本發(fā)明屬于林木生物質(zhì)資源綜合利用領(lǐng)域，具體涉及一種文獻(xiàn)中從未報(bào)道過的沒食子?；S酮醇苷類化合物即8-甲氧基-4′-o-沒食子酰基山奈酚-3-o-α-l-鼠李糖苷(該化合物對(duì)應(yīng)英文名為8-methoxy-4′-o-galloylkaemferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside)及其高效提取分離的制備工藝。

背景技術(shù)：

連香樹(cercidiphyllumjaponicumsieb.etzucc)又稱紫荊葉木、子母樹，為連香樹科(cercidiphyllaceae)連香樹屬(cercidiphyllum)植物，是一種第三紀(jì)孑遺樹木，集中分布在中國(guó)、朝鮮半島和日本等地(tada&sakurai，phytochemistry，1991，30(4)：1119～1120；張全來，等，河南林業(yè)科技，2009，29(2)：89～90)。連香樹系落葉大喬木，樹高可達(dá)25m，胸徑75cm，有時(shí)可達(dá)1m；大樹樹皮灰褐色，縱裂，呈薄片狀剝落；小枝褐色無毛，有長(zhǎng)短枝之分；葉在長(zhǎng)枝上對(duì)生，在短枝上單生，紙質(zhì)，葉圓形或卵圓形，長(zhǎng)2.5～7.5cm，葉背粉綠色，先端圓或鈍尖，基部寬心形，邊緣具鈍圓腺齒，掌狀脈3～7條，葉柄長(zhǎng)1～3cm。無頂芽，側(cè)芽卵圓形，芽鱗2，卵圓形，先端尖，暗紫色?；▎涡裕菩郛愔辏ㄔ绱合热~開放或與葉同放。雄花無梗，生于葉腋，每花有1苞片，花萼4裂，膜質(zhì)，無花瓣，花常4朵簇生，雄蕊15～20，花絲纖細(xì)，花藥紅色，2室，縱裂；雌花腋生有短柄，心皮2～6個(gè)，分離，胚珠多數(shù)，排成2列，圓柱形，稍有彎曲，熟時(shí)暗紫褐色，微被白粉，長(zhǎng)8～18mm，花柱殘存。蓇葖果2～6個(gè)，長(zhǎng)8～18mm，直徑2～3mm，微彎曲，熟時(shí)紫褐色，花柱宿存；種子卵圓形，頂端有長(zhǎng)圓形透明翅(張全來，等，河南林業(yè)科技，2009，29(2)：89～90)。

本發(fā)明以有機(jī)溶劑提取、液液萃取及柱色譜分離和低溫離心分離等方法從連香樹枝椏中制備得到一種文獻(xiàn)中從未報(bào)道過的沒食子?；S酮醇苷類化合物，制備工藝操作簡(jiǎn)單、過程清潔、高效。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種文獻(xiàn)中從未報(bào)道過的沒食子?；S酮醇苷類化合物，即8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷，該沒食子?；S酮醇苷所對(duì)應(yīng)的英文名為8-methoxy-4′-o-galloylkaemferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供從連香樹枝椏中高效制備沒食子?；S酮醇苷類化合物8-甲氧基-4′-o-沒食子酰基山奈酚-3-o-α-l-鼠李糖苷的工藝。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

下述結(jié)構(gòu)式為8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷：

該化合物為淡黃色晶體，熔點(diǎn)為189～191℃，旋光度為-36.2°(c，0.5，meoh)，分子式為c29h26o15，其化學(xué)名為8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷，對(duì)應(yīng)的英文名為8-methoxy-4′-o-galloylkaemferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside。

從連香樹枝椏中高效制備沒食子?；S酮醇苷類化合物8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的工藝，按順序包括如下特征步驟：

步驟1：取連香樹枝椏植物原料，陰干并粉碎后按質(zhì)量比為1∶3～1∶8加入體積百分濃度為65％～85％的丙酮水溶液，常溫提取或加熱提取或超聲波輔助提取1～5次，每次0.5～98小時(shí)，提取液過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1％～15％，得連香樹枝椏粗提物；

步驟2：加入粗提物質(zhì)量1～6倍的水，攪拌，加入粗提物質(zhì)量1～6倍的石油醚萃取1～6次，分離掉石油醚層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量1～6倍的正己烷萃取1～6次，分離掉正己烷層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量1～6倍的氯仿萃取1～6次，分離出氯仿層，將氯仿層減壓濃縮得連香樹枝椏氯仿萃取相；

步驟3：連香樹枝椏氯仿萃取相經(jīng)sephadexlh-20柱層析或硅膠柱層析之至少一種并結(jié)合大孔樹脂真空柱層析制備得到含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液；

步驟4：含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液經(jīng)低溫離心分離方法精制后得到8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷。

本發(fā)明提出的制備方法具有操作工藝規(guī)范簡(jiǎn)單、制備過程清潔高效、產(chǎn)物成分不被破壞、產(chǎn)物純度高等特點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

參考下列實(shí)施例將更全面、更容易地理解本發(fā)明，給出實(shí)施例是為了更清楚地闡明本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1：從連香樹枝椏中制備8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷

步驟1：取連香樹枝椏植物原料，陰干并粉碎后按質(zhì)量比為1∶4加入體積百分濃度為80％的丙酮水溶液，常溫提取4次，每次96小時(shí)，提取液過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的12％，得連香樹枝椏粗提物；

步驟2：加入粗提物質(zhì)量3倍的水，攪拌，加入粗提物質(zhì)量3倍的石油醚萃取5次，分離掉石油醚層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量3倍的正己烷萃取5次，分離掉正己烷層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量3倍的氯仿萃取5次，分離出氯仿層，將氯仿層減壓濃縮得連香樹枝椏氯仿萃取相；

步驟3：連香樹枝椏氯仿萃取相經(jīng)sephadexlh-20柱層析并結(jié)合大孔樹脂真空柱層析制備得到含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液；

步驟4：含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液經(jīng)低溫離心分離方法精制后得到8-甲氧基-4′-o-沒食子酰基山奈酚-3-o-α-l-鼠李糖苷。

該化合物的結(jié)構(gòu)鑒定：

該沒食子酰基黃酮醇苷化合物為淡黃色晶體，以熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)得本發(fā)明中化合物的熔點(diǎn)為189～191℃，旋光度為-36.2°(c，0.5，meoh)。其快原子轟擊質(zhì)譜fabms中[m+h]為m/z615、[m+k]為m/z653，結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)揭示本發(fā)明中沒食子?；S酮醇苷的分子式為c29h26o15。

該化合物在氘代二甲基亞砜溶劑中的¹h(600mhz)及¹³c(150mhz)核磁共振歸屬數(shù)據(jù)如表1所示。根據(jù)該化合物的化學(xué)物理數(shù)據(jù)，特別是其¹h及¹³c核磁共振歸屬數(shù)據(jù)信息可知該化合物的苷元為黃酮醇化合物即山奈酚(kaempferol)。此外，其核磁共振實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及通過算水解和衍生化實(shí)驗(yàn)，充分揭示了其分子中還含有1個(gè)甲氧基、1個(gè)沒食子?；?個(gè)o-α-l-鼠李糖單元。通過該化合物的hmbc及其他二維圖譜可推知其甲氧基、沒食子?；皁-α-l-鼠李糖單元分別結(jié)合在山奈酚苷元的c-8、c-4′及c-3位置。綜上所述，確定該化合物的化學(xué)式為8-甲氧基-4′-o-沒食子酰基山奈酚-3-o-α-l-鼠李糖苷，其對(duì)應(yīng)的英文名為8-methoxy-4′-o-galloylkaemferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside。

通過化合物結(jié)構(gòu)查新，本發(fā)明中的化合物8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷(8-methoxy-4′-o-galloylkaemferol-3-o-α-l-rhamnopyranoside)為之前文獻(xiàn)中從未報(bào)道過的新化合物。

表1.8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的¹h(600mhz)及¹³cnmr(125mhz)譜數(shù)據(jù)(dmso-d6)

實(shí)施例2：從連香樹枝椏中制備沒食子?；S酮醇苷類化合物8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷

步驟1：取連香樹枝椏植物原料，陰干并粉碎后按質(zhì)量比為1∶5加入體積百分濃度為75％的丙酮水溶液，加熱提取3次，每次24小時(shí)，提取液過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的10％，得連香樹枝椏粗提物；

步驟2：加入粗提物質(zhì)量5倍的水，攪拌，加入粗提物質(zhì)量5倍的石油醚萃取4次，分離掉石油醚層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量5倍的正己烷萃取4次，分離掉正己烷層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量5倍的氯仿萃取4次，分離出氯仿層，將氯仿層減壓濃縮得連香樹枝椏氯仿萃取相；

步驟3：連香樹枝椏氯仿萃取相經(jīng)sephadexlh-20柱層析和硅膠柱層析并結(jié)合大孔樹脂真空柱層析制備得到含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液；

步驟4：含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液經(jīng)低溫離心分離方法精制后得到8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷。

實(shí)施例3：從連香樹枝椏中制備沒食子酰基黃酮醇苷類化合物8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷

步驟1：取連香樹枝椏植物原料，陰干并粉碎后按質(zhì)量比為1∶6加入體積百分濃度為70％的丙酮水溶液，超聲波輔助提取2次，每次1小時(shí)，提取液過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的8％，得連香樹枝椏粗提物；

步驟2：加入粗提物質(zhì)量4倍的水，攪拌，加入粗提物質(zhì)量4倍的石油醚萃取3次，分離掉石油醚層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量4倍的正己烷萃取3次，分離掉正己烷層，向剩余水層中加入粗提物質(zhì)量3倍的氯仿萃取3次，分離出氯仿層，將氯仿層減壓濃縮得連香樹枝椏氯仿萃取相；

步驟3：連香樹枝椏氯仿萃取相經(jīng)硅膠柱層析并結(jié)合大孔樹脂真空柱層析制備得到含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液；

步驟4：含8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷的混合溶液經(jīng)低溫離心分離方法精制后得到8-甲氧基-4′-o-沒食子?；侥畏?3-o-α-l-鼠李糖苷。