下，緩慢加入2-氯甲基-5-羥基-4-吡喃 酮（I. 2 mmol)，攪拌10 min后移入80°C油浴鍋中回流4 h。TLC跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后， 加入200 ml的二氯甲烷溶液，將固體過濾，烘干得到棕褐色固體5-(3-氯苯基）-3-[5_羥 基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-(2-羥基苯甲氨基）-1，2, 4-三唑，產(chǎn)率：60%。
[0032] 1H NMR (DMS0-d6，500 ΜΗζ) δ : 3.97 (d，J = 5.0 Hz, 2H，N-CH2- )，4. 35 (s, 2H, S-CH2-), 6.41 (s, IH,-NH-), 6.61 (t, J = 7.0 Hz, 1H, PhH), 6.68 (d, J =8.0 Hz, 1H, PhH), 6.88 (d, J = 7. 5 Hz, 1H, PhH), 6.96 (t, J = 4. 5 Hz, 1H, PhH), 7.01 (s, 1H, pyrone-H), 7.47 (t, J = 8.0 Hz, 1H, PhH), 7.52 (d, J = 8. 5 Hz, 1H, PhH), 7.90 (d, J = 7. 5 Hz, 1H, PhH), 7.98 (s, 1H, PhH), 8.05 (s, 1H, pyrone-H), 9.15 (s, 1H, -OH), 9.47 (s, 1H, -OH); 13C NMR (DMS〇-d6, 125 MHz) δ： 174.12, 163.66, 156.35, 152.90, 152.05, 146.31, 140.30, 133.66, 131.25, 130.75, 129.00, 127.33, 126.44, 122.03, 119.09, 115.39, 113.35, 49.52, 46.13, 33.35, 9.07; IR (KBr) v: 3421, 3103, 1634, 1600, 1456, 1266, 1219, 1163, 1110, 947，782，859，750，720 cm1; ESI MS m/z: 457 (M+H)+。
[0033] 實(shí)施例9 :5-(4-氯苯基）-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-(2-羥基苯 甲氨基）_1，2, 4-三唑的合成。
[0034] 先將2-羥基苯甲醛（2.0 mmol)和5-(4-氯苯基）-3-巰基-4-氨基-1,2, 4-三 P坐（2.2 mmol)溶于5 ml無(wú)水乙醇中，加入對(duì)甲苯磺酸（0.4 mmol)，在溫度為80°C回流。 TLC跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻到室溫，加入約50 ml蒸餾水，有棕黃色固體析出。過濾，濾 渣用蒸餾水洗滌2~3次，烘干得到希夫堿5-(4-氯苯基）-4-(2-羥基苯亞甲氨基）-3-巰 基-1，2, 4-三唑；稱取上述希夫堿（1.5 mmol)放入反應(yīng)瓶中，用適量的甲醇溶解，在冰浴 條件下分批加入NaBH4 (2.0 mmol)，加完后，在冰浴下繼續(xù)反應(yīng)約6 min。TLC跟蹤反應(yīng)，反 應(yīng)結(jié)束后，加入約50 ml蒸餾水，有固體析出，過濾得還原產(chǎn)物5-(4-氯苯基）-4-(2-羥基 苯甲氨基）-3_巰基_1，2, 4-三唑；再稱取此還原產(chǎn)物（1.0 mmol)和三乙胺（0.3 mmol)加 入到反應(yīng)瓶中，然后加入5 ml DMF溶劑，在室溫下，緩慢加入2-氯甲基-5-羥基-4-吡喃 酮（1.2 mmol)，攪拌10 min后移入80°C油浴鍋中回流4 h。TLC跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后， 加入200 ml的二氯甲烷溶液，將固體過濾，烘干得到棕褐色固體5-(4-氯苯基）-3-[5_羥 基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-(2-羥基苯甲氨基）-1，2, 4-三唑，產(chǎn)率：62%。
[0035] 1H NMR (DMS0-d6，500 ΜΗζ) δ ： 3. 96 (d, J=5. 0 Hz, 2H, N-CH2- ), 4. 34 (s, 2H, S-CH2), 6. 40 (s, 1H, -NH-), 6. 62 (t, J = 7. 5 Hz, 1H, PhH), 6. 67 (d, J = 7. 5 Hz, 1H, PhH), 6.90 (m, 2H, PhH), 7.02 (s, 1H, pyrone-H), 7.98 (d, J = 8. 5 Hz, 2H, PhH), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 2H, PhH), 8.04 (s, 1H, pyrone-H), 9.13 (s, 1H, -OH), 9.48 (s, 1H, -OH); 13CNMR (DMS〇-d6, 125 MHz) δ： 33.38, 49.60, 113.33, 115.42, 119.13, 122.11, 126.01, 128.95, 129.52, 129.61, 131.24, 134.97, 140.27, 146.30, 151.88，153.20, 156.30, 163.69, 174.11; IR (KBr) k: 3262， 3166， 2940， 1634， 1596， 1497， 1460， 1387， 1344， 1288， 1220， 1164， 1132， 1093， 949，861，830，751，729，693 cm1; ESI MS m/z: 479 (M+Na)+。
[0036] 下面通過合成實(shí)驗(yàn)實(shí)例及活性實(shí)驗(yàn)實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
[0037] 將一定量活力為6680 U/mg的酪氨酸酶溶于ρΗ=6· 8的0· I M的磷酸鹽緩沖溶液 中，加入不同濃度的化合物振蕩約一分鐘后，于30°C下恒溫20分鐘，加入底物L(fēng)-3, 4-二羥 基苯丙氨酸（L-DOPA)，即在890 μL的磷酸鹽緩沖液中加入20 μL不同濃度的樣品，10 μL 酪氨酸酶溶液，80 μL底物L(fēng)-3, 4-二羥基苯丙氨酸（L-DOPA)?；旌暇鶆蚝鬁y(cè)試λ =475 nm 處OD475時(shí)間進(jìn)程曲線，由曲線計(jì)算酶活性：酶的相對(duì)活性=K/K。*100% . 利用專業(yè)數(shù)據(jù)處理軟件Microcal Origin Professional處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以反應(yīng)進(jìn)程線 的直線斜率為反應(yīng)速度，將該反應(yīng)抑制率設(shè)為縱坐標(biāo)，以抑制劑濃度為橫坐標(biāo)作圖，可得到 的抑制劑對(duì)酪氨酸酶的抑制IC5。值，K。為不加抑制劑時(shí)的反應(yīng)進(jìn)程線的直線斜率。測(cè)試結(jié) 果見表1。
[0038]
從表1可以看出，5-取代-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-羥基苯甲氨 基-1，2, 4-三唑類衍生物對(duì)酪氨酸酶均具有很好的抑制活性，它們的IC5。值均小于陽(yáng)性對(duì) 照物曲酸（IC5Q=20 μM)。其中5-苯基-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基甲硫基]-4-[2, 4-二 羥基苯甲氨基]-1，2, 4-三唑?qū)野彼崦傅幕钚砸种菩Ч詈茫銲C5。值為1. 3 μ Μ，該值遠(yuǎn) 低于曲酸的IC5。值20 μ Μ。同時(shí)從整個(gè)結(jié)果來(lái)看1，2, 4-三唑環(huán)上5-位取代基為芳環(huán)時(shí)抑 制效果明顯好于烷基。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種通式（I)所示的5-取代-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-羥基苯 甲氨基-1，2, 4-三唑類化合物，式（I)中，取代基札是 H、-CH 3、-CH2CH3、C6H5-、 2-CH3C6H4-、3-CH 3C6H4-、4-CH3C6H 4-、 4-CH30C6H4-、2-ClC6H 4-、3-ClC6H4-和 4-ClC6H4-;R2是 2-OH、3-OH、4-OH、2,3-di-OH、 2, 4_di_0H 和 3, 4_di_0H。2. 如權(quán)利要求1所述的5-取代-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-羥基苯 甲氨基-1，2, 4-三唑類化合物中的一種或多種在制備抑制黑色素生成或美白化妝品方面 的用途。3. 如權(quán)利要求1或2所述的5-取代-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-羥 基苯甲氨基-1，2, 4-三唑類化合物中的一種或多種在制備抑制黑色素生成或美白藥品方 面的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供一類如式（I）所示的新型的5-取代-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-羥基苯甲氨基-1,2,4-三唑類化合物，式（I）中，取代基R1是H、-CH3、-CH2CH3、C6H5-、2-CH3C6H4-、3-CH3C6H4-、4-CH3C6H4-、4-CH3OC6H4-、2-ClC6H4-、3-ClC6H4-和4-ClC6H4-；R2是2-OH、3-OH、4-OH、2,3-di-OH、2,4-di-OH和3,4-di-OH。本發(fā)明的5-取代-3-[5-羥基-4-吡喃酮-2-基-甲硫基]-4-羥基苯甲氨基-1,2,4-三唑類化合物對(duì)酪氨酸酶具有一定的抑制活性，并且其合成方法簡(jiǎn)單，材料易得?？捎糜谥谱饕种坪谏厣苫蛎腊椎幕瘖y品或藥品。
【IPC分類】A61K8/49, A61K31/4196, C07D405/12, A61Q19/02, A61P17/00
【公開號(hào)】CN105061408
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510414130
【發(fā)明人】謝文林, 張金改, 余秋艷, 何晶晶, 李芯蕊, 駱春香, 李尚儒, 柳建斌
【申請(qǐng)人】湖南科技大學(xué)
【公開日】2015年11月18日
【申請(qǐng)日】2015年7月15日