，先用自來水沖洗干凈，然后用75%酒精 噴灑消毒，2min后用無菌濾紙擦干表面?zhèn)溆谩?br>[0081 ] 2、LYLB4菌懸液處理
[0082] 用無菌打孔器(直徑6mm)在果實(shí)表面對(duì)稱打兩個(gè)深度盡可能一致的傷口，在傷口 內(nèi)分別接種50化5 X 107C即/ml的LYLB4菌懸液化化B4處理組)和等量無菌水(對(duì)照組），每 處理8個(gè)果實(shí)，重復(fù)3次，室溫放置一天。
[0083] 3、接種病原菌
[0084] 分別在步驟2中的LYLB4處理組和對(duì)照組的傷口處接種直徑6mm的輪紋病菌塊，接 種處理后放入PE密閉箱中在25°C，畑>90%條件下條件下培養(yǎng)，定時(shí)觀察并記錄結(jié)果，并計(jì) 算平均發(fā)病率（％ )和平均病斑直徑(cm)。
[0085] 菌株LYLB4對(duì)梨果實(shí)輪紋病的防治作用如圖5、表3所示，L化B4處理組與對(duì)照組相 比，梨果實(shí)輪紋病的發(fā)病情況明顯減弱。在接入輪紋病菌3天后，對(duì)照組開始發(fā)病，L化B4處 理可W完全抑制梨果實(shí)輪紋病的發(fā)生;隨著接種時(shí)間的增加，對(duì)照組發(fā)病速度較快，接入病 菌5天后，對(duì)照組100%發(fā)病，而LYLB4處理依然可W100%抑制梨果實(shí)輪紋病的發(fā)生;接入病 菌7天后，LYLB4處理組開始出現(xiàn)病斑;9天后，對(duì)照組腐爛面積大于50%，直徑在6cm左右，而 LYLB4處理組的梨果實(shí)病斑直徑平均在1.7cm，比對(duì)照降低了71.7%，LYLB4處理有效的減緩 了梨輪紋病的發(fā)生和發(fā)展，具有良好的防治效果。
[0086] 表3、LYLB4對(duì)梨果實(shí)輪紋病的防治作用
[0087]
[0088] 二、不同濃度LYLB4菌懸液對(duì)梨果實(shí)輪紋病的防治作用
[0089] 1、梨預(yù)處理
[0090] 選取外觀整齊、無病蟲害、無外傷的果實(shí)，先用自來水沖洗干凈，然后用75%酒精 噴灑消毒，2min后用無菌濾紙擦干表面?zhèn)溆谩?br>[0091] 2、不同濃度的LYLB4菌懸液處理
[0092] 用無菌打孔器(直徑6mm)在果實(shí)表面對(duì)稱打兩個(gè)深度盡可能一致的傷口，在其中 一個(gè)傷口內(nèi)分別接種5 X 10?即/ml、5 X l〇6c即/ml、5 X l〇5c即/πα和5 X 10化即/ml L化B4菌 液50化，并在另一個(gè)傷口內(nèi)加入等量無菌水為對(duì)照。每處理8個(gè)果實(shí)，重復(fù)3次，室溫放置一 天。
[0093] 3、接種病原菌
[0094] 分別在步驟2中的各個(gè)LYLB4處理組和對(duì)照組的傷口處接種直徑6mm的輪紋病菌 塊，接種處理后放入PE密閉箱中在25°C，RH〉90%條件下條件下培養(yǎng)，定時(shí)觀察并記錄結(jié)果， 并計(jì)算平均發(fā)病率（％ )和平均病斑直徑(mm)。
[0095] 不同濃度LYLB4菌懸液對(duì)梨果實(shí)輪紋病的防治作用如表4所示，不同濃度的LYLB4 菌懸液處理梨果實(shí)9天，隨著YLB4菌懸液濃度的降低，對(duì)梨輪紋病的防治作用逐漸減弱，5X 107CFU/ml L化B4處理組效果最好，延遲和減緩梨輪紋病的發(fā)生，具有良好的防治作用。
[0096 ]表4、不同濃度LYLB4對(duì)梨果實(shí)輪紋病的防治作用
[0097]
[0098] 實(shí)施例4、菌株LYLB4在防治梨果實(shí)軟腐病中的應(yīng)用
[0099] 1、梨預(yù)處理
[0100] 選取外觀整齊、無病蟲害、無外傷的果實(shí)，先用自來水沖洗干凈，然后用75%酒精 噴灑消毒，2min后用無菌濾紙擦干表面?zhèn)溆谩?br>[0101] 2、LYLB4菌懸液處理
[0102] 用無菌打孔器(直徑6mm)在果實(shí)表面對(duì)稱打兩個(gè)深度盡可能一致的傷口，在傷口 內(nèi)分別接種50化5 X 107C即/ml的LYLB4菌懸液化化B4處理組)和等量無菌水(對(duì)照組），每 處理8個(gè)果實(shí)，重復(fù)3次，室溫放置一天。
[010引3、接種病原菌
[0104] 分別在步驟2中的LYLB4處理組和對(duì)照組的傷口處接種1 X 105spores/ml的甸枝根 霉(化izopus stolonifer)懸液50化接種處理后放入陽密閉箱中在25°C，畑>90%條件下條 件下培養(yǎng)，定時(shí)觀察并記錄結(jié)果，并計(jì)算平均發(fā)病率（％)和平均病斑直徑(mm)。
[0105] 菌株LYLB4對(duì)梨果實(shí)軟腐病的防治作用如圖6、表5所示，甸枝根霉接種后，對(duì)照組 發(fā)病迅速，在接入軟腐病菌2天后，對(duì)照組病斑直徑已達(dá)6-7cm，LYLB4處理組可W完全抑制 梨果實(shí)軟腐病的發(fā)生;4天后，對(duì)照組梨果實(shí)全部腐爛，滲出大量的液體，且布滿黑色菌絲和 抱子;而LYLB4處理組依然100%抑制梨果實(shí)軟腐病的發(fā)生；10天后LYLB4處理組開始發(fā)病。 LYLB4對(duì)梨果實(shí)軟腐病的發(fā)生有很好的防治作用。表5、LYLB4對(duì)梨果實(shí)軟腐病的防治作用
[0106]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株暹羅芽孢桿菌(Bacillus siamensis)LYLB4,其保藏編號(hào)為CGMCC No. 11859。2. 權(quán)利要求1所述的暹羅芽孢桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌 劑在防治輪紋病和/或軟腐病中的應(yīng)用； 或權(quán)利要求1所述的暹羅芽孢桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌 劑在制備防治輪紋病和/或軟腐病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述輪紋病和/或軟腐病為梨輪紋病和/或 梨軟腐病。4. 權(quán)利要求1所述的暹羅芽孢桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌 劑在抗菌和/或抑菌中的應(yīng)用； 或權(quán)利要求1所述的暹羅芽孢桿菌或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌 劑在制備抗菌和/或抑菌的產(chǎn)品中的應(yīng)用。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述菌為輪紋病菌（Botryosphaeria tenuissima)和/或棉花黃萎病菌（Verticillium dahliae)和/或白菜黑斑病菌 (Alternaria brassicae)和/或灰霉病菌（Botrytis cinerea)和/或辣椒立枯病菌 (Rizoctonia solani)和/或香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum)和/或稻痕病菌 (Piricularia Oryzae)和/或禾谷鏡抱菌（Fusarium graminearum)。6. -種產(chǎn)品，其活性成分為權(quán)利要求1所述的暹羅芽孢桿菌(Bacillus siamensis) LYLB4CGMCC No. 11859或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑； 所述產(chǎn)品具有如下1)或2)所述的功能： 1) 防治輪紋病和/或軟腐病； 2) 抗菌和/或抑菌。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的產(chǎn)品，其特征在于： 所述菌為輪紋病菌（Botryosphaeria dothidea)和/或軟腐病菌（Rhizopus stolonifer)和/或石斛黑斑病菌（Alternaria tenuissima)和/或棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)和/或白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)和/或灰霉病菌 (Botrytis cinerea)和/或辣椒立枯病菌（Rizoctonia solani)和/或香蕉枯萎病菌 (Fusarium oxysporum)和/或稻痕病菌(Piricularia Oryzae)和/或禾谷鏡抱菌(Fusarium graminearum)〇8. -種防治或輔助防治梨果實(shí)輪紋病和/或軟腐病的方法，包括如下步驟:用權(quán)利要求 1所述的暹羅芽孢桿菌或權(quán)利要求6所述產(chǎn)品中的菌懸液處理梨果實(shí)。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述菌懸液中暹羅芽孢桿菌濃度為5 X 107CFU/ml〇
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株防治梨輪紋病和軟腐病的暹羅芽孢桿菌及其應(yīng)用。本發(fā)明從表面滅菌的萊陽梨果皮中分離獲得一株暹羅芽胞桿菌(Bacillus？siamensis)，該菌株對(duì)多種植物病原菌具有廣譜抗性，對(duì)由輪紋病和軟腐病引起的梨果實(shí)腐爛具有良好的防治效果。該菌株來源于梨果實(shí)，對(duì)梨果實(shí)安全；大規(guī)模生產(chǎn)原料成本低，操作方便，防治效果穩(wěn)定，能有效解決梨果實(shí)病害農(nóng)藥防治所帶來的農(nóng)業(yè)殘留和環(huán)境污染問題。在梨采后病害的生物防治方面具有巨大的應(yīng)用潛力，為研制和開發(fā)微生物農(nóng)藥提供了優(yōu)良的基礎(chǔ)菌株。CGMCC No. 1185920151210
【IPC分類】A01P3/00, C12N1/20, A01N63/00, A23B7/155, C12R1/07
【公開號(hào)】CN105505834
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610048328
【發(fā)明人】武利勤, 尚宏忠, 顧海科, 王青
【申請(qǐng)人】北京市輻射中心
【公開日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2016年1月25日