專利名稱：1,2,3,4,6-五-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域，具體地，涉及1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β -D-葡萄糖 為活性成分的透明質(zhì)酸酶抑制劑或化妝品或保健品或藥品，及其制備方法和其在制備透明 質(zhì)酸酶抑制劑或化妝品或保健品或藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?_ β _D_ 葡萄糖(1，2，3，4， 6-penta-0-galloyl-^ -D-glucose, PGG)為水解單寧，由葡萄糖與5個(gè)沒(méi)食子酸通過(guò)酯鍵 相連形成的沒(méi)食子酸單寧。藥理研究表明，該化合物具有多方面的生理活性，如抗腫瘤、抗 病毒、抗氧化、拮抗內(nèi)毒素/脂多糖、降糖祛脂等。但是，迄今為止沒(méi)有關(guān)于對(duì)透明質(zhì)酸酶抑 制作用的報(bào)道。透明質(zhì)酸酶是透明質(zhì)酸的特異性裂解酶，而透明質(zhì)酸廣泛地存在于動(dòng)物的各種組 織中，在機(jī)體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能，如潤(rùn)滑關(guān)節(jié)、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的運(yùn)轉(zhuǎn)、促進(jìn)創(chuàng)傷愈 合等。更為重要的是，它具有良好的保濕作用，在保濕的同時(shí)，又是良好的透皮吸收促進(jìn)劑。 含透明質(zhì)酸的化妝品目前在國(guó)際上被公認(rèn)為“仿生化妝品”、“第四代化妝品”。透明質(zhì)酸酶 是I型過(guò)敏反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞增殖的參與者，它與炎癥、過(guò)敏有強(qiáng)相關(guān)性。因此，抑制透明質(zhì) 酸酶的活性，既能使透明質(zhì)酸不被分解以維持其正常的生理功能，又能達(dá)到抗炎、抗過(guò)敏、 抗腫瘤的功效。另外，在含有透明質(zhì)酸的制劑(特別地，如美容增強(qiáng)劑和組織填充劑)中加 入透明質(zhì)酸酶抑制劑，能夠增強(qiáng)制劑作用的持久性，避免規(guī)律性地重復(fù)給藥。所以，透明質(zhì) 酸酶抑制劑的開(kāi)發(fā)在制藥、保鍵品、化妝品行業(yè)具有重要意義。可以作為防止和改善炎癥的 藥品或保鍵品。亦可作為抗過(guò)敏和抗炎的化妝品。此外，可作為含有透明質(zhì)酸制劑的添加 劑，增強(qiáng)制劑的穩(wěn)定性、持久性和活性。目前，已報(bào)道的透明質(zhì)酸酶抑制劑根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為蛋白質(zhì)類、葡糖氨基聚 糖類、多糖類、生物堿、萜類等。它們主要提取自蛇毒、動(dòng)植物器官、微生物或經(jīng)人工合成制 得。但是，大批量制備所需成本較高。迄今，沒(méi)有1，2，3，4，6_五-0-沒(méi)食子酰基-β-D-葡 萄糖(PGG)對(duì)透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用的報(bào)道；目前，PGG主要從植物提取物中分離純 化，但此方法因?yàn)镻GG為水溶性好的水解單寧，存在極性大，分離純化過(guò)程繁瑣，得率低等 問(wèn)題，迄今沒(méi)有以單寧酸為原料，工業(yè)化批量生產(chǎn)PGG的制備工藝。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種以1，2，3，4， 6-五-0-沒(méi)食子?；?β -D-葡萄糖(PGG)為活性成分的透明質(zhì)酸酶抑制劑，提供一種成本 低、得率高、純度高、制備過(guò)程簡(jiǎn)單安全易行、生產(chǎn)周期短，易于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖(PGG)的制備方法及其作為透明質(zhì)酸酶抑制劑的 用途。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β -D-葡萄糖即PGG的制備方法，是以將單寧酸溶 于含有PH = 6的HAc-NaAc緩沖溶液的90%的甲醇或乙醇溶液中，50°C水浴中密閉水解12 小時(shí)，在48°C下減壓蒸干，溶于甲醇或乙醇后經(jīng)葡聚糖凝膠柱洗脫得PGG粗品；再經(jīng)大孔吸 附樹(shù)脂分離純化，用水、10%、20%、30%、40%甲醇或乙醇水溶液梯度洗脫，收集洗脫液，濃 縮、干燥即可。所述的原料為單寧酸，包括但不限于工業(yè)單寧酸，單寧酸，含單寧酸的提取物。單寧酸質(zhì)量(g)，HAc-NaAc緩沖溶液(mL)和甲醇或乙醇(mL)的比例為 1 · 1. 5 · 13. 5 ο用于檢測(cè)和指導(dǎo)柱層析分離的薄層層析法是以7 3 0.5的氯仿-甲醇-水為 展開(kāi)劑，F(xiàn)eCl3乙醇液為顯色劑。柱層析分離用的葡聚糖凝膠柱填充劑為葡聚糖凝膠，包括但不限于Sephadex G， Sephadex C_50，Sephadex LH_20 ；大孔吸附樹(shù)脂填充劑為聚苯乙烯型的大孔吸附樹(shù)脂，包 括但不限于 SEPABEADS SP825 (SP850，SP70，SP207，SP700)、MCI gel CHP20P (75_150m)、 Diaion HP20 (HP20SS)、XAD-2、XAD-4、D-101、KB-8。通過(guò)本發(fā)明的活性評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果表明，1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子酰基-β _D_葡 萄糖(PGG)對(duì)透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用(IC5tl(XOlmM)顯著強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照色甘酸鈉 (IC506. 99mM)，可作為一個(gè)很好的透明質(zhì)酸酶抑制劑，添加入含有透明質(zhì)酸的制劑中，增強(qiáng) 藥品、化妝品或保健品的穩(wěn)定性、持久性和活性。此外，可用于制備抗過(guò)敏和抗炎的化妝品， 或防止和改善炎癥的藥品或保鍵品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的方法具有下述的優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明是工業(yè)單寧酸，單寧酸或含單寧酸提取物中的任何一種為原料制備1， 2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子酰基-β -D-葡萄糖。2.本發(fā)明用含水低級(jí)醇(可以是甲醇或乙醇)為溶劑，用HAc-NaAc緩沖溶液水解 制備1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β -D-葡萄糖，得率高，成本低。3.本發(fā)明水解溶液為弱酸，溫度為50°C，無(wú)有機(jī)溶劑的殘留，安全，簡(jiǎn)單易行、成 本低。4.本發(fā)明使用的柱層析填充劑為聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂和葡聚糖凝膠，填充劑 材料可以重復(fù)使用。5.本發(fā)明采用術(shù)層析的方法純化1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖， 不僅產(chǎn)品形狀好、純度高、無(wú)溶劑殘留，而且簡(jiǎn)單易行、成本低。6.本發(fā)明提供了 1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?0-0_葡萄糖作為透明質(zhì)酸酶抑 制劑的新用途。
具體實(shí)施例方式
下面以本發(fā)明的試驗(yàn)例和實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的 內(nèi)容并不局限于此。
試驗(yàn)例1 取任何一種單寧酸或含單寧酸的提取物，溶于含有HAc-NaAc緩沖溶液(PH = 6) 的低級(jí)醇-水溶液中，50°C水浴中密閉水解12小時(shí)。水解液應(yīng)在48°C下減壓蒸干后再溶于 低級(jí)醇，經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析分離，用含水低級(jí)醇(乙醇或甲醇)洗脫，收集富含1，2，3，4， 6-五-0-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖(PGG)的洗脫液，濃縮干燥，得1，2，3，4，6_五-0-沒(méi)食 子?；?β -D-葡萄糖(PGG)粗品。將1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子酰基-β -D-葡萄糖(PGG) 粗品溶于低級(jí)醇，經(jīng)大孔樹(shù)脂柱層析分離，用水、10%、20%、30%、40%低級(jí)醇水溶液梯度 洗脫，得1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖(PGG)純品，收率高，純度大于90%， 無(wú)有機(jī)溶劑的殘留，可直接用作為制藥，保健品及化妝品的原料或其添加劑。原料為工業(yè)單寧酸，單寧酸或含單寧酸的提取物，如五倍子提取物，洋甘菊提 取物，綠茶提取物，赤芍總苷，塔拉果莢提取物，葡萄汁提取物、石榴提取物、漆樹(shù)葉提取物、 黃櫨提取物、金縷梅樹(shù)提取物等。用正交實(shí)驗(yàn)從水解時(shí)間、低級(jí)醇濃度、溫度、以及投料比四個(gè)因素，設(shè)SL9 (34)正 交實(shí)驗(yàn)表(表1)，考察水解1，2，3，4，6-五-0-沒(méi)食子?；?β -D-葡萄糖的最佳條件，應(yīng)為 將原料溶于含有HAc-NaAc緩沖溶液(PH = 6)的90%低級(jí)醇-水溶液中，50°C水浴中密閉 水解12小時(shí)。單寧酸質(zhì)量(g)，HAc-NaAc緩沖溶液(mL)和低級(jí)醇(主要指甲醇或乙醇) (mL)的比例為 1 1. 5 13. 5。表1單寧酸水解因素水平表
權(quán)利要求
1，2，3，4，6 五 O 沒(méi)食子?；?β D 葡萄糖即PGG的制備方法，以將單寧酸溶于含有pH＝6的HAc NaAc緩沖溶液的90％的甲醇或乙醇溶液中，50℃水浴中密閉水解12小時(shí)，在48℃下減壓蒸干，溶于甲醇或乙醇后經(jīng)葡聚糖凝膠柱洗脫得PGG粗品；再經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂分離純化，用水、10％、20％、30％、40％甲醇或乙醇水溶液梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮、干燥即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的原料為單寧酸，包括但不限于工業(yè) 單寧酸，單寧酸，含單寧酸的提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，單寧酸質(zhì)量(g)，HAc-NaAc緩沖溶液(mL) 和甲醇或乙醇(mL)的比例為1 1.5 13.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，用于檢測(cè)和指導(dǎo)柱層析分離的薄層層析法是以 7 3 0.5的氯仿-甲醇-水為展開(kāi)劑，F(xiàn)eCl3乙醇液為顯色劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于柱層析分離用的葡聚糖凝膠柱填充劑為葡 聚糖凝膠，包括但不限于S印hadex G，Sephadex C-50，Sephadex LH-20 ；大孔吸附樹(shù)脂填 充劑為聚苯乙烯型的大孔吸附樹(shù)脂，包括但不限于SEPABEADS SP825(SP850，SP70，SP207， SP700)、MCI gelCHP20P(75-150m)、Diaion HP20 (HP20SS)、XAD-2、XAD-4、D-101、KB-8。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用單寧酸制備1，2，3，4，6-五-O-沒(méi)食子?；?β-D-葡萄糖(PGG)的新方法。單寧酸經(jīng)酸水解制得PGG粗品；再經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂和葡聚糖凝膠柱層析分離純化得PGG，純度＞90％。該方法所得PGG色澤好，純度高，制備過(guò)程簡(jiǎn)單安全易行，成本較低，生產(chǎn)周期短，易于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)。活性評(píng)價(jià)表明PGG對(duì)透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用(IC50 0.01mM)顯著強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照色甘酸鈉(IC50 6.99mM)，可以直接用作藥劑，保健食品及化妝品的原料或其添加劑。
文檔編號(hào)C07H1/00GK101962394SQ201010169308
公開(kāi)日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2009年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日
發(fā)明者喬春玲, 劉青, 張穎君, 楊崇仁, 許敏 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所