一種提高嗜熱鏈球菌活性及消化道耐受性的方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及食品加工的技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種提高嗜熱鏈球菌活性及消化道耐 受性的方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 江萬菜瓊膠寡糖是一種非消化性低聚糖，是通過水解江萬瓊膠制備獲得，具有抑 制病原菌、腐敗菌等有害菌的生長，能提高人體免疫力，對人體亞健康狀態(tài)進(jìn)行改善，具有 延年益壽的作用。因此江萬菜瓊膠寡糖是一種新型保健品W及食品添加劑或飼料添加劑， 對嗜熱鏈球菌的生長具有明顯促進(jìn)作用，作為益生元添加至嗜熱鏈球菌培養(yǎng)基中對其作用 進(jìn)行探究。
[0003] 目前，在現(xiàn)有技術(shù)中還未有江萬菜瓊膠寡糖對益生菌的促進(jìn)效果的報導(dǎo)，國內(nèi)外 主要研究寡糖的抗病毒、抗炎癥、抗癌癥等作用。工業(yè)生產(chǎn)益生菌發(fā)酵產(chǎn)品，往往出現(xiàn)產(chǎn)品 益生菌數(shù)量不達(dá)標(biāo)的問題。有鑒于此，本發(fā)明人研究和設(shè)計(jì)了一種提高嗜熱鏈球菌活性及 消化道耐受性的方法及其應(yīng)用，本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種提高嗜熱鏈球菌活性及消化道耐受性的方法及其應(yīng) 用，利用江萬菜瓊膠寡糖作為嗜熱鏈球菌的碳源，保護(hù)嗜熱鏈球菌在低溫膽藏下的活性，提 高嗜熱鏈球菌在人體胃腸液中存活率及提高嗜熱鏈球菌的菌活力。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是：
[0006] -種提高嗜熱鏈球菌活性及消化道耐受性的方法，包括W下步驟：
[0007] 步驟一、制備瓊膠寡糖:將江萬清洗除雜，烘干，加入江萬重量30倍的水使江萬充 分溶脹，80°C水浴化;然后升溫至12 rc，加熱20min;將江萬趁熱擠膠，用濾布包裹江萬，并 利用壓力機(jī)擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液，冷卻、烘干、粉碎成顆粒，即得江萬粗多糖;將 江萬粗多糖配制成5g/L的溶液，加入瓊膠酶處理;加酶量為15%(v/v)，酶活為20011/1^;酶 解20-1280min，W制備寡糖溶液，冷凍干燥，或真空干燥成固體粉末，制得聚合度為3-8的瓊 膠寡糖；
[000引步驟二、菌種培養(yǎng):制備MRS培養(yǎng)基，瓊膠寡糖作為碳源，接種嗜熱鏈球菌OD600值為 0.8的菌液，接種量為2 %，無氧環(huán)境下，42°C，靜置培養(yǎng)2-3天；
[0009]步驟Ξ、液體菌保藏：在0〇6日日值為1.2嗜熱鏈球菌液體中，添加濃度為3g/L且聚合 度為3的瓊膠寡糖，放置4°C下膽藏；
[0010]步驟四、固體菌劑保藏:在0D600值為1.2嗜熱鏈球菌液體中，添加濃度為3g/L且聚 合度為3的瓊膠寡糖，噴霧干燥制備固體菌劑，噴霧干燥條件為:麥芽糊精添加量25%，進(jìn)風(fēng) 溫度130°C，進(jìn)風(fēng)速度4mVmin，進(jìn)料速度700血A，空氣壓力0.3Pa，制備固體菌劑，制備好的 固體菌劑放置在常溫或-20°C膽藏。
[0011]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟一中，酶解時間為20min，制得聚合度為8的瓊膠 寡糖。
[0012] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟一中，酶解時間為80min，制得聚合度為5的瓊膠 寡糖。
[0013] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟一中，酶解時間為1280min，制得聚合度為3的瓊 膠寡糖。
[0014] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟二中，MRS培養(yǎng)基的組成為：牛肉蛋白粉lOg、魚 肉汁lOg，酵母浸出汁粉5g，瓊膠寡糖20g，醋酸鋼5g，巧樣酸二錠2g，吐溫SOO.lg，硫酸儀 0.58g，硫酸儘0.28g，蒸溜水1000ml; 121°C高壓滅菌15min，調(diào)節(jié)抑6.2-6.4。
[0015] -種提高嗜熱鏈球菌活性及消化道耐受性方法的應(yīng)用，用于模擬胃腸消化對嗜熱 鏈球菌的作用:將發(fā)酵一定程度的嗜熱鏈球菌添加瓊膠寡糖放置于體外模擬人體腸液或模 擬人體胃液中，測定嗜熱鏈球菌的耐受性。
[0016] 作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述體外模擬人體腸液條件為:K此P〇4〇 . 5 %，膜蛋白酶 0.3%，用NaOH調(diào)節(jié)抑為8.0，0.22皿微孔濾膜過濾滅菌。
[0017]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述體外模擬人體胃液條件為:NaCl 0.3%，KC1 0.2%, 胃蛋白酶0.5%，用肥1調(diào)節(jié)抑為2.0，0.22皿微孔濾膜過濾滅菌。
[0018] 采用本發(fā)明的技術(shù)方案后，具有W下有益效果：
[0019] 1.本發(fā)明利用江萬菜瓊膠寡糖作為嗜熱鏈球菌的生長碳源有效的提高了嗜熱鏈 球菌在低溫膽藏下的活性、W及在胃腸消化環(huán)境下的保護(hù)作用，表明江萬菜瓊膠寡糖對嗜 熱鏈球菌的生長具有益生元作用。
[0020] 2.本發(fā)明所使用的瓊膠寡糖在噴霧干燥制備中提高菌活力，同比沒有添加寡糖的 菌劑活菌數(shù)量提高10倍。
[0021] 3.本發(fā)明所使用的江萬菜瓊膠寡糖不會產(chǎn)生任何污染成分，更不會污染環(huán)境。本 方法在實(shí)際生產(chǎn)中投資少見效快，適合推廣應(yīng)用。
[0022] 4.采用高壓滅菌加熱處理，可W有效的對江萬菜進(jìn)行加熱處理，減少水浴加熱時 間，減少熱能損耗，相應(yīng)國家節(jié)能減排的號召。
【附圖說明】
[0023] 圖1本發(fā)明不同聚合度瓊膠寡糖對嗜熱鏈球菌在胃液模擬液的保護(hù)作用；
[0024] 圖2本發(fā)明不同聚合度瓊膠寡糖對嗜熱鏈球菌在腸液模擬液的保護(hù)作用；
[0025] 圖3本發(fā)明不同濃度瓊膠寡糖對嗜熱鏈球菌在胃液模擬液的保護(hù)作用；
[0026] 圖4本發(fā)明不同濃度瓊膠寡糖對嗜熱鏈球菌在腸液模擬液的保護(hù)作用；
[0027] 圖5本發(fā)明不同聚合度瓊膠寡糖對嗜熱鏈球菌在固態(tài)菌劑中的作用；
[0028] 圖6本發(fā)明不同濃度瓊膠寡糖對嗜熱鏈球菌在固態(tài)菌劑中的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 酶活單位定義為每分鐘產(chǎn)生化g還原糖所需酶量。
[0030] 空白對照組:制備MRS培養(yǎng)基，MRS培養(yǎng)基的組成為：牛肉蛋白粉lOg、魚肉汁lOg，酵 母浸出汁粉5g，葡萄糖20g，醋酸鋼5g，巧樣酸二錠2g，吐溫SOO.lg，硫酸儀0.58g，硫酸儘 0.28g，蒸溜水1000ml; 121°C高壓滅菌15min，調(diào)節(jié)P冊.2-6.4;葡萄糖作為碳源，接種嗜熱鏈 球菌0D6GG值為ο. 8的菌液，接種量為2 %。無氧環(huán)境下，42°C，靜置培養(yǎng)2-3天。
[0031] 江萬菜瓊膠寡糖組：制備江萬菜瓊膠寡糖，將瓊膠寡糖代替MRS培養(yǎng)基中的葡萄 糖，并利用不同聚合度的寡糖(DP3、DP5、DP8)和不同濃度寡糖（lg/L、3g/L、5g/L、7g/L、10g/ L)來對嗜熱鏈球菌進(jìn)行培養(yǎng)。接種嗜熱鏈球菌OD600值為0.8的菌液，接種量為2%。無氧環(huán)境 下，42°C，靜置培養(yǎng)2-3天。
[0032] 實(shí)施例1: 一種嗜熱鏈球菌生長的江萬菜瓊膠寡糖制備方法
[0033] 步驟一、江萬除雜:將江萬清洗除雜，至沒有泥沙，水樣清澈，烘干，加入江萬重量 30倍的水使江萬充分溶脹，然后置于80°C的水浴中加熱化；
[0034] 步驟二、高壓滅菌:對加熱處理后的江萬進(jìn)行高壓滅菌，將微生物殺滅，高壓滅菌 溫度為12rC，滅菌時間為20min;
[0035] 步驟Ξ、擠膠:將江萬趁熱擠膠，用濾布包裹江萬，并利用壓力機(jī)對裝有江萬的濾 布進(jìn)行擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液;將收集的多糖溶液進(jìn)行冷卻、烘干、粉碎成顆粒裝 袋備用，放置在陰涼干燥處保存，即得江萬粗多糖；
[0036] 步驟四、酶處理:將冷卻的粗多糖溶解水中，制成濃度為5g/L的多糖溶液，加入瓊 膠酶處理;加酶量為15%，酶活為20〇υ/ιΛ;酶解20-1280min，W制備寡糖溶液；
[0037] 步驟五、干燥:寡糖溶液進(jìn)行冷凍干燥，或真空干燥成固體粉末，制得瓊膠寡糖。
[0038] 作為實(shí)施例1的優(yōu)選方式，所述步驟四中，酶解時間為20min，制得聚合度為8的瓊 膠寡糖。
[0039] 作為實(shí)施例1的優(yōu)選方式，所述步驟四中，酶解時間為80min，制得聚合度為5的瓊 膠寡糖。
[0040] 作為實(shí)施例1的優(yōu)選方式，所述步驟四中，酶解時間為1280min，制得聚合度為3的 瓊膠寡糖。
[0041] 實(shí)施例2:不同聚合度瓊膠寡糖提高嗜熱鏈球菌在低溫膽藏下菌活力的作用
[0042] 利用W上制備寡糖方法制備出不同聚合度的瓊膠寡糖，將其添加至已發(fā)酵達(dá)到 OD600值為1.2的嗜熱鏈球菌的MRS培養(yǎng)基中，按照同一濃度的不同聚合度瓊膠寡糖（DP3、 DP5、DP8)添加至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為無氧環(huán)境下，4°C，靜置培養(yǎng)，每隔3天取樣至顯微鏡 下觀察活菌數(shù)量，如表1所示。
[0043] 表1不同聚合度瓊膠寡糖提高嗜熱鏈球菌在低溫膽藏下菌活力
[0044]
[0045] 結(jié)果表明，江萬菜瓊膠