同實施例1，以對甲氧基苯胺代替苯胺，得到目標化合物。
[0053] 白色粉末，產(chǎn)率94%，Μρ168-170Γ ;4 NMR(DMS0，300MHz)，9 · 98(s，1H，NH)，8· 42 (s,lH,CH),7.85-7.83(d,J = 6.06Hz,lH,ArH),7.68-7.62(dJ=1.23Hz,lH,ArH),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.58(s,3H,0CH3),3.47(m,2H,CH2),3.32(m,lH,CH),2.01 (m,3H,CH),1.85-1.92(m,8H,CH 2),1.55-1.67(m,10H,CH2),1.29(s,3H,CH3) ,1.10(s,3H, CH3)，1.05(s，3H，CH3)，0.93(m，2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH 3)， 0.66(s，3H，CH3)，0.67(s，3H，CH3) .MS(ESI :645.97(C42H63N〇4, [M+H] + ) .Anal. Calcd for C42H63N〇4：C,78.09；H,9.83；N,2.17% .Found：C,78.56；H,9.23；N,2.08% .
[0054] 實施例5甘草次酸異戊烷酰-(2,6-二甲氧基)_苯胺(化合物5)的制備 [0055]化合物5的結(jié)構(gòu)為：
[0056]
[0057]制備方法同實施例1，以2,6_二甲氧基苯胺代替苯胺，得到目標化合物。
[0058] 白色粉末，產(chǎn)率92% ,1^153-1561^? NMR(DMS0,300MHz)，9.98(s，lH，NH) ,8.42 (s,lH,CH),7.38-7.32(m,3H,ArH),5.56(s,lH,CH),3.68(s,6H,0CH 3),3.47(m,2H,CH2), 3.32(m,lH,CH) ,2.01 (m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H,CH2) ,1.55-1.67(m,10H,CH2),1.29(s, 3H,CH3) ,1.10(s,3H,CH3)a.05(s,3H,CH3),0.93(m,2H,CH2),0.98(s,6H,CH 3)0.88(s,3H, CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH3)，0.67(s，3H，CH3).MS(ESI :676.00(C43H65N05，[M+H] + ).Anal.Calcd for C43H65NO5:C,76.40；H,9.69；N,2.07% .Found：C,76.57；H,9.86；N, 2.08% .
[0059] 實施例6甘草次酸異戊烷酰-(2,4-二甲氧基)_苯胺(化合物6)的制備
[0060] 化合物6的結(jié)構(gòu)為：
[0061]
[0062] 制備方法同實施例1，以2,4_二甲氧基苯胺代替苯胺，得到目標化合物。
[0063] 白色粉末，產(chǎn)率92% ,1^147-1461^? NMR(DMS0,300MHz)，9.98(s，lH,NH) ,8.42 (s,lH,CH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,ΙΗ,ΑγΗ),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH), 3.61(s,6H,0CH 3) ,3.47(m,2H,CH2) ,3.32(m,lH,CH) ,2.01(m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H, CH2) ,1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93(m， 2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s，3H， CH3) .MS(ESI:676.00(C43H65N〇5，[M+H] + ) .Anal .Calcd for C43H65N05:C，76.40;H，9.69;N， 2.07% .Found：C,76.57；H,9.86；N,2.08% .
[0064] 實施例7甘草次酸異戊烷酰-(2,3-二甲氧基)_苯胺(化合物7)的制備 [0065]化合物7的結(jié)構(gòu)為：
[0066]
[0067] 制備方法同實施例1，以2,3_二甲氧基苯胺代替苯胺，得到目標化合物。
[0068] 白色粉末，產(chǎn)率92%，Mpl55-157°C ; 4 NMR(DMS0，300MHz)，9 · 98(s，1H，NH)，8 · 42 (s,lH,CH),7.68-7.62(d,J=1.23Hz,ΙΗ,ΑγΗ),7.38-7.32(m,2H,ArH),5.56(s,lH,CH), 3.72(s,6H,0CH 3) ,3.47(m,2H,CH2) ,3.32(m,lH,CH) ,2.01(m,3H,CH) ,1.85-1.92(m,8H, CH2) ,1.55-1.67(m，10H，CH2)，1.29(s，3H，CH3)，1.10(s，3H，CH3)，1.05(s，3H，CH 3)，0.93(m， 2H，CH2)，0.98(s，6H，CH3)0.88(s，3H，CH3)，0.85(s，3H，CH3)，0.66(s，3H，CH 3)，0.67(s，3H， CH3) .MS(ESI:676.00(C43H65N〇5，[M+H] + ) .Anal .Calcd for C43H65N05:C，76.40;H，9.69;N， 2.07% .Found：C,76.57；H,9.86；N,2.08% .
[0069] 實施例8甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物抗菌活性研究
[0070] 1.實驗材料和方法
[0071] 1.1藥品與試劑
[0072] Mueller-Hinton培養(yǎng)基（牛肉浸粉5g，酪蛋白水解物17.5g，淀粉1.5g，瓊脂12.5g， 加入1000mL蒸餾水中）、氯霉素、青霉素、DMS0、MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，_二苯基四氮 唑溴鹽，商品名為噻唑藍）、異丙醇、鹽酸、均為分析純試劑、合成的化合物1-6、PBS緩沖液 (磷酸鹽緩沖液0 · 0 lmo 1 /L，pH7 · 4，Na2HP〇4 · 12H20 2 · 9g，KH2P〇4〇 · 2g，NaCl8 · Og，KC10 · 2g，蒸 餾水 lOOOmL)。
[0073] 1.2 菌種
[0074] 大腸桿菌(E. coli)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、枯草芽孢桿菌(B. subtilis)、銅 綠假單胞菌(P · aeruginosa)
[0075] 1.3實驗方法
[0076] 1.3.1培養(yǎng)基的配制
[0077]取牛肉浸粉5g，酪蛋白水解物17.5g，淀粉1.5g，瓊脂12.5g，加入1 OOOrnL蒸餾水中， 加熱煮沸溶解，分裝，121°C高壓滅菌15分鐘備用。
[0078] 1.3.2試驗菌的培養(yǎng)
[0079] 在無菌室內(nèi)，取大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌四種試 驗菌株，于酒精燈下用接種針分別在四種試驗菌株斜面上，刮取少量斜面菌苔，用一定量的 無菌水制成菌懸液，然后取一定量加到已融化又冷卻至50°C左右的MH培養(yǎng)基(Mueller-Hinton培養(yǎng)基）中，搖勻，即刻倒入無菌培養(yǎng)皿中，待充分冷凝后用膠塞密封后，于37°C培養(yǎng) 18-24h備用。吸取菌液lmL，用MH培養(yǎng)基按1:1000稀釋，使菌液濃度約為105cfu/mL。
[0080] 1.3.3抗菌實驗：
[0081]將待測藥品溶于DMS0中配制成2mg/mL的溶液，然后用二倍稀釋法將藥品稀釋成一 定濃度梯度（50yg/mL，25yg/mL，12 · 5pg/mL，6 · 25yg/mL，3 · 125yg/mL)與 DMS0 中。于滅菌微量 滴定板第一條中分別加入l〇〇yL的培養(yǎng)基，第二條為陽性對照，加入100此菌懸液。其余的孔 中加入90yL的菌懸液和10yL的藥物溶液。每個藥物溶液濃度平行3次。在微量滴定板底部標 明細菌名稱。將處理完的培養(yǎng)皿于37 °C培養(yǎng)24h，觀察。
[0082] 1.3.4 MIC的測定
[0083]在每個微量滴定板都可以直觀的測定其MIC值之后，在板的每個孔中加入50yL PBS緩沖液（磷酸鹽緩沖液0 · 0lmo 1/L，pH7 · 4，Na2HP〇4 · 2H202 · 9g，KH2P〇4〇 · 2g，NaC18 · 0g， KC10.2g，蒸餾水1000mL)，其中包含2mg MTT/mL。在室溫下繼續(xù)孵育4-5h。將孔中的物質(zhì)移 出并加入100yL含有5%lmol/L HC1的異丙醇來萃取染料。繼續(xù)在室溫下賦育12h，于酶標儀 測定各孔光吸收(0D值），測定波長550nm。根據(jù)各孔0D值計算藥物對細菌生長的最小抑制濃 度。
[0084]最小抑制濃度(minimum inhibitory concentration，MIC):在特定環(huán)境下孵育24 小時，可抑制某種微生物出現(xiàn)明顯增長的最低藥物濃度即最小抑制濃度，根據(jù)測定的光密 度(0D值），制作細菌生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其對應(yīng)的藥物濃度。測得的 MIC見表1所示 [0085] 2.實驗結(jié)果
[0086]表1本發(fā)明所列甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物對細菌的抑制MIC值(yg/mL)
[0087]
[0089]對照:氯胺苯醇;盤尼西林，甘草次酸
[0090]結(jié)果表明：甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢 桿菌、銅綠假單胞都有不同程度的抑制作用，衍生物的抗菌效果優(yōu)于甘草次酸。
【主權(quán)項】
1. 一種甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物，其特征在于，它具有如下通式：式(m)中％被至少一個甲氧基取代的苯基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物，其特征在于，%被1~2個甲氧基取代的苯基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物，其特征在于，4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物的制備方法，其特征在于，包 括： (1) 有機溶劑中，甘草次酸與鹵代異戊烷反應(yīng)，得式（Π )化合物；(2) 有機溶劑中，式（Π )化合物與苯胺或取代苯胺反應(yīng)，得所述的甘草次酸異戊烷酰胺 類衍生物；5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（I)中，有機溶劑為DMF。反應(yīng)溫度 為60~80°C，反應(yīng)時間為5~8h。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的鹵代異戊烷為溴代異戊烷、氯 代異戊烷或氟代異戊烷。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，有機溶劑為二氯甲烷。反 應(yīng)溫度為20~30°C，反應(yīng)時間為12~16h。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)中，反應(yīng)體系還含有EDC和 HOBT。9. 根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍生物在制備藥物中的應(yīng) 用。10. -種藥物，其特征在于，包括權(quán)利要求1~3任一項所述的甘草次酸異戊烷酰胺類衍 生物。
【文檔編號】A61P31/04GK106008652SQ201610345455
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月23日
【發(fā)明人】石璐, 袁繼文, 鐘慧, 金顯友, 魏元剛, 易銘, 楊永安
【申請人】江蘇耐雀生物工程技術(shù)有限公司