一株防治梨輪紋病和軟腐病的暹羅芽孢桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體設(shè)及一株防治梨輪紋病和軟腐病的遣羅芽抱桿菌及 其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 梨是我國(guó)栽培歷史久、面積大、產(chǎn)量高的果樹之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)梨是我國(guó)第3大水果，目 前全國(guó)總面積達(dá)100多萬(wàn)公頃，年產(chǎn)量800多萬(wàn)噸，分別占全世界梨栽培面積和產(chǎn)量的62% 和52 %。梨果實(shí)在生長(zhǎng)發(fā)育及膽藏期間，時(shí)刻會(huì)受到病害的威脅，其中輪紋病 (Bo化yosphaeria dothidea)是最嚴(yán)重的果實(shí)真菌病害之一，是造成梨果實(shí)爛果的主要原 因。由于輪紋病菌是在幼果期潛伏侵染，在果實(shí)成熟及膽運(yùn)期間發(fā)病，控制和防范都有很大 困難。梨軟腐病主要由甸枝根霉(I^hizopus stolonifer)和梨形毛霉(Mucor piriformis) 引起，主要危害梨果實(shí)，一般零星發(fā)生，但是果實(shí)傷口多、膽藏期溫度高時(shí)發(fā)生較重。高溫 時(shí)，5-6天內(nèi)可使病果全部軟腐。
[0003] 新鮮水果采后腐爛是一個(gè)全球性的問(wèn)題。我國(guó)每年因?yàn)槔孑喖y病危害造成梨果減 產(chǎn)約25%，嚴(yán)重時(shí)爛果率高達(dá)80% W上，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前生產(chǎn)上常采用化學(xué)藥劑防 治梨采后病害，運(yùn)樣不僅嚴(yán)重污染生態(tài)環(huán)境，而且增加農(nóng)產(chǎn)品中有毒化學(xué)物質(zhì)的殘留量，對(duì) 人類健康帶來(lái)潛在危害，同時(shí)也易誘致病原菌抗藥性的產(chǎn)生。生物防治利用物種間的括抗 作用來(lái)減少病害的發(fā)生，對(duì)人畜安全、環(huán)境兼容性好、病蟲害不易產(chǎn)生抗藥性，因而具有化 學(xué)殺菌劑不具有的優(yōu)勢(shì)，正逐步成為代替化學(xué)殺菌劑的最佳方式。
[0004] 獲得高效括抗菌是生物防治的基礎(chǔ)。枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)是最早 被報(bào)道用來(lái)防治相橘病害的細(xì)菌(Gutter and Littauer，1953)。隨著研究的深入，人們已 篩選并報(bào)道多種對(duì)果蔬采后病害具有防治效果的括抗菌，主要是酵母菌、芽胞桿菌、假單胞 菌和木霉菌。幾株微生物括抗菌已經(jīng)被授權(quán)專利并商業(yè)應(yīng)用，如Biosave(Pseudomonas syringae，USA)、"Shemer"(Metschnikowia Fructicola，Israel)、Serenade(Baci1lus subtilis，USA)和化ndifruit(Candida sake，Spain)。由于可W產(chǎn)生具有高括抗活性的廣 譜抗菌物質(zhì)，極強(qiáng)的抗逆能力，同時(shí)具有無(wú)毒、無(wú)殘留、無(wú)致病性、對(duì)人畜安全、環(huán)境相容性 好，滿足了消費(fèi)者對(duì)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的要求，芽抱桿菌(Bacillus)在生物防治中起著 極為重要的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一株遣羅芽胞桿菌(Bacillus siamensis)LYLB4。
[0006] 本發(fā)明提供的遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis化化B4的保藏編號(hào)為CGMCC No.11859。
[0007] 上述菌株LYLB4的分類命名為遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis)，該菌株于 2015年12月10日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、（簡(jiǎn)稱CGMCC，地 址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號(hào)為 CGMCC No.11859。
[0008] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑的新用途。
[0009] 本發(fā)明提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌 劑在防治輪紋病和/或軟腐病中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明還提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的 菌劑在制備防治輪紋病和/或軟腐病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0011] 上述應(yīng)用中，所述輪紋病和/或軟腐病為梨輪紋病和/或梨軟腐病。
[0012] 本發(fā)明還提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的 菌劑在抗菌和/或抑菌中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明還提供了遣羅芽胞桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的 菌劑在制備抗菌和/或抑菌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0014] 上述應(yīng)用中，所述抗菌和/或抑菌是通過(guò)抑制菌絲生長(zhǎng)體現(xiàn)的。
[001引上述應(yīng)用中，所述菌為輪紋病菌（Botryosphaeria dothidea)和/或軟腐病菌 (I?lizopusstolonife;r)和/或石解黑斑病菌(Alte;rna;riatenuissima)和/或棉花黃萎病 菌（￥61'1：；[。；[11；[11111(1日1111日6)和/或白菜黑斑病菌(4116111日1'13 13招33；[。日6)和/或灰霉病菌 (Bot;rytis cinerea)和/或辣椒立枯病菌（Rizoctonia solani)和/或香蕉枯萎病菌 (F'usarium 0巧sporum)和/或稻攝病菌（Piri州laria Oiyzae)和/或禾谷鑲抱菌化usarium graminearum)。
[0016] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種產(chǎn)品。
[0017] 本發(fā)明提供的產(chǎn)品的活性成分為上述遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis) LYLB4CGMCC No. 11859或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑；
[0018] 所述產(chǎn)品具有如下1)或2)所述的功能：
[0019] 1)防治輪紋病和/或軟腐?。?br>[0020] 2)抗菌和/或抑菌。
[0021 ]上述產(chǎn)品中，所述抗菌和/或抑菌是通過(guò)抑制菌絲生長(zhǎng)體現(xiàn)的；
[0022] 所述菌為輪紋病菌（BotiTosphaeria dothidea)和/或軟腐病菌（Rhizopus stolonifer)和/或石解黑斑病菌（Alternaria tenuissima)和/或棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)和/或白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae)和/或灰霉病菌 (Bot;rytis cinerea)和/或辣椒立枯病菌（Rizoctonia solani)和/或香蕉枯萎病菌 (F'usarium 0巧sporum)和/或稻攝病菌（Piri州laria Oiyzae)和/或禾谷鑲抱菌化usarium graminearum)。
[0023] 本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種防治或輔助防治梨果實(shí)輪紋病和/或軟腐病的 方法。
[0024] 本發(fā)明提供的防治或輔助防治梨果實(shí)輪紋病和/或軟腐病的方法包括如下步驟： 用上述遣羅芽胞桿菌或上述產(chǎn)品中的菌懸液處理梨果實(shí)。
[0025] 上述方法中，所述菌懸液中遣羅芽胞桿菌濃度為5 X 107CFU/ml。
[0026] 本發(fā)明從表面滅菌的萊陽(yáng)梨果皮中分離獲得一株遣羅芽胞桿菌（Bacillus siamensis),該菌株對(duì)多種植物病原菌具有廣譜抗性，對(duì)由輪紋病和軟腐病引起的梨果實(shí) 腐爛具有良好的防治效果。該菌株來(lái)源于梨果實(shí)，對(duì)梨果實(shí)安全;大規(guī)模生產(chǎn)原料成本低， 操作方便，防治效果穩(wěn)定，能有效解決梨果實(shí)病害農(nóng)藥防治所帶來(lái)的農(nóng)業(yè)殘留和環(huán)境污染 問(wèn)題。在梨采后病害的生物防治方面具有巨大的應(yīng)用潛力，為研制和開發(fā)微生物農(nóng)藥提供 了優(yōu)良的基礎(chǔ)菌株。
【附圖說(shuō)明】
[0027]圖1為菌株LYLB4的形態(tài)照片。
[002引圖2為基于菌株LYLB4的16S rDNA構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0029] 圖3為菌株LYLB4與輪紋病菌和軟腐病菌對(duì)時(shí)培養(yǎng)的照片。其中圖3A為菌株LYLB4 與輪紋病菌對(duì)時(shí)培養(yǎng)7天的照片；圖3B為菌株LYLB4與軟腐病菌對(duì)時(shí)培養(yǎng)10天的照片。
[0030] 圖4為菌株LYLB4作用下輪紋病菌菌絲形態(tài)和軟腐病菌菌絲形態(tài)。圖4A為L(zhǎng)YLB4處 理組的輪紋病菌菌絲形態(tài)；圖4B為對(duì)照組的輪紋病菌菌絲形態(tài)；圖4C為L(zhǎng)YLB4處理組的軟腐 病菌菌絲形態(tài)；圖4D為對(duì)照組的軟腐病菌菌絲形態(tài)。
[0031] 圖5為菌株LYLB4對(duì)梨果實(shí)輪紋病的防治作用。
[0032] 圖6為菌株LYLB4對(duì)梨果實(shí)軟腐病的防治作用。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0034] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0035] 下述實(shí)施例中的梨品種為"水晶梨"
[0036] 下述實(shí)施例中的馬鈴馨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA):馬鈴馨200克、葡萄糖20克、瓊脂 15克，用蒸饋水定容至1升，自然抑。
[0037] 下述實(shí)