一株對(duì)己酸菌產(chǎn)己酸有促進(jìn)作用的放線菌的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物及釀酒領(lǐng)域，具體設(shè)及一株對(duì)己酸菌產(chǎn)己酸有促進(jìn)作用的放線 困。
【背景技術(shù)】
[0002] 己酸菌是濃香型白酒生產(chǎn)中非常重要的產(chǎn)酸微生物，由它代謝產(chǎn)生的己酸與大曲 發(fā)酵產(chǎn)生的酒精生成己酸乙醋，是濃香型大曲酒的主體香成分。己酸菌培養(yǎng)液可廣泛應(yīng)用 于濃香型大曲酒的灌魯、魯池保養(yǎng)、人工魯泥培養(yǎng)、醋化液的制作等，W改善和提高濃香型 大曲酒的質(zhì)量。為此，釀酒行業(yè)的學(xué)者一直在做兩件事:一是開發(fā)能夠高產(chǎn)己酸的己酸菌； 二是尋找能夠促進(jìn)己酸菌產(chǎn)酸的辦法。
[0003] 目前，開發(fā)出的己酸菌優(yōu)勢(shì)菌種已有很多。例如姚萬春等人(《釀酒科技》2010年第 11期《優(yōu)良魯泥功能菌的篩選及其生物學(xué)特性的初步研究》)公開了一株從滬州老魯酒廠百 年老魯泥中分離的己酸菌，并通過產(chǎn)酸條件的研究，，最高產(chǎn)酸量達(dá)500mg/100mL。中國專利 CN201010238106.7公開的一株己酸菌GK13,其產(chǎn)己酸水平達(dá)到了 570mg/100血。目前所知的 已經(jīng)公開的己酸菌，其產(chǎn)酸量大多都維持在500mg/100mL左右的水平，再想有所提高已經(jīng)很 難。為此有必要考慮促進(jìn)己酸菌產(chǎn)酸的新工藝或新辦法。
[0004] 促進(jìn)己酸菌產(chǎn)酸的工藝辦法，主要集中在對(duì)己酸菌產(chǎn)酸條件進(jìn)行優(yōu)化，但改變產(chǎn) 酸條件存在不良影響。例如，現(xiàn)在都知道添加一定量的乙醇對(duì)己酸菌生長代謝有促進(jìn)作用。 但實(shí)際生產(chǎn)中運(yùn)種方法卻不可行，因?yàn)檫\(yùn)樣不僅增加了成本，還會(huì)抑制其他釀酒微生物諸 如釀酒酵母的生長代謝。最好的方式是開發(fā)有益菌株，與己酸菌共培養(yǎng)，W復(fù)合菌液的方式 加入魯泥中，進(jìn)行產(chǎn)酸發(fā)酵。例如武漢佳成公司提供的市售養(yǎng)魯液，即為復(fù)合己酸菌液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一株對(duì)己酸菌產(chǎn)己酸有促進(jìn)作用的放線菌，該放線菌能與 己酸菌共生，與己酸菌復(fù)配強(qiáng)化后，能顯著提高己酸菌產(chǎn)己酸水平。
[0006] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] -株對(duì)己酸菌產(chǎn)己酸有促進(jìn)作用的放線菌GW01，該菌株于2016年1月7日保藏于中 國典型培養(yǎng)物保藏中屯、（地址：中國.武漢.武漢大學(xué)），其分類命名為Streptomyces avicenniae GW01，保藏編號(hào)為CCTCC N0:M 2016016。放線菌GW0116S rDNA測(cè)序結(jié)果如沈Q ID NO. 1 所示。
[000引放線菌GW01的培養(yǎng)特征如下:接種菌株GW01于高氏一號(hào)培養(yǎng)基平板上30°C培養(yǎng)7 天，菌落分散呈地衣狀，乳白色；最初表面相當(dāng)光滑，然后發(fā)育一層短菌絲體，呈毛絨狀;后 期氣生菌絲變深灰色，基質(zhì)菌絲呈深褐色，生長良好。
[0009] 放線菌GW01的形態(tài)特征如下:通過光學(xué)顯微鏡觀察，GW01菌株基質(zhì)菌絲纖細(xì)，分枝 較多，無橫隔，1.1祉m~1.62皿;氣生菌絲形成柔曲形抱子鏈，抱子呈圓形，不運(yùn)動(dòng);革蘭氏 陽性菌。
[0010] 放線菌GWOl的生理生化特征如下:菌株GWOl可利用葡萄糖、麥芽糖、木糖、半乳糖、 薦糖、阿拉伯糖、鼠李糖等大多數(shù)碳源，不可利用肌醇、棉子糖；明膠液化；牛奶凝固，腺化 慢;淀粉水解強(qiáng)，可利用纖維素;不產(chǎn)生出S;不還原硝酸鹽。
[0011] 放線菌GW01在高氏一號(hào)培養(yǎng)基中30°C培養(yǎng)7天，連續(xù)傳代數(shù)代培養(yǎng)，其培養(yǎng)特征、 形態(tài)特征、生理生化特征等生物學(xué)特征均無明顯變化，表現(xiàn)出良好的生物學(xué)性狀穩(wěn)定性。
[0012] 放線菌GW01能夠促進(jìn)己酸菌產(chǎn)己酸，可用于釀酒領(lǐng)域。
[0013] -種復(fù)合菌液，包含放線菌GW01和己酸菌。所述的復(fù)合菌液在釀酒領(lǐng)域中的應(yīng)用， 包括：（1)用復(fù)合菌液淋魯，保養(yǎng)魯池；（2)翻松池底魯泥，加入復(fù)合菌液，活化老化魯池；（3) 培植魯泥，加速新泥老熟等。
[0014] 本發(fā)明的放線菌GW01的獨(dú)特意義在于:放線菌GW01是首次公開的一株促己酸菌產(chǎn) 己酸的菌株。在白酒釀造行業(yè)中，對(duì)于放線菌，人們普遍認(rèn)識(shí)不足。由于放線菌經(jīng)常作為抗 生素領(lǐng)域的生產(chǎn)菌株，人們慣性認(rèn)為放線菌的存在更多起到抑制其他釀酒微生物生長代謝 的作用，是一種沒用，甚至有害的微生物。而放線菌GW01的出現(xiàn)，有望讓人們充分認(rèn)識(shí)放線 菌在釀酒行業(yè)的積極作用，豐富了菌株資源，對(duì)于釀酒微生物的研究具有重要意義。
[0015] 本發(fā)明具有如下有益效果:放線菌GW01與己酸菌復(fù)配，能有效促進(jìn)己酸菌產(chǎn)己酸。 復(fù)配后的復(fù)合菌液的己酸生成量大大提高，有利于改善魯泥環(huán)境，可用于魯池養(yǎng)護(hù)，應(yīng)用前 景廣泛。
【附圖說明】
[0016] 圖1為放線菌GW01在高氏一號(hào)培養(yǎng)基平板上的菌落圖。
[0017] 圖2為放線菌GW01在光學(xué)顯微鏡下的菌體形態(tài)圖，放大倍數(shù)10X40高倍鏡的鏡檢 圖。
[0018] 圖3為放線菌GW01在光學(xué)顯微鏡下的菌體形態(tài)圖，放大倍數(shù)10X100油鏡的鏡檢 圖。
[0019] 圖4為放線菌GW01的16S rDNA PCR產(chǎn)物電泳圖。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，運(yùn)些實(shí)施例不能理解為是對(duì) 技術(shù)方案的的限制。凡是不違背本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍 之內(nèi)。
[0021] 實(shí)施例1放線菌GW01的篩選
[0022] 本發(fā)明經(jīng)過大量試驗(yàn)篩選優(yōu)質(zhì)老魯泥、酒曲、酒酷等，最終獲得了放線菌GW01。
[0023] 放線菌GW01分離于白酒魯池優(yōu)質(zhì)老魯泥。所用分離培養(yǎng)基為高氏一號(hào)培養(yǎng)基 (Gause's Synthetic Agar,GSA):可溶性淀粉2%、化C1 0.05%、KN03 0.1%、MgS〇4?7H2〇 0.05%、K抽P04·3出0 0.05%、FeS04·7出0 0.001%、pH7.4~7.6。
[0024] 取魯泥樣品先富集培養(yǎng)，然后在分離培養(yǎng)基平板上進(jìn)行劃線分離。挑選的菌株，進(jìn) 一步在分離培養(yǎng)基平板上純化幾次。篩選的菌株，通過鏡檢確認(rèn)是放線菌。把放線菌加入到 己酸菌發(fā)酵液中，混合發(fā)酵一段時(shí)間，通過硫酸銅顯色法進(jìn)行復(fù)篩，選取顯色反應(yīng)明顯的菌 株，用氣相色譜法測(cè)己酸含量。從而篩選出對(duì)己酸菌產(chǎn)酸有促進(jìn)作用，并且促進(jìn)作用最大的 放線菌，即本發(fā)明的放線菌GWOl。同時(shí)還篩選到其他幾株對(duì)己酸菌產(chǎn)酸有促進(jìn)作用的鏈霉 菌屬的方義線菌 Streptomyces sp . FK Strep tomyces