20g/L，蛋白胨20g/L，pH6.4;配制 固體培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0021] 培養(yǎng)液成份為：葡萄糖44g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12g/L，酵母提取物5g/L， (NH4)2HPO4 15g/L，KH2PO4 7.5g/L.MgSO4 .7H20 0.8g/L，NaCl0.1g/L;pH6. 4。
[0022] 濕酵母細(xì)胞制備過程如下：釀酒酵母ATCC3666經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到種子液。 5L發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至29°C，將釀酒酵母種子液接種至發(fā) 酵罐，接種比例為6. 5%，通氣比為I. 3VAV分鐘），29°C培養(yǎng)75小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心 得到濕酵母細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0023] 生物催化轉(zhuǎn)化：5L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為6. 0,加入底 物3-苯并呋喃酮，使?jié)舛葹?0g/L，麥芽浸膏22g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚 18g/L，木糖20g/L、蔗糖28g/L、麥芽糖36g/L、異丙醇8%V/V(體積濃度），121°C高壓滅菌 30分鐘；冷卻至29°C時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?9g/L，通氣比為0. 16V/ (V分鐘），進(jìn)行 生物催化反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為79小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出 乙酸乙酯，得到產(chǎn)物（S)-3-苯并呋喃醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98%，產(chǎn)品收率96%，對映體過量率 99%〇
[0024] 實(shí)施例3 種子培養(yǎng)基成份為：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH6.4;配制 固體培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0025] 培養(yǎng)液成份為：葡萄糖40g/L，木糖7. 5g/L，玉米胚芽粉11g/L，酵母提取物 4. 5g/L, (NH4)2HPO4 13g/L,KH2PO4 7g/L.MgSO4 . 7H20 0. 75g/L,NaCl0. 09g/ L;pH6. 4〇
[0026] 濕酵母細(xì)胞制備過程如下：釀酒酵母ATCC3666經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到種子液。 IOL發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至28°C，將釀酒酵母種子液接種至發(fā) 酵罐，接種比例為6. 3%，通氣比為I. 2VAV分鐘），28°C培養(yǎng)48小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心 得到濕酵母細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0027] 生物催化轉(zhuǎn)化：IOL底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為6. 0,加入 底物3-苯并呋喃酮，使?jié)舛葹?2g/L，麥芽浸膏22g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚 17g/L，木糖22g/L、蔗糖26g/L、麥芽糖38g/L、異丙醇9. 5%V/V(體積濃度），121°C高壓滅菌 30分鐘；冷卻至28°C時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?7g/L，通氣比為0. 16V/ (V分鐘），進(jìn)行 生物催化反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為77小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出 乙酸乙酯，得到產(chǎn)物（S)-3-苯并呋喃醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98. 5%，產(chǎn)品收率96. 5%，對映體過 量率99 %。
[0028] 實(shí)施例4 種子培養(yǎng)基成份為：酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，pH6.4;配制 固體培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0029] 培養(yǎng)液成份為：葡萄糖42g/L，木糖8g/L，玉米胚芽粉12g/L，酵母提取物5g/ L,(NH4) 2H PO4 15g/L,KH2PO4 7.5g/L.MgSO4 .7H20 0.75g/L,NaCl 0.1g/L; pH6.4〇
[0030] 濕酵母細(xì)胞制備過程如下：釀酒酵母ATCC3666經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到種子液。 IOL發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至29°C，將釀酒酵母種子液接種至發(fā) 酵罐，接種比例為6. 5%，通氣比為I. 18V/ (V分鐘），29°C培養(yǎng)45小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離 心得到濕酵母細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0031] 生物催化轉(zhuǎn)化：20L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為6. 0,加入 底物3-苯并呋喃酮，使?jié)舛葹?4g/L，麥芽浸膏22g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚 18g/L，木糖23g/L、蔗糖27g/L、麥芽糖39g/L、異丙醇9%V/V(體積濃度），121°C高壓滅菌30 分鐘；冷卻至29°C時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?8g/L，通氣比為0. 15V/ (V分鐘)，進(jìn)行生 物催化反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為78小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙 酸乙酯，得到產(chǎn)物（S)-3-苯并呋喃醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率99%，產(chǎn)品收率96. 5%，對映體過量率 99%〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種釀酒酵母細(xì)胞生物催化制備（S) -3-苯并呋喃醇的方法，其特征在于反應(yīng)罐中 加入磷酸鹽緩沖液，pH為6. 0,加入3-苯并呋喃酮，使3-苯并呋喃酮添加量為80-90 g/ L，麥芽浸膏22-26 g，支鏈化13碳格爾伯特醇聚氧乙烯醚17-18g/L，木糖20-24g/L、蔗糖 25-28g/L、麥芽糖36-40g/L、異丙醇8-10%V/V，121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至28-29°C 時(shí)，加入濕酵母細(xì)胞使?jié)舛葹?5-79g/L，通氣比為0. 15-0. 16V/ (V分鐘），進(jìn)行生物催化 反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為77-81小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙 酯，得到產(chǎn)物（S) -3-苯并呋喃醇，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98-99%，產(chǎn)品收率96-97%，對映體過量率 98.5-99 %〇2. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于濕酵母細(xì)胞制備過程如下：釀酒酵母ATCC 3666,經(jīng)斜面、搖瓶、種子罐培養(yǎng)得到種子液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分 鐘，冷卻至28-29°C，將釀酒酵母種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為6-6. 5 %，通氣比為 1. 1-1. 3V/ (V分鐘），28-29°C培養(yǎng)44-48小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心得到濕酵母細(xì)胞，用作 生物催化反應(yīng)催化劑；發(fā)酵罐中培養(yǎng)液成份為：蛋白胨1. 5-2 g/L，酵母浸膏8-10 g/L，葡 萄糖18-22 g/L，麥芽浸膏25-30 g，硫酸銨0? 2-0. 25g/L，硫酸鎂0? 3-0. 4g/L，磷酸二氧鉀 I. 8-2. 3g/L ; pH6. 4。
【專利摘要】一種釀酒酵母細(xì)胞生物催化制備(S)-3-苯并呋喃醇的方法，反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，用釀酒酵母細(xì)胞進(jìn)行生物催化反應(yīng)，產(chǎn)品收率高，對映體過量率高，解決了現(xiàn)有方法生產(chǎn)的困難。
【IPC分類】C12P17/04, C12R1/865
【公開號】CN105087705
【申請?zhí)枴緾N201510561106
【發(fā)明人】劉均洪, 王彩蕓
【申請人】青島科技大學(xué)
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年9月7日