甲基苯丙胺核酸適體、檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域和刑事鑒定技術(shù)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明提供了甲基苯丙 胺核酸適體、檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用，尤其在毒物檢測(cè)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 毒品已經(jīng)成為愈來(lái)愈嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題。針對(duì)緝毒工作的實(shí)際需求，需要開(kāi)發(fā)靈敏 度高、選擇性好、便攜式、能耗低、易操作的毒品快速檢測(cè)技術(shù)，以便能夠在現(xiàn)場(chǎng)實(shí)現(xiàn)靈敏、 快速的檢測(cè)。
[0003]目前國(guó)內(nèi)外正對(duì)吸毒人員快速現(xiàn)場(chǎng)篩查和液體中毒品檢測(cè)的主要技術(shù)是各種基 于免疫反應(yīng)的產(chǎn)品，主要有酶免疫分析和免疫膠體金技術(shù)。
[0004]酶免疫分析涉及酶反應(yīng)，檢測(cè)步驟繁瑣，穩(wěn)定性差。
[0005]免疫膠體金技術(shù)雖然檢測(cè)簡(jiǎn)便，快速，但靈敏度低、誤判率較高，往往只能進(jìn)行定 性測(cè)試。此外，受制于抗體的特性，質(zhì)量控制難度較大，即使是同一批生產(chǎn)的試劑，也很難保 證每個(gè)試劑的同一性。
[0006] 甲基苯丙胺（methamphetamine，MA)俗稱(chēng)冰毒，是一種依賴性極高的精神活性物 質(zhì)，是國(guó)家嚴(yán)控的一類(lèi)精神藥品和麻醉藥品。目前，國(guó)際上苯丙胺類(lèi)物質(zhì)的濫用呈不斷上升 趨勢(shì)。專(zhuān)家們預(yù)測(cè)，苯丙胺類(lèi)興奮劑將成為21世紀(jì)最廣泛濫用的藥物之一。
[0007] 隨著與甲基苯丙胺相關(guān)的刑事案件逐年上升和國(guó)家對(duì)甲基苯丙胺管理的日趨嚴(yán) 格，本領(lǐng)域?qū)谆奖泛蜑E用毒品者生物標(biāo)本中甲基苯丙胺的檢測(cè)提出了更高的要求。
[0008]目前，甲基苯丙胺的檢測(cè)主要是基于色譜分析方法，例如氣質(zhì)聯(lián)用色譜分析 (GC-MS)和高效液相色譜分析（HPLC)。這些色譜方法具有很好的靈敏度和特異性，但操作 繁瑣，需要昂貴的儀器設(shè)備，且耗時(shí)長(zhǎng)。
[0009] 特定的結(jié)合反應(yīng)，例如抗原-抗體反應(yīng)，已經(jīng)廣泛用于檢測(cè)生物樣品中存在的各 種物質(zhì)的免疫測(cè)試中。其中，膠體金免疫層析技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種獨(dú)特的免疫診 斷技術(shù)，具有免疫反應(yīng)和色譜層析的特定，與GC-MS比較，膠體金層析技術(shù)具有特異性強(qiáng)、 靈敏度高、簡(jiǎn)單快速、易于操作、結(jié)果容易判讀、無(wú)需任何儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)。
[0010] 相對(duì)于抗體，適體近年來(lái)成為關(guān)注的焦點(diǎn)。適體（aptamer)是一類(lèi)功能性生物分 子。目前，大多數(shù)適體是從至少約1〇14個(gè)隨機(jī)序列的DNA或RNA庫(kù)中，通過(guò)指數(shù)富集的系 統(tǒng)分子進(jìn)化方法（SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment，簡(jiǎn)稱(chēng) SELEX)篩選出來(lái)的。
[0011] 適體能夠特異性地與靶標(biāo)分子結(jié)合，從而特異性地識(shí)別靶標(biāo)分子。理論上，適體可 用于各自不同物質(zhì)的檢測(cè)，其中包括蛋白質(zhì)、小分子、重金屬離子、細(xì)胞和病毒，因此具有極 大的應(yīng)用前景。
[0012] 綜上所述，目前甲基苯丙胺的檢測(cè)技術(shù)尚難以令人滿意，因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi) 發(fā)新的可現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)甲基苯丙胺的技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的即在于提供一種可靠方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉、快速靈敏的甲基苯 丙胺檢測(cè)技術(shù)、相關(guān)物質(zhì)及其應(yīng)用。
[0014] 在本發(fā)明第一方面，提供了一種核酸適體，所述的適體特異性結(jié)合于甲基苯丙胺。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的特異性結(jié)合指所述適體結(jié)合于甲基苯丙胺但不結(jié)合于以 下任何一種物質(zhì)：苯丙胺、可卡因、嗎啡、可待因、海洛因、福爾可定、單乙酰嗎啡、二氫可待 因、二氫埃托菲、雷米替丁、哌替啶、芬太尼、曲馬多、右丙氧芬、納洛酮、納曲酮、烯丙嗎啡、 可樂(lè)寧、洛非西丁、東莨菪堿、益安口服液、正通寧片、撲熱息痛、阿斯匹林、布洛芬、阿米替 林、丙米嗪、氯丙嗪、異丙嗪、水合氯醛、安定、三唑侖、阿普唑侖、苯巴比妥、速可眠、異戊巴 比妥、咖啡因、氟哌酸、先鋒IV、黃連素、乳糖、普魯卡因、康復(fù)新膠囊、水合氯醒、奧復(fù)沙星、 非那西丁、去痛片、氯胺酮、去甲基氯胺酮、美沙酮、度冷丁、麻黃素、左旋麻黃素、右旋麻黃 素、蒂巴因、四氫大麻酚、利多卡因、那可丁、丁丙諾啡、苯丙醇胺和苯乙胺。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體是通過(guò)SELEX技術(shù)，從ssDNA文庫(kù)中篩選獲得的單鏈 核酸分子。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體包括DNA、RNA、或DNA/RNA雜合分子。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體的長(zhǎng)度為30-100個(gè)堿基。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體為單鏈或雙鏈。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體帶有可檢測(cè)標(biāo)記物。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體是分離的或純化的。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體的純度彡90%，較佳地彡95%，更佳地彡99%。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體的序列如SEQIDN0. : 1、2、3、4或5所示。
[0024] 在本發(fā)明的第二方面，提供了一種偶聯(lián)物，所述偶聯(lián)物包括本發(fā)明第一方面所述 的核酸適體以及與所述核酸適體相連的可檢測(cè)標(biāo)記物。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測(cè)標(biāo)記物包括生物素、化學(xué)發(fā)光基團(tuán)、化學(xué)熒光基 團(tuán)、熒光蛋白、酶、膠體金、放射性同位素、乳膠顆粒、抗體、配體、抗原、受體、或其組合。
[0026] 在本發(fā)明的第三方面，提供了一種復(fù)合物，所述的復(fù)合物是（a)本發(fā)明第一方面 所述的核酸適體或本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物與（b)甲基苯丙胺所形成的復(fù)合物。
[0027] 在本發(fā)明的第四方面，提供了一種檢測(cè)制品，所述檢測(cè)制品含有本發(fā)明第一方面 所述的核酸適體或本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)制品包括：檢測(cè)試劑、側(cè)流片、芯片、測(cè)試條、檢測(cè)板。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)制品用于檢測(cè)甲基苯丙胺。
[0030] 在本發(fā)明的第五方面，提供了一種檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒包含本發(fā)明第一 方面所述的核酸適體，本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物和/或本發(fā)明第四方面所述的檢測(cè)制 品。
[0031] 在本發(fā)明的第六方面，提供了如本發(fā)明第一方面所述的核酸適體或本發(fā)明第二方 面所述偶聯(lián)物的用途，用于制備檢測(cè)甲基苯丙胺的檢測(cè)制品或試劑盒。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)制品包括：檢測(cè)試劑、側(cè)流片、芯片、測(cè)試條、檢測(cè)板。
[0033] 在本發(fā)明的第七方面，提供了一種檢測(cè)甲基苯丙胺的方法，包括以下步驟：
[0034] (a)提供待檢測(cè)的樣品；
[0035] (b)將該樣品與本發(fā)明第一方面所述的核酸適體或本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物 混合，形成混合物；
[0036] (c)檢測(cè)所述混合物中"甲基苯丙胺-核酸適體復(fù)合物"的存在與否，其中如果存 在所述復(fù)合物，則表明所述樣品中存在甲基苯丙胺；如果不存在所述復(fù)合物，則表明所述樣 品中不存在甲基苯丙胺。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)包括定性檢測(cè)和定量檢測(cè)。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，在步驟（c)中，包括與標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而確定在 所述混合物中是否存在復(fù)合物，和/或所述復(fù)合物的數(shù)量。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述方法用于毒品檢測(cè)、藥物檢測(cè)或食品安全檢測(cè)，更優(yōu)選的， 所述方法用于毒品檢測(cè)。
[0040] 在本發(fā)明的第八方面，提供了 一種核酸序列，所述核酸序列是序列如SEQID NO. : 1-5所示序列的反義序列。
[0041] 在本發(fā)明的第九方面，提供了一種組合物，所述的組合物含有（i)載體以及（ii) 本發(fā)明第一方面所述的核酸適體、本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物。
[0042] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中