一種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品加工的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]江蘺(GraciIaria)是多年生的大型紅藻，屬于紅藻門，是我國(guó)廣東、浙江、臺(tái)灣沿海藻類養(yǎng)殖品種之一，主要作為漁業(yè)養(yǎng)殖飼料和生產(chǎn)食品膠原料。江蘺菜瓊膠寡糖是一種非消化性低聚糖，對(duì)嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)具有明顯促進(jìn)作用，并且具有抑制病原菌、腐敗菌等有害菌的生長(zhǎng)，能提高人體免疫力，改善內(nèi)分泌系統(tǒng)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，對(duì)人體亞健康狀態(tài)進(jìn)行改善，對(duì)抗生素、激素、細(xì)胞毒性藥物等所致的菌群失調(diào)所引起的腸炎、腹瀉、便秘以及藥物的副作用進(jìn)行治療，具有延年益壽的作用。因此江蘺菜瓊膠寡糖是一種新型保健品以及食品添加劑或飼料添加劑。
[0003]目前，在現(xiàn)有技術(shù)中還未有江蘺菜瓊膠寡糖對(duì)益生菌的促進(jìn)效果的報(bào)導(dǎo)，國(guó)內(nèi)外主要研究寡糖的抗病毒、抗炎癥、抗癌癥等作用。工業(yè)生產(chǎn)益生菌發(fā)酵產(chǎn)品，往往出現(xiàn)產(chǎn)品益生菌數(shù)量不達(dá)標(biāo)的問(wèn)題。有鑒于此，本發(fā)明人研究和設(shè)計(jì)了一種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法及其應(yīng)用，本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法及其應(yīng)用，利用江蘺菜瓊膠寡糖作為嗜熱鏈球菌的碳源，提高發(fā)酵效率，減少工廠發(fā)酵時(shí)間，促進(jìn)嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采取的技術(shù)方案是:
[0006]—種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法，包括以下步驟:
[0007]步驟一、瓊膠酶粗酶液的制備:將嗜熱鏈球菌菌株(Vibr1sp.NTi)接種于產(chǎn)瓊膠酶液體培養(yǎng)基中，活化溫度為25°C，180r/min培養(yǎng)12h，以2%接種量轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度25°C，180r/min培養(yǎng)24h，對(duì)發(fā)酵液在4°C下8000r/min條件下離心30min，取上清液，即得瓊膠酶粗酶液，所述瓊膠酶粗酶液酶活I(lǐng) 200U/mL；
[0008]步驟二、江蘺除雜:將江蘺清洗除雜，烘干，加入江蘺重量30倍的水使江蘺充分溶脹，然后置于80 V的水浴中加熱2h;
[0009]步驟三、升溫滅菌:對(duì)加熱處理后的江蘺進(jìn)行升溫至121°C，滅菌時(shí)間為20min;
[0010]步驟四、擠膠:將江蘺趁熱擠膠，用濾布包裹江蘺，并利用壓力機(jī)對(duì)裝有江蘺的濾布進(jìn)行擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液;將收集的多糖溶液進(jìn)行冷卻、烘干、粉碎成顆粒裝袋備用，放置在陰涼干燥處保存，即得江蘺粗多糖；
[0011]步驟五、酶處理:將冷卻的粗多糖溶解水中，制成濃度為5g/L的多糖溶液，加入所述瓊膠酶粗酶液處理;加酶量為15 % (v/v)，酶活為200U/mL;酶解20-1280min，以制備寡糖溶液；
[0012]步驟六、干燥:寡糖溶液進(jìn)行冷凍干燥，或真空干燥成固體粉末，制得瓊膠寡糖。
[0013]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟一中，所述產(chǎn)瓊膠酶液體培養(yǎng)基成分為:瓊脂3g/L、酵母膏6g/L、NaCl 20g/L、MgS04.7H20 5g/L、KCl lg/L、CaCl2 0.2g/L、K2HP04 0.lg/L、FeS04.7H20 0.02g/L。
[0014]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟四中，酶解時(shí)間為20min，制得聚合度為8的瓊膠寡糖。
[0015]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟四中，酶解時(shí)間為80min，制得聚合度為5的瓊膠寡糖。
[0016]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述步驟四中，酶解時(shí)間為1280min，制得聚合度為3的瓊膠寡糖。
[0017]一種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖的應(yīng)用，用于貯藏嗜熱鏈球菌:將嗜熱鏈球菌按接種量2%，添加至含聚合度3-8和濃度為l-10g/L的瓊膠寡糖的培養(yǎng)基中，置于42°C，無(wú)氧條件下，靜置培養(yǎng)2-3天，并每隔一段時(shí)間測(cè)定活菌數(shù)。
[0018]采用本發(fā)明的技術(shù)方案后，具有以下有益效果:
[0019]1.本發(fā)明利用江蘺菜瓊膠寡糖作為嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)碳源有效的解決了嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、菌量數(shù)不高的問(wèn)題。
[0020]2.本發(fā)明所使用的江蘺菜瓊膠寡糖不會(huì)產(chǎn)生任何污染成分，更不會(huì)污染環(huán)境。本方法在實(shí)際生產(chǎn)中投資少見(jiàn)效快，適合推廣應(yīng)用。
[0021]3.采用高壓滅菌加熱處理，可以有效的對(duì)江蘺菜進(jìn)行加熱處理，減少水浴加熱時(shí)間，減少熱能損耗，相應(yīng)國(guó)家節(jié)能減排的號(hào)召。
【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1為本發(fā)明不同聚合度江蘺菜瓊膠寡糖薄層色譜圖；
[0023]圖2為本發(fā)明不同寡糖促嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)曲線圖；
[0024]圖3為本發(fā)明不同聚合度江蘺瓊膠寡糖促嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)曲線圖；
[0025]圖4為本發(fā)明不同濃度的江蘺瓊膠寡糖(DP3)促嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0026]酶活的測(cè)定方法:(I)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)取250yL處理后的上清液，添加500yL溶于50mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.0)的0.5%的瓊脂(高溫溶解后保溫于40°C水浴中)，40°C溫浴30min，加500yL DNS終止反應(yīng)，沸水浴5min后冷卻，稀釋到5mL，測(cè)520nm處的吸光值，然后依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算反應(yīng)液中還原糖的生成量，以檢測(cè)發(fā)酵液中瓊膠酶的活力。以沸水浴滅活5min的酶液作為對(duì)照。以上述條件下每分鐘催化產(chǎn)生Iyg還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位(U)。
[0027]空白對(duì)照組:制備MRS培養(yǎng)基，所述MRS培養(yǎng)基包括以下組分:胰蛋白胨20.0g，酵母浸出粉5.(^，明膠2.58，葡萄糖]^凡至1(^凡，鹿糖5.(^，乳糖58，乙酸鈉1.58，氯化鈉4.(^，抗壞血酸0.5g，吐溫801.0g，蒸餾水1L。調(diào)酸度至pH 6.8。接種嗜熱鏈球菌OD6qq值為0.8的菌液，接種量為2 % ο無(wú)氧環(huán)境下，42 °C，靜置培養(yǎng)2-3天。
[0028]江蘺菜瓊膠寡糖組:制備江蘺菜瓊膠寡糖，將瓊膠寡糖代替MRS培養(yǎng)基中的葡萄糖，并利用不同聚合度的寡糖(DP3、DP5、DP8)和不同濃度寡糖ag/L、3g//L、5g/L、7g/L、10g/L)來(lái)對(duì)嗜熱鏈球菌進(jìn)行培養(yǎng)。接種嗜熱鏈球菌0D_值為0.8的菌液，接種量為2%。無(wú)氧環(huán)境下，42 °C，靜置培養(yǎng)2-3天。
[0029]實(shí)施例1:一種嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法
[0030]一種促嗜熱鏈球菌生長(zhǎng)的江蘺菜瓊膠寡糖制備方法，包括以下步驟:
[0031 ]步驟一、瓊膠酶粗酶液的制備:將嗜熱鏈球菌菌株(Vibr1 sp.NTi)接種于產(chǎn)瓊膠酶液體培養(yǎng)基中，活化溫度為25°C，180r/min培養(yǎng)12h，以2%接種量轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度25°C，180r/min培養(yǎng)24h，對(duì)發(fā)酵液在4°C下8000r/min條件下離心30min，取上清液，即得瓊膠酶粗酶液，所述瓊膠酶粗酶液酶活I(lǐng) 200U/mL；
[0032]步驟二、江蘺除雜:將江蘺清洗除雜，烘干，加入江蘺重量30倍的水使江蘺充分溶脹，然后置于80 V的水浴中加熱2h;
[0033]步驟三、升溫滅菌:對(duì)加熱處理后的江蘺進(jìn)行升溫至121°C，滅菌時(shí)間為20min;
[0034]步驟四、擠膠:將江蘺趁熱擠膠，用濾布包裹江蘺，并利用壓力機(jī)對(duì)裝有江蘺的濾布進(jìn)行擠壓，收集擠膠濾出的多糖溶液;將收集的多糖溶液進(jìn)行冷卻、烘干、粉碎成顆粒裝袋備用，放置在陰涼干燥處保存，即得江蘺粗多糖；
[0035]步驟五、酶處理:將冷卻的粗多糖溶解水中，制成濃度為5g/L的多糖溶液，加入所述瓊膠酶粗酶液處理;加酶量為15 % (v/v)，酶活為200U/mL;酶解20-1280min，以制備寡糖溶液