本發(fā)明屬于生物技術(shù)應用領域，具體地，涉及一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性最常見的癌癥，主要包括導管癌和小葉癌。2016年美國ca（acancerjournalforclinicians）公布的最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，美國2016年預計將有420840例女性患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的38%，居女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位，并且死亡人數(shù)將達52930例。更為嚴重的是全球的乳腺癌發(fā)病率正在逐年增長。

細胞培養(yǎng)基是生物與健康相關(guān)研究領域的一項重要技術(shù)。隨著生命科學的迅速發(fā)展，目前細胞培養(yǎng)已成為細胞生物學、分子生物學、遺傳學和免疫學等學科研究的重要基礎。為了深入探討細胞的生長活動規(guī)律、有關(guān)疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機制，開發(fā)具有不同針對性的細胞培養(yǎng)方法具有重要意義。

其中，mcf-7乳腺癌細胞作為人源性低轉(zhuǎn)移乳腺癌細胞，常用于乳腺癌原位生長、血管生成等乳腺癌的體內(nèi)外研究。此外，mcf-7乳腺癌細胞還會同其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細胞進行對比研究。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明提供了一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，用于多種人源以及非人源細胞的培養(yǎng)。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基吸盡，加入3-5mlpbs洗滌細胞2-3次，向細胞培養(yǎng)皿中加入1-2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃條件下消化3-5min，加入2-3ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍吹打細胞培養(yǎng)皿底40-50次；將液體移至細胞離心管中，在1000-1200g/min條件下離心3-5min，用移液槍去除上清液，加入2-3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍上下吹打細胞40-50次；平均加入到3-8個細胞培養(yǎng)皿中，進行擴大培養(yǎng)。本發(fā)明所述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，方法合理，應用方便，mcf-7細胞生長速度快，細胞狀態(tài)好，邊界清晰，鏡下觀察透亮、分裂相更多、形態(tài)及分散度佳，可以有利于乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細胞進行對比研究等的相關(guān)研究。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta?？梢耘c胰蛋白酶相配合，迅速使貼壁細胞脫離培養(yǎng)皿，減少胰蛋白酶對細胞的損傷。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括70-90%的基礎培養(yǎng)基以及10-30%的胎牛血清。mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，提供mcf-7乳腺癌細胞生長的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，胎牛血清可以進一步為培養(yǎng)的細胞提供營養(yǎng)物質(zhì)，同時還能終止胰蛋白酶的消化作用。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖80-90份、碳酸氫鈉10-20份、丙酮酸鈉8-18份、轉(zhuǎn)鐵蛋白2-10份、氯化鉀30-50份、無水硫酸鎂5-12份、氯化鈉60-80份、氯化鋰3-10份、無水磷酸二氫鈉8-16份、葉酸0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、煙酰胺0.2-0.8份、無水氯化鈣20-40份、硝酸鐵0.1-0.5份、丁二酸5-10份、丁二酸鈉9-18份、d-泛酸鈣0.2-0.8份、酒石酸膽堿0.5-1份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.1-0.5份、鹽酸吡哆辛0.1-0.6份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2-0.8份、亞麻油0.5-2份、聚脂肪酸酯0.5-1.8份、酚紅鈉0.8-1.5份和去離子水100份。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述基礎培養(yǎng)基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5-10份、l-鹽酸胱氨酸3-8份、l-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、l-鹽酸組氨酸4-6份、l-異亮氨酸8-20份、l-亮氨酸7-18份、l-鹽酸賴氨酸10-20份、l-甲硫氨酸1-6份、l-苯丙氨酸2-8份、l-蘇氨酸5-15份、l-色氨酸1-3份、l-酪氨酸5-9份和l-纈氨酸8-12份。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述基礎培養(yǎng)基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3-8份、白介素62-5份、白介素101-4份、白介素123-6份、tnf-β2-10份、gm-csf1-5份。基礎培養(yǎng)基組分合理，營養(yǎng)豐富，可以為細胞培養(yǎng)提供更多的營養(yǎng)物。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素?？梢杂行Х乐古囵B(yǎng)細胞被污染。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。青霉素和鏈霉素活性好，效果佳。

進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，所述細胞培養(yǎng)皿為10cm細胞培養(yǎng)皿。

有益效果：本發(fā)明所述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，方法合理，應用方便，mcf-7細胞生長速度快，細胞狀態(tài)好，邊界清晰，鏡下觀察透亮、分裂相更多、形態(tài)及分散度佳，可以有利于乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉(zhuǎn)移性細胞進行對比研究等的相關(guān)研究。

具體實施方式

下面將通過幾個具體實施例，進一步闡明本發(fā)明，這些實施例只是為了說明問題，并不是一種限制。

實施例1

一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基吸盡，加入3mlpbs洗滌細胞2次，向10cm細胞培養(yǎng)皿中加入1ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃條件下消化5min，加入2ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍吹打細胞培養(yǎng)皿底40次；將液體移至細胞離心管中，在1000g/min條件下離心5min，用移液槍去除上清液，加入2ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍上下吹打細胞40次；平均加入到3個細胞培養(yǎng)皿中，進行擴大培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括70%的基礎培養(yǎng)基以及30%的胎牛血清。所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖80份、碳酸氫鈉10份、丙酮酸鈉8份、轉(zhuǎn)鐵蛋白2份、氯化鉀30份、無水硫酸鎂5份、氯化鈉60份、氯化鋰3份、無水磷酸二氫鈉8份、葉酸0.2份、肌醇0.5份、煙酰胺0.2份、無水氯化鈣20份、硝酸鐵0.1份、丁二酸5份、丁二酸鈉9份、d-泛酸鈣0.2份、酒石酸膽堿0.5份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.1份、鹽酸吡哆辛0.1份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2份、亞麻油0.5份、聚脂肪酸酯0.5份、酚紅鈉0.8份和去離子水100份。

另，所述基礎培養(yǎng)基還包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸3份、l-絲氨酸3份、甘氨酸1份、l-鹽酸組氨酸4份、l-異亮氨酸8份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴氨酸10份、l-甲硫氨酸1份、l-苯丙氨酸2份、l-蘇氨酸5份、l-色氨酸1份、l-酪氨酸5份和l-纈氨酸8份。

再，所述基礎培養(yǎng)基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3份、白介素62份、白介素101份、白介素123份、tnf-β2份、gm-csf1份。

進一步的，所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。

實施例2

一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基吸盡，加入5mlpbs洗滌細胞2次，向10cm細胞培養(yǎng)皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃條件下消化3min，加入3ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍吹打細胞培養(yǎng)皿底50次；將液體移至細胞離心管中，在1200g/min條件下離心4min，用移液槍去除上清液，加入3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍上下吹打細胞50次；平均加入到8個細胞培養(yǎng)皿中，進行擴大培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括90%的基礎培養(yǎng)基以及10%的胎牛血清。所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖90份、碳酸氫鈉20份、丙酮酸鈉18份、轉(zhuǎn)鐵蛋白10份、氯化鉀50份、無水硫酸鎂12份、氯化鈉80份、氯化鋰10份、無水磷酸二氫鈉16份、葉酸0.6份、肌醇1.5份、煙酰胺0.8份、無水氯化鈣40份、硝酸鐵0.5份、丁二酸10份、丁二酸鈉18份、d-泛酸鈣0.8份、酒石酸膽堿1份、核黃素0.3份、鹽酸硫胺0.5份、鹽酸吡哆辛0.6份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.8份、亞麻油2份、聚脂肪酸酯1.8份、酚紅鈉1.5份和去離子水100份。

另，所述基礎培養(yǎng)基還包括8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸10份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸6份、甘氨酸5份、l-鹽酸組氨酸6份、l-異亮氨酸20份、l-亮氨酸18份、l-鹽酸賴氨酸20份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸15份、l-色氨酸3份、l-酪氨酸9份和l-纈氨酸12份。

再，所述基礎培養(yǎng)基還包括5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子8份、白介素65份、白介素104份、白介素126份、tnf-β10份、gm-csf5份。

進一步的，所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。

實施例3

一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基吸盡，加入4mlpbs洗滌細胞3次，向10cm細胞培養(yǎng)皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃條件下消化4min，加入2-3ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍吹打細胞培養(yǎng)皿底45次；將液體移至細胞離心管中，在1100g/min條件下離心4min，用移液槍去除上清液，加入3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍上下吹打細胞45次；平均加入到5個細胞培養(yǎng)皿中，進行擴大培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括80%的基礎培養(yǎng)基以及20%的胎牛血清。所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖86份、碳酸氫鈉18份、丙酮酸鈉12份、轉(zhuǎn)鐵蛋白6份、氯化鉀40份、無水硫酸鎂8份、氯化鈉75份、氯化鋰6份、無水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1份、煙酰胺0.5份、無水氯化鈣30份、硝酸鐵0.3份、丁二酸7份、丁二酸鈉14份、d-泛酸鈣0.5份、酒石酸膽堿0.7份、核黃素0.2份、鹽酸硫胺0.3份、鹽酸吡哆辛0.4份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.5份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯1.2份、酚紅鈉1.2份和去離子水100份。

另，所述基礎培養(yǎng)基還包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸8份、l-鹽酸胱氨酸6份、l-絲氨酸5份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸10份、l-鹽酸賴氨酸16份、l-甲硫氨酸3份、l-苯丙氨酸6份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸6份和l-纈氨酸10份。

再，所述基礎培養(yǎng)基還包括3份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子4份、白介素64份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf3份。

進一步的，所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。

實施例4

一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基吸盡，加入4mlpbs洗滌細胞3次，向10cm細胞培養(yǎng)皿中加入1ml0.38%的胰蛋白酶，于37℃條件下消化4min，加入2ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍吹打細胞培養(yǎng)皿底50次；將液體移至細胞離心管中，在1200g/min條件下離心4min，用移液槍去除上清液，加入3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養(yǎng)基，使用移液槍上下吹打細胞45次；平均加入到6個細胞培養(yǎng)皿中，進行擴大培養(yǎng)。

其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括90%的基礎培養(yǎng)基以及10%的胎牛血清。所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖82份、碳酸氫鈉25份、丙酮酸鈉16份、轉(zhuǎn)鐵蛋白5份、氯化鉀40份、無水硫酸鎂6份、氯化鈉78份、氯化鋰6份、無水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1.2份、煙酰胺0.3份、無水氯化鈣28份、硝酸鐵0.2份、丁二酸8份、丁二酸鈉12份、d-泛酸鈣0.6份、酒石酸膽堿0.8份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.4份、鹽酸吡哆辛0.3份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯0.8份、酚紅鈉1.3份和去離子水100份。

另，所述基礎培養(yǎng)基還包括5份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸3份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴氨酸10份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸8份和l-纈氨酸8份。

再，所述基礎培養(yǎng)基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3份、白介素65份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf5份。

進一步的，所述基礎培養(yǎng)基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。并且，所述青霉素選自10000u/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。

以上所述僅是發(fā)明的幾個實施方式，應當指出，對于本技術(shù)領域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進，這些改進也應視為本發(fā)明的保護范圍。