；[]1后，在溫度為30°(：的水中不負(fù)重游泳9〇1]1；[]1， 休息60min后摘眼球采血0.5mL (不加抗凝劑），置4°C冰箱化，血凝固后2000;r/min離屯、 15min，取血清送寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)。
[0118] 6.3肝糖原的測(cè)定末次給藥3〇111111后，在溫度為25±1°(：的水中不負(fù)重游泳9〇111山， 頸椎脫白處死小鼠，用生理鹽水洗凈，并用濾紙吸干水分后，準(zhǔn)確稱取肝臟lOOmg，肝糖原檢 測(cè)試劑盒檢測(cè)小鼠肝糖原含量。
[0119] 6.4血乳酸的測(cè)定末次給藥30min后采血，然后不負(fù)重在溫度為30°C的水中游泳 IOmin后停止。乳酸儀測(cè)定方法:分別在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20化加 入40化破膜液中，立即充分振蕩破碎細(xì)胞用乳酸儀測(cè)定。（血乳酸曲線下面積= 5X(游泳前 血乳酸值+3 X游泳后Omin的血乳酸值+2 X游泳后20min的血乳酸值）
[0120] 7.觀察指標(biāo)負(fù)重游泳時(shí)間，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0121] 8.統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用三表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較
[0122] 9.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0123] 9.1本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠體重的影響
[0124] 各組小鼠在給予Gl~G5藥物后，前、中，后期體重分別見(jiàn)下表所示，各組小鼠的初 始體重和增重體重與對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)，表明Gl~G5藥物均無(wú)明顯的 毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表2。
[01巧]表2負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重± S )
[0126]
[0127]
[012引9.2本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響
[01巧]經(jīng)口給予小鼠Gl~G5藥物后，Gl~G2藥物與空白對(duì)照組比較，可W明顯延長(zhǎng)小鼠 負(fù)重游泳時(shí)間，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明蜂王胎保健酒G3~G5藥物與空白對(duì)照組 比較，可W顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，具有極顯著性差異(P<〇.01)，且明顯優(yōu)于Gl~G2 藥物。結(jié)果詳見(jiàn)表3。
[0130]表3蜂王胎保健酒對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響(.i± O
[01311
[0132] 'V'p<0.05vs 空白對(duì)照；
[0133] "**"p<0.01vs 空白對(duì)照；
[0134] 9.3本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸的影響
[0135] 經(jīng)口給予小鼠本發(fā)明的蜂王胎保健酒后，本發(fā)明蜂王胎保健酒G3~G5藥物對(duì)小鼠 運(yùn)動(dòng)后血乳酸曲線下面積與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<〇.05)，G1~G2藥物組小鼠血乳 酸曲線下面積與對(duì)照組比較雖有所降低，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05)。結(jié)果見(jiàn)表4。
[0136] 表4本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)前后血乳酸水平的影響(：^ + 5)
[01371
[01 JO」 罕 p、U. UOVSifii I=!乂、J 只巧；
[0139 ] 9.4本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠肝糖原的影響
[0140] 經(jīng)口給予小鼠Gl~G5藥物后，Gl~G2藥物與空白對(duì)照組比較，小鼠肝糖原含量均 有明顯的升高，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明蜂王胎保健酒G3~G5藥物與與空白對(duì)照 組比較，小鼠肝糖原含量均有明顯的升高，具有極顯著性差異(P<〇.01)，且明顯優(yōu)于Gl~ G2藥物。結(jié)果詳見(jiàn)表5。
[0141] 表5本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠肝糖原含量的影響(三±s) E p/1 >1。I
[0143] 'V'p<0.05vs 空白對(duì)照；
[0144] "**"p<0.01vs 空白對(duì)照；
[0145] 9.5本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠血清尿素的影響
[0146] 經(jīng)口給予小鼠Gl~G5藥物后，Gl~G2藥物組與空白對(duì)照組比較，小鼠運(yùn)動(dòng)后血清 尿素含量均有明顯的降低，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明蜂王胎保健酒G3~G5藥物與 與空白對(duì)照組比較，小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素含量均有明顯的降低，具有極顯著性差異（P< 0.0 l )，且明顯優(yōu)于Gl~G2藥物。結(jié)果詳見(jiàn)表6。
[0147] 表6本發(fā)明蜂王胎保健酒對(duì)小鼠血清尿素含量的影響掉 [014 引
[0149] V'p<0.05vs 空白對(duì)照；
[0150] "**"p<0.01vs 空白對(duì)照；
[0151] 10.實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0152] 本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，同時(shí)檢測(cè)小鼠肝糖原的儲(chǔ)備來(lái)觀察本發(fā)明蜂 王胎保健酒提高免疫力、抗疲勞的效果。初步研究結(jié)果顯示如下：
[0153] 1、本發(fā)明G3~G5蜂王胎保健酒均能延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間（P<0.01)，且效果明 顯優(yōu)于其它Gl~G2的蜂王胎保健酒。
[0154] 2、生化檢測(cè)方面顯示，本發(fā)明G3~G5蜂王胎保健酒各劑量組均能減少運(yùn)動(dòng)后小鼠 血清中葡萄糖無(wú)氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含量，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<〇.05)，而其它 Gl~G2的蜂王胎保健酒雖然也能減少運(yùn)動(dòng)后小鼠血清中葡萄糖無(wú)氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含 量，但與對(duì)照組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>〇.05);
[0155] 3、本發(fā)明G3~G5蜂王胎保健酒各劑量組均能顯著提高小鼠肝臟中糖原的儲(chǔ)備(P <0.0 l)，且效果明顯優(yōu)于其它Gl~G2的蜂王胎保健酒；
[0156] 4、高尿酸模型發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明G3~G5蜂王胎保健酒能顯著降低小鼠游泳后血清中尿 素的含量(P<〇.01)，且效果明顯優(yōu)于其它Gl~G2蜂王胎保健酒；
[0巧7] 11.結(jié)論
[0158]上述實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明蜂王胎保健酒能顯著提高機(jī)體免疫力，提高小鼠的體力和耐 力，降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血清中尿素及乳酸的含量，且能顯著提高小鼠肝臟中糖原的儲(chǔ)備，有助 于緩解運(yùn)動(dòng)負(fù)荷引起的疲勞;能延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳至力竭的時(shí)間。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 將新鮮蜂王胎或雄蜂蛹與離子溶液按質(zhì)量比1:1.6-2.2混合，于-18--22°c冷凍20-30min，破碎，破碎率為98-100%，破碎物粒徑200-300μπι，用乳酸調(diào)節(jié)破碎物pH值為5-7，升 溫至40-50°C，向其中加入新鮮蜂王胎或雄蜂蛹質(zhì)量0.10-0.18%的復(fù)合酶，混合均勻，于真 空度-0.07-0.09MPa脫氣脫腥10-15min，靜置，繼續(xù)酶解10-15min得到酶解液； 所述復(fù)合酶質(zhì)量組成為:風(fēng)味蛋白酶:酸性蛋白酶:脂肪酶=2-4:1-3:0.3-0.5; 2) 將酶解液置真空離心機(jī)中5000-7000r/min真空離心8-10min，自上而下分離得到游 離脂肪、乳狀液、水解液和殘?jiān)?，將得到的乳狀液控制溫度?5-55Γ，添加乳狀液質(zhì)量 0.08-0.12%的生物破乳劑破乳20_40min，破乳后于4000-6000r/min真空離心2次，間隔時(shí) 間l-3h，每次離心10-15min，合并三次離心得到的水解液，取其質(zhì)量0.2-0.4 %的蛋清，放入 攪拌機(jī)中于轉(zhuǎn)速800-1000r/min攪拌10-12min,直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋 清泡沫加入合并得到的水解液中，常壓煮沸5-8min,降至室溫，于5000-7000r/min真空離心 8-10min，收集水解液，依次經(jīng)硅藻土過(guò)濾、超濾即得透明、穩(wěn)定的蜂王胎或雄蜂蛹水解液； 3) 取蜂王胎或雄蜂蛹水解液質(zhì)量1-3倍的基酒，向其中加入過(guò)氧乙酸溶液，使過(guò)氧乙酸 濃度為400-480ppm，均勻混合，于功率200-400W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波處理5-lOmin，經(jīng)處理的基酒與蜂王胎或雄蜂蛹水解液均勻混合，控制混合料液溫度為25-35Γ，然 后通過(guò)連續(xù)式高壓脈沖處理室處理，靜置、過(guò)濾即得蜂產(chǎn)品保健酒。2. 如權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，步驟1)所述離子溶液為 含有鈉離子25-30mg/L、鋅離子17-22mg/L、鉀離子15-20mg/L、鈣離子12-14mg/L和鎂離子9-llmg/L的水溶液。3. 如權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，步驟2)所述真空離心條 件為溫度6-10 °C、真空度-0 · 02-0 · 04MPa。4. 如權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，步驟2)所述生物破乳劑 為糖脂類、脂肽類、胞壁結(jié)合類生物破乳劑中的一種或幾種組合。5. 如權(quán)利要求4所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，所述生物破乳劑的質(zhì)量 組成為:糖脂類:脂肽類:胞壁結(jié)合類=5-7:4-6:2-4。6. 如權(quán)利要求5所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，所述糖脂類生物破乳劑 為鼠李糖脂、烷基糖苷中的一種或兩種組合;所述糖脂類生物破乳劑的質(zhì)量組成為：鼠李糖 月旨:烷基糖苷= 3-5:1-2。7. 如權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，步驟3)所述基酒為40-60度白酒。8. 如權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，步驟3)所述過(guò)氧乙酸溶 液的質(zhì)量百分比濃度為10-30%。9. 如權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品保健酒的制備方法，其特征在于，步驟3)所述高壓脈沖電 場(chǎng)處理?xiàng)l件為電場(chǎng)強(qiáng)度25_30kV/cm、脈沖數(shù)40-50。10. 如權(quán)利要求1-9任一制備方法制得的蜂產(chǎn)品保健酒。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種蜂產(chǎn)品保健酒，以蜂王胎或雄蜂蛹為唯一原料，全程采用冷凍、真空脫氣、復(fù)合酶生物酶解、真空離心、生物破乳、超聲處理、高壓脈沖電場(chǎng)處理等低溫加工技術(shù)，有效提高了蜂王胎或雄蜂蛹的利用率，降低了營(yíng)養(yǎng)及保健物質(zhì)的損失。將超聲波和過(guò)氧乙酸有機(jī)結(jié)合催陳基酒，與蜂王胎或雄蜂蛹水解液科學(xué)復(fù)配，再次采用高壓脈沖催陳，既防止了過(guò)氧乙酸對(duì)蜂王胎水解液生物活性成分的氧化，又提高了蜂產(chǎn)品酒的陳華效果，提高了蜂產(chǎn)品酒的口感、穩(wěn)定性和澄清度。最終制得一種無(wú)蟲(chóng)腥味、穩(wěn)定性強(qiáng)、口感協(xié)調(diào)、醇厚、柔和、綿長(zhǎng)，風(fēng)味適宜、生物活性物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、保健功效好的澄清透明的蜂產(chǎn)品保健酒。
【IPC分類】C12G3/04
【公開(kāi)號(hào)】CN105695266
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610173283
【發(fā)明人】李建樹(shù)
【申請(qǐng)人】天津中天精科科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年6月22日
【申請(qǐng)日】2016年3月24日