本發(fā)明屬于天然藥物和藥物治療領(lǐng)域，特別涉及一種含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的一大頑癥，現(xiàn)已成為僅次于心血管病的第二大殺手，所以尋找安全、有效、低毒的抗腫瘤藥物和研究其作用機(jī)理，具有重要意義。
甘草屬于豆科植物，主要分布在我國西部等地區(qū)，是我國常用的中草藥之一。甘草酸及其苷元甘草次酸(glycyrrhetinicacid，簡稱gaa)是甘草的主要藥理活性物質(zhì)。其結(jié)構(gòu)式如下所示：
現(xiàn)代研究表明，gaa具有抗炎、抗?jié)?、抗病毒、抗心律失常、降血脂、促進(jìn)胰島素吸收、抗腫瘤等多種藥理活性。gaa特別是在抗炎、保肝、抗病毒和抗腫瘤方面具有良好的作用，而且對(duì)人體正常細(xì)胞的毒性小。在抗腫瘤方面，gaa能抑制白血病、肝癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌等多種腫瘤細(xì)胞的增殖。然而因?yàn)槿芙庑缘挠绊?，天然的gaa抗腫瘤活性相對(duì)較弱，為了進(jìn)一步提高gaa的抗腫瘤活性，人們對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾與改造，獲得了一些活性較高的gaa衍生物已經(jīng)成為熱點(diǎn)課題。目前，gaa在體內(nèi)的活性偏低、吸收少、溶解性差和生物利用度低，這些特性極大地限制了它的應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)和不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物；該偶聯(lián)物是由抗腫瘤藥物甘草次酸與癌細(xì)胞靶向分子葉酸偶聯(lián)而成。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供上述含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物的用途。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物是由甘草次酸和癌細(xì)胞靶向分子葉酸偶聯(lián)而成，具有如下式(ⅰ)所示的結(jié)構(gòu)式：
所述甘草次酸和葉酸通過酯鍵偶聯(lián)。
上述的含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物的制備方法，包括以下步驟：將甘草次酸與葉酸溶解在無水二氯甲烷中，在吡啶和4-二甲氨基吡啶(dmap)的催化下，室溫反應(yīng)過夜，過濾，過硅膠色譜柱，旋蒸，干燥，即可獲得目標(biāo)化合物。
所述室溫為25-30℃。
所述吡啶和4-二甲氨基吡啶的摩爾比為(1～3):1。
所述硅膠色譜柱所用的洗脫溶劑為乙酸乙酯和石油醚，溶劑體積比為(2～10):7。
上述的含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的用途。
上述的含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗炎藥物或美容品中的用途。
一種藥物組合物，其中含有治療有效量的上述含有癌細(xì)胞靶向分子的偶聯(lián)物或其藥學(xué)上可接受的鹽及載體。
上述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物、抗炎藥物或美容品中的用途。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下突出的優(yōu)點(diǎn)及有益效果：
本發(fā)明合成了一種偶聯(lián)物，通過體外mtt檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤細(xì)胞株(mcf-7、bc-3和hepg2細(xì)胞)具有很好的抑制效果，比甘草次酸的ic50值強(qiáng)4-7倍，但對(duì)正常肝細(xì)胞l-o2低毒。該化合物以兩個(gè)藥物分子偶聯(lián)成前藥的方式治療癌癥，克服甘草次酸溶解性差，增強(qiáng)抗癌藥物活性及靶向性的問題，達(dá)到通過增強(qiáng)細(xì)胞凋亡的途徑清除癌細(xì)胞的效果。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
實(shí)施例1：
將甘草次酸(1.1mmole)與葉酸(1.3eq)溶解在無水二氯甲烷(30ml)中，在吡啶(0.5g)和4-二甲氨基吡啶(0.5g)的催化下，室溫25-30℃下反應(yīng)過夜，過濾，過硅膠色譜柱(所用的洗脫溶劑為體積比(2～9):7的乙酸乙酯和石油醚)，旋蒸，干燥，即可獲得白色固體目標(biāo)化合物。經(jīng)液相色譜質(zhì)譜和核磁共振技術(shù)分析，所新制備的白色固體目標(biāo)化合物為具有式(ⅰ)所示結(jié)構(gòu)的偶聯(lián)物：
實(shí)施例2
目標(biāo)化合物的體外抗腫瘤效應(yīng)評(píng)價(jià)。本實(shí)施例采用乳腺癌mcf-7、淋巴瘤bc-3和肝癌hepg2細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)，同時(shí)lo2肝臟細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行毒性檢測(cè)。
取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞的大小接種4～40×103個(gè)于96孔板上，待生長24小時(shí)后，棄上清，然后按以下分組給藥：腫瘤細(xì)胞設(shè)不加藥組和加藥組(濃度1～100μm對(duì)腫瘤細(xì)胞，濃度5～200μm對(duì)lo2細(xì)胞)，甘草次酸偶聯(lián)葉酸gaa-fa(即實(shí)施例1所得目標(biāo)化合物)，甘草次酸gaa，葉酸fa和兩者等摩爾混合物gaa+fa。每組設(shè)4～6個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)72小時(shí)，棄上清，加入100μl含0.5mg/ml的mtt(四氮唑鹽)無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)4h，加入100μldmso(二甲亞砜)，放置于微型振蕩儀上振蕩10min，再置于酶標(biāo)儀上570nm處檢測(cè)od值。正常人細(xì)胞系lo2做對(duì)照。每次實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。
結(jié)果顯示，隨著藥物濃度增加，與相應(yīng)不加藥對(duì)照組比較，細(xì)胞增殖活性分別下降，說明化合物呈濃度依賴性抑制腫瘤細(xì)胞細(xì)胞增殖。而對(duì)正常肝細(xì)胞系lo2細(xì)胞的增殖活性未有變化，顯示出該化合物對(duì)正常細(xì)胞具有低毒特性(表1)。
表1不同細(xì)胞的ic50值(72h)及不同化合物ic50比值
上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。