本發(fā)明涉及植物有效成分提取，具體屬于一種從黑豆皮中制備高純度表兒茶素的方法。

背景技術(shù)：

表兒茶素(-epicatechin)是原花青素(proanthocyanidin)的一種，為3-羥基黃烷醇衍生物，具有c6-c3-c6結(jié)構(gòu)的多元酚類物質(zhì)，其基本結(jié)構(gòu)是α-苯基苯并吡喃，即在兩個苯環(huán)之間以一個三碳鏈相連，其中一個碳原子與a環(huán)上的氧原子連接成吡喃環(huán)?，F(xiàn)已證實，兒茶素類物質(zhì)具有多種對健康有益的功效，包括清除自由基、抗氧化、抗癌、抗炎、抗菌、防紫外線、預(yù)防心血管疾病等。因此，兒茶素類被視為開發(fā)功能食品和植物性醫(yī)藥的理想天然產(chǎn)物。[peng,han,etal.journaloffunctionalfoods(2017),32,296-312.]

黑豆亦稱馬豆、冬豆子、稆豆，大多數(shù)黑豆籽粒較小，俗稱小黑豆。黑豆的籽粒多扁橢圓、扁圓、腎狀、長橢圓形，圓粒較少。我國的黑豆種質(zhì)資源異常豐富，據(jù)統(tǒng)計，全國共搜集保存大豆22000多份，其中黑豆栽培品種就有2800余種，占全部大豆種質(zhì)資源的13.2％，廣泛分布在個27個省、市，尤以山西、河北、陜西栽培較多，其中以北京春大豆、黃淮夏大豆最為常見。目前為止，黑豆皮的具體化學(xué)成分報道，主要集中在花青素方面，而對于原花青素的研究較少。[jinhwanlee,etal.foodchemistry.2009,112(1),226-231.]。對于以黑豆皮為原料制備表兒茶素的方法沒有報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了提供一種從黑豆皮中快速、高效提取表兒茶素的方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種從黑豆皮中提取表兒茶素的方法，包括以下步驟：

取黑豆皮，粉碎，過40-60目篩；按1g/10-50ml比例放入50-70％丙酮水溶液中，調(diào)節(jié)ph2.0，浸提3-5h，將提取液用濾紙過濾，得濾液；將濾液減壓濃縮，得粗提物；粗提物濕法上柱，上樣量40-60mg粗提物/g樹脂；首先用雙蒸水洗脫至無渾濁液流出，流速≦4ml/min且ph值穩(wěn)定在6-8，再用洗脫劑60％乙醇水溶液洗脫至流出液無色且ph在5-7，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，冷凍干燥得粗提樣；粗提樣濕法上sephadexlh-20柱，依次用25％、50％、60％、70％、80％、90％甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，用量均為三倍柱體積，流速均為50d/min；收集25％甲醇水溶液洗脫液作為洗脫液ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脫液(在280nm處有吸收而在360nm處無吸收的洗脫液部分)作為洗脫液ⅱ；合并洗脫液ⅰ和洗脫液ⅱ進(jìn)行濃縮，回收甲醇，得黑豆皮表兒茶素。

所述黑豆皮和丙酮水溶液的比例優(yōu)選為1g/10-40ml。

所述的ph調(diào)節(jié)劑優(yōu)選為醋酸。

所述的提取時間優(yōu)選為3h。

本發(fā)明從黑豆皮中提取表兒茶素的方法，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明以黑豆皮為原料分離制備原兒茶素，不僅可以增加黑豆產(chǎn)業(yè)的附加值，帶來經(jīng)濟(jì)效益，還可以使資源得到充分利用。

2.本發(fā)明采用sephadexlh-20為柱填料分離制備表兒茶素，效率高，并能保持其原有結(jié)構(gòu)和活性，所得到的表兒茶素純度高，溶劑可重復(fù)利用，避免污染和浪費(fèi)。

具體實施方式

實施例1從黑豆皮中提取表兒茶素：

將10g山西省烏皮青仁黑豆皮，粉碎，過60目篩。按1g/10ml比例放入70％丙酮中，用醋酸調(diào)節(jié)ph2.0,浸提3h，將提取液用濾紙過濾，將濾渣重復(fù)上述操作，浸提2次(即以濾渣代表黑豆皮進(jìn)行如上操作)，合并3次所得濾液，將濾液減壓濃縮，得粗提物。上樣量50mg粗提物/g樹脂，柱型2.5cm×50cm，濕法上柱。首先用雙蒸水洗脫直至無渾濁液流出，流速≦4ml/min且ph值穩(wěn)定在7左右，再用洗脫劑60％乙醇洗脫至流出液無色ph在6左右，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，冷凍干燥得粗提樣。選用體積為1.5cm×30cm的sephadexlh-20柱體，濕法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液進(jìn)行洗脫，用量均分別為三倍柱體積(即分別為180ml)；流速均為50d/min，收集25％甲醇全部洗脫液為洗脫液ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脫液(在280nm處有吸收而在360nm處無吸收的洗脫液部分)作為洗脫液ⅱ。合并洗脫液ⅰ和洗脫液ⅱ進(jìn)行濃縮，回收甲醇，得黑豆皮表兒茶素0.39g。上述黑豆皮表兒茶素經(jīng)高效液相色譜法檢測，純度為＞95％。

實施例2從黑豆皮中提取表兒茶素：

將50g山東省亮皮青仁黑豆皮，精選去雜，處理后粉碎過40目篩。按1g/40ml比例放入70％丙酮中，用醋酸調(diào)節(jié)ph2.0,浸提3h，將提取液用濾紙過濾，將濾渣重復(fù)上述操作，浸提2次(即以濾渣代表黑豆皮進(jìn)行如上操作)，合并3次所得濾液，將濾液減壓濃縮，得粗提物。上樣量50mg粗提物/g樹脂，柱型4cm×50cm，濕法上柱。首先用雙蒸水洗脫直至無渾濁液流出，流速≦4ml/min且ph值穩(wěn)定在7左右，再用洗脫劑60％乙醇洗脫至流出液無色ph在6左右，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，冷凍干燥得粗提樣。選用體積為3cm×30cm的sephadexlh-20柱體，濕法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液進(jìn)行洗脫，用量均分別為三倍柱體積(即分別為360ml)；流速均為60d/min，收集25％甲醇全部洗脫液為洗脫液ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脫液(在280nm處有吸收而在360nm處無吸收的洗脫液部分)作為洗脫液ⅱ。合并洗脫液ⅰ和洗脫液ⅱ進(jìn)行濃縮，回收甲醇，得黑豆皮表兒茶素1.26g。上述黑豆皮表兒茶素經(jīng)高效液相色譜法檢測，純度為＞95％。

實施例3從黑豆皮中提取表兒茶素：

將10g山西省烏皮青仁黑豆皮，精選去雜，處理后粉碎過60目篩。按1g/10ml比例放入50％丙酮中，用醋酸調(diào)節(jié)ph2.0,浸提3h，將提取液用濾紙過濾，將濾渣重復(fù)上述操作，浸提2次(即以濾渣代表黑豆皮進(jìn)行如上操作)，合并3次所得濾液，將濾液減壓濃縮，得粗提物。上樣量50mg粗提物/g樹脂，柱型2.5cm×50cm，濕法上柱。首先用雙蒸水洗脫直至無渾濁液流出，流速≦4ml/min且ph值穩(wěn)定在7左右，再用洗脫劑60％乙醇洗脫至流出液無色ph在6左右，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，冷凍干燥得粗提樣。選用體積為1.5cm×30cm的sephadexlh-20柱體，濕法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液進(jìn)行洗脫，用量均分別為三倍柱體積(即分別為180ml)；流速均為50d/min，收集25％甲醇全部洗脫液為洗脫液ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脫液(在280nm處有吸收而在360nm處無吸收的洗脫液部分)作為洗脫液ⅱ。合并洗脫液ⅰ和洗脫液ⅱ進(jìn)行濃縮，回收甲醇，得黑豆皮表兒茶素0.48g。上述黑豆皮表兒茶素經(jīng)高效液相色譜法檢測，純度為＞92％。

實施例4從黑豆皮中提取表兒茶素：

將50g山東省亮皮青仁黑豆皮，精選去雜，處理后粉碎過40目篩。按1g/40ml比例放入70％丙酮中，用醋酸調(diào)節(jié)ph2.0,浸提3h，將提取液用濾紙過濾，將濾渣重復(fù)上述操作，浸提2次(即以濾渣代表黑豆皮進(jìn)行如上操作)，合并3次所得濾液，將濾液減壓濃縮，得粗提物。上樣量50mg粗提物/g樹脂，柱型4cm×50cm，濕法上柱。首先用雙蒸水洗脫直至無渾濁液流出，流速≦4ml/min且ph值穩(wěn)定在7左右，再用洗脫劑50％乙醇洗脫至流出液無色ph在6左右，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，冷凍干燥得粗提樣。選用體積為3cm×30cm的sephadexlh-20柱體，濕法上柱，依次用25％,50％,60％,70％,80％,90％甲醇溶液進(jìn)行洗脫，用量均分別為三倍柱體積(即分別為360ml)；流速均為60d/min，收集25％甲醇全部洗脫液為洗脫液ⅰ，收集50％甲醇水溶液后半部分洗脫液(在280nm處有吸收而在360nm處無吸收的洗脫液部分)作為洗脫液ⅱ。合并洗脫液ⅰ和洗脫液ⅱ進(jìn)行濃縮，回收甲醇，得黑豆皮表兒茶素1.88g。上述黑豆皮表兒茶素經(jīng)高效液相色譜法檢測，純度為＞90％。

以上所述，僅是本發(fā)明的部分較好實施例而已，并非對本發(fā)明做任何形式上的限制。