一種全人源抗her3抗體及含有該抗體的組合物和其用于制備治療her3相關(guān)疾病的藥物中 ...的制作方法
【專利說(shuō)明】一種全人源抗HER3抗體及含有該抗體的組合物和其用于 制備治療HER3相關(guān)疾病的藥物中的用途
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及基因工程抗體領(lǐng)域，具體涉及與表皮生長(zhǎng)因子HER3特異性結(jié)合的基 因工程抗體和其用于制備治療HER3相關(guān)疾病的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0003] HER3 又稱 ErbB3、LCCS2、ErbB-3、c-erbB3、erbB3-S、MDA-BF-1、c-erbB-3、 pl8〇-ErbB3、p45-sErbB3、p85-sErbB3,是酪氨酸激酶表皮生長(zhǎng)因子家族成員之一，大小為 161kDa。人HER3基因定位于染色體12ql3。該家族由4個(gè)成員組成，除HER3外，還有EGFR、 HER2、HER4。各成員均由三個(gè)部分構(gòu)成，分別是胞外區(qū)配體結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)激酶區(qū)。 HER3的胞外區(qū)有神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合位點(diǎn)但胞內(nèi)沒(méi)有激酶活性。因此，必須與該家族其他成 員形成異源二聚體后才能激活MAPK、PI3K-Akt通路。
[0004] 基于HER家族成員EGFR和HER2靶點(diǎn)的多腫瘤基因治療的重要性已毋庸置疑?，F(xiàn) 已確認(rèn)，EGFR家族在乳腺癌、肺癌、頭頸癌等癌癥的發(fā)病機(jī)制中正是依賴于各家族成員的 相互作用。其中，EGFR/HER3、HER2/HER3異源二聚體的形成，在多種癌癥發(fā)病機(jī)制和基于 EGFR、HER2的抗體治療策略中產(chǎn)生耐藥耐藥機(jī)制中的發(fā)揮重要作用。
[0005] HER3高表達(dá)的腫瘤類型：1)HER3在HER2介導(dǎo)的乳腺腫瘤中高表達(dá)。在HER2高 表達(dá)腫瘤中敲低HER3表達(dá)后會(huì)引起腫瘤縮減，與敲低HER2效果一致，而在該腫瘤模型中敲 低EGFR則不引起腫瘤的消減，此外臨床標(biāo)本檢測(cè)表明，在HER2高表達(dá)乳腺癌標(biāo)本中，HER3 高表達(dá)與HER2的高表達(dá)具有高度一致性，而EGFR與HER2的表達(dá)無(wú)此相關(guān)性，上述研宄均 強(qiáng)調(diào)了 HER3在HER2致癌機(jī)制中的獨(dú)特的、關(guān)鍵作用。2)HER3在黑色素瘤中高表達(dá)。HER2 在黑色素瘤中低表達(dá)，但是HER3可能作為EGFR和/或HER4的協(xié)同作用分子，在黑色素瘤 中顯著高表達(dá)，且與疾病的惡性程度和預(yù)后差相關(guān)。3)HER3在肺癌中的高表達(dá)的發(fā)生率 是18%-100%，尤其是對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI)吉 非替尼（gefitinib)治療耐藥的非小細(xì)胞肺癌（non-small lung cell lung carcinomas， NSCLC)中，與治療敏感的NSCLC比較，其HER3高表達(dá)率為100%，此外，在NSCLC患者中， HER3高表達(dá)與其腦轉(zhuǎn)移、生存期短具有顯著相關(guān)性。4)HER3在兒童骨肉瘤中顯著高表達(dá)和 某些類型的前列腺癌、結(jié)腸癌和卵巢癌中高表達(dá)（表達(dá)率在10-90%之間），但其在上述腫 瘤中的高表達(dá)的類型還未獲得規(guī)律性結(jié)果，雖然其參與機(jī)制尚未闡明，但是可以確定HER3 的尚表達(dá)與尚轉(zhuǎn)移、預(yù)后差相關(guān)。
[0006] 目前，國(guó)內(nèi)外已有多家公司以HER3為靶點(diǎn)著手研發(fā)抗癌藥物，如U3Phaima GmbH 公司研發(fā)的全人源單克隆抗體AMG888已處于臨床研宄階段，而默克公司周痩研發(fā)的全人 源單克隆抗體MM-121以及雙特異性抗體MM-Ill已處于臨床1-2期。特別是針對(duì)HER3這 種激酶區(qū)活性缺失的位點(diǎn)，不能作為小分子抑制劑型藥物的作用靶點(diǎn)，因此只能針對(duì)其研 發(fā)抗體類藥物或基因藥物。同時(shí)，基于HER3在多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展、耐藥及預(yù)后中扮演著 非常重要的角色，因而以其為靶點(diǎn)的抗體類藥物將會(huì)在HER3相關(guān)癌癥的治療、研宄中發(fā)揮 重要作用，這也是目前亟待解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種對(duì)HER3有抑制活性的全人源的單克隆抗體。本發(fā)明的 另一目的在于提供一種含有該抗體的藥物組合物或試劑、試劑盒或芯片。本發(fā)明的目的還 在于提供抗HER3抗體用于制備治療HER3相關(guān)疾病的藥物中的用途。
[0008] 本發(fā)明所述"抗體"應(yīng)該解釋為涵蓋具有所需特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任意特異性 結(jié)合因子。因而，這個(gè)術(shù)語(yǔ)涵蓋了與之同源的抗體片段、衍生物以及抗體的功能等同物和同 源物，也包括含有抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽，無(wú)論是天然的還是合成產(chǎn)生的。抗體的實(shí)例 是免疫球蛋白亞型（如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亞型亞類；也可以是包含抗原結(jié)合 結(jié)構(gòu)域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb或Fd,或者雙鏈抗體。融合至另一多肽的、包含抗原結(jié) 合結(jié)構(gòu)域的嵌合體分子或者等同物也包括在其中。
[0009] 本發(fā)明所述單克隆抗體可以是，例如單價(jià)的或單鏈抗體、雙鏈抗體、嵌合抗體以及 上述抗體的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗體片段和含有抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何 多肽。
[0010] 抗體可以通過(guò)許多方式修飾，可用DNA重組技術(shù)來(lái)產(chǎn)生保留原來(lái)抗原特異性的其 他抗體或嵌合分子。這種技術(shù)可以包括將編碼抗體的免疫球蛋白可變區(qū)或互補(bǔ)性決定區(qū) (CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定區(qū)或恒定區(qū)加框架區(qū)。還可以對(duì)表達(dá)抗體的細(xì)胞 進(jìn)行遺傳突變或其它改變，這可以改變或者不改變所產(chǎn)生抗體的結(jié)合特異性。
[0011] 本發(fā)明所述單克隆抗體除了重鏈和輕鏈中的高度可變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3和鏈 接序列外，其它為框架區(qū)?？蚣軈^(qū)可在結(jié)合所需的三維結(jié)構(gòu)不受影響的條件下倍其他序列 置換，抗體特異性的分子基礎(chǔ)主要來(lái)源于它的高變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3。這些區(qū)域是與 抗原結(jié)合的關(guān)鍵部位。為維持優(yōu)選的結(jié)合特性，CDR的序列應(yīng)盡可能保留，然而，可能需要 一些氨基酸改變使結(jié)合特性最優(yōu)化，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以用標(biāo)準(zhǔn)做法來(lái)達(dá)到此目的。
[0012] 本發(fā)明提供了一種單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)含有氨基酸序列如SEQ ID NO:7、 SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9所示的CDR1、CDR2、CDR3,其輕鏈可變區(qū)含有氨基酸序列如SEQ ID N0:10、SEQ ID NO:ll、SEQ ID 勵(lì)：12所示的0?1、0)1?2、0)1?3。
[0013] 可變區(qū)⑶R的變體與上述⑶R區(qū)可以有至多6個(gè)氨基酸殘基（例如，1、2、3、4或5 個(gè)氨基酸取代）的取代，在具有CDR變體的單克隆抗體中，CDR區(qū)變體具有與HER3結(jié)合活 性。
[0014] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)具有如SEQ ID N0:4所 示的氨基酸序列，或該重鏈可變區(qū)的氨基酸序列經(jīng)過(guò)取代、缺失、或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸 衍生的與SEQ ID N0:4至少有95%的一致性，且所述單克隆抗體具有特異性結(jié)合HER3的活 性。
[0015] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，編碼所述重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1所示。
[0016] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)具有如SEQ ID N0:5所 示的氨基酸序列，或該輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列經(jīng)過(guò)取代、缺失、或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸 衍生的與SEQ ID N0:5至少有95%的一致性，且所述單克隆抗體具有特異性結(jié)合HER3的活 性。
[0017] 在一個(gè)具體實(shí)施方案中，編碼所述輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述單克隆抗體的重鏈氨基酸序列如SEQ ID NO: 15 所示，或其重鏈的氨基酸序列經(jīng)過(guò)取代、缺失、或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸衍生的與SEQ ID NO: 15至少有95%的一致性，且所述單克隆抗體具有特異性結(jié)合HER3的活性。
[0019] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述單克隆抗體的輕鏈氨基酸序列如SEQ ID NO: 16 所示，或其輕鏈的氨基酸序列經(jīng)過(guò)取代、缺失、或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸衍生的與SEQ ID NO: 16至少有95%的一致性，且所述單克隆抗體具有特異性結(jié)合HER3的活性。
[0020] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的單克隆抗體是一種單鏈抗體，其重鏈可變