本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種具有抗肝炎活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物的制備方法。

背景技術(shù)：

雜環(huán)化合物是有機(jī)化合物中最龐大的一類(lèi)，約占65％以上，而且在自然界分布也十分廣泛，其化學(xué)結(jié)構(gòu)千變?nèi)f化，各自有著特殊的性質(zhì)和重要用途。苯并噁嗪類(lèi)物質(zhì)(benzoxazinoid,bx)是一類(lèi)廣泛存在于喬本科植物中的次生代謝物，具有廣譜抗病抗蟲(chóng)活性。這些化合物以丁布為代表，是研究昆蟲(chóng)和植物相互關(guān)系的重要化合物。基于苯并噁嗪化合物的重要作用，近年來(lái)人們對(duì)這類(lèi)化合物進(jìn)行了廣泛的研究，合成了不少具有生物活性的化合物。吡唑擁有多種生理作用，包括止痛、抗發(fā)炎、退燒、抗心律失常、鎮(zhèn)靜、松弛肌肉、精神興奮、抗痙攣、一元胺氧化酶抑制劑，抗糖尿病和抗菌。吡唑可作為某些醫(yī)藥、農(nóng)藥的中間體，在醫(yī)藥、農(nóng)藥的研究開(kāi)發(fā)中占有十分重要的地位。吡唑類(lèi)化合物因其作用譜廣、藥效強(qiáng)烈等特點(diǎn)而受到越來(lái)越多的關(guān)注。在醫(yī)藥應(yīng)用上吡唑類(lèi)化合物對(duì)許多的疾病具有療效；在農(nóng)藥應(yīng)用上，吡唑類(lèi)化合物具有殺蟲(chóng)、殺菌和除草活性，并且表現(xiàn)出高效、低毒和結(jié)構(gòu)多樣性。因此，吡唑類(lèi)藥物具有廣闊的研究和開(kāi)發(fā)前景。吡唑也可作為某些光敏材料單體的側(cè)鏈，具有廣泛的應(yīng)用。結(jié)合兩種結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢(shì)，我們?cè)O(shè)計(jì)合成出一系列新的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物，并對(duì)其進(jìn)行了抗肝炎活性測(cè)試。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種合成方法簡(jiǎn)單，分子結(jié)構(gòu)新穎，具有抗肝炎活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物及其制備方法。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案，一種新型的具有抗肝炎活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物的制備方法，其特征在于具體步驟為：

a、鄰氨基苯甲醚與一氧化碳，在醋酸鈀作為催化劑，碳酸鈉作為堿性物質(zhì)，甲苯作為溶劑，反應(yīng)得到1,4-苯并噁嗪酮。

b、1,4-苯并噁嗪酮在勞森試劑作用下，甲苯作為溶劑，反應(yīng)得到1,4-苯并噁嗪硫酮。

c、1,4-苯并噁嗪硫酮在乙二胺作用下經(jīng)過(guò)烯醇式轉(zhuǎn)變得到化合物2h-苯并[b][1,4]噁嗪硫醇。

d、2h-苯并[b][1,4]噁嗪硫醇與溴代丙醛在三乙胺作用下得到

e、與水合肼發(fā)生取代反應(yīng)得到化合物

f、在氧氣條件下發(fā)生自身成環(huán)，得到化合物

g、與一氧化碳，在醋酸鈀作為催化劑，碳酸鈉作為堿性物質(zhì)，甲苯作為溶劑，反應(yīng)得到

進(jìn)一步限定，步驟a的具體過(guò)程為：在高壓釜中，把鄰氨基苯甲醚、一定量的醋酸鈀和一定量的碳酸鈉加入甲苯中，用氮?dú)庵脫Q反應(yīng)釜中的氣體后，在真空條件下通入一氧化碳使反應(yīng)釜中的壓力達(dá)到0.2mpa；緩慢升高溫度至50℃，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，過(guò)濾反應(yīng)液，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑得到1,4-苯并噁嗪酮。

進(jìn)一步限定，步驟b的具體過(guò)程為：在反應(yīng)瓶中加入1,4-苯并噁嗪酮、勞森試劑和甲苯，加熱回流10h，把反應(yīng)液加入冰水中冷卻，用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，減壓蒸餾出二氯甲烷，得到1,4-苯并噁嗪硫酮。

進(jìn)一步限定，步驟c的具體過(guò)程為：在反應(yīng)瓶中，把1,4-苯并噁嗪硫酮加入丙酮中，再加入一定量的二乙胺，加入回流一點(diǎn)時(shí)間后，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，蒸除溶劑得到化合物2h-苯并[b][1,4]噁嗪硫醇。

進(jìn)一步限定，步驟d的具體過(guò)程為：在反應(yīng)瓶中，把2h-苯并[b][1,4]噁嗪硫醇加入到dmf中，再加入一定量的三乙胺和溴代丙醛，升溫至110℃反應(yīng)1h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，把反應(yīng)液倒入冰水中，有大量固體析出，抽濾反應(yīng)液，濾餅為純品化合物

進(jìn)一步限定，步驟e的具體過(guò)程為：在反應(yīng)瓶中，把加入到dmso中，再加入一定量的水合肼，加熱至60℃，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，把反應(yīng)液倒入水中，有大量固體析出，抽濾反應(yīng)液，濾餅為純品化合物

進(jìn)一步限定，步驟f的具體過(guò)程為：在反應(yīng)瓶中，把加入到dmso中，在o2氛圍下加熱至100℃，反應(yīng)3h后經(jīng)tlc監(jiān)控，原料反應(yīng)完全，把反應(yīng)液倒入水中，有大量固體析出，抽濾反應(yīng)液，濾餅為純品化合物

進(jìn)一步限定，步驟a的具體過(guò)程為：在高壓釜中，把一定量的醋酸鈀和一定量的碳酸鈉加入甲苯中，用氮?dú)庵脫Q反應(yīng)釜中的氣體后，在真空條件下通入一氧化碳使反應(yīng)釜中的壓力達(dá)到0.2mpa；緩慢升高溫度至50℃，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，過(guò)濾反應(yīng)液，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑得到

本發(fā)明所述的具有抗肝炎活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物的制備方法中的合成路線為：

本發(fā)明合成了一種具有抗肝炎活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物，發(fā)現(xiàn)該化合物對(duì)急、慢性肝損傷有顯著的預(yù)防或治療作用。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

在高壓釜中，把鄰氨基苯甲醚12.3g(0.1mol)、醋酸鈀2.5g和碳酸鈉20g加入甲苯100ml中，用氮?dú)庵脫Q反應(yīng)釜中的氣體后，在真空條件下通入一氧化碳使反應(yīng)釜中的壓力達(dá)到0.2mpa；緩慢升高溫度至50℃，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，過(guò)濾反應(yīng)液，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷100ml中，再用純凈水50ml洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉50g干燥后，蒸除溶劑得到1,4-苯并噁嗪酮14g

實(shí)施例2

在反應(yīng)瓶中加入1,4-苯并噁嗪酮15g(0.1mol)、勞森試劑30g和甲苯200ml，加熱回流10h，把反應(yīng)液加入冰水200ml中，用二氯甲烷100ml萃取三次，合并有機(jī)相，減壓蒸餾出二氯甲烷，得到1,4-苯并噁嗪硫酮16g

實(shí)施例3

在反應(yīng)瓶中，把1,4-苯并噁嗪硫酮16.5g加入丙酮200ml中，再加入二乙胺50ml，加熱回流一段時(shí)間后，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，蒸除溶劑得到化合物2h-苯并[b][1,4]噁嗪硫醇16g

實(shí)施例4

在反應(yīng)瓶中，把2h-苯并[b][1,4]噁嗪硫醇16g加入到dmf100ml中，再加入三乙胺30ml和溴代丙醛12g(0.1mol)，升溫至110℃反應(yīng)1h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，把反應(yīng)液倒入冰水中，有大量固體析出，抽濾反應(yīng)液，濾餅為純品化合物

實(shí)施例5

在反應(yīng)瓶中，把28g(0.1mol)加入到dmso50ml中，再加入水合肼50ml，加熱至60℃，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，把反應(yīng)液倒入水中，有大量固體析出，抽濾反應(yīng)液，濾餅為純品化合物

實(shí)施例6

在反應(yīng)瓶中，把28g(0.1mol)加入到dmso50ml中，在o2氛圍下加熱至100℃，反應(yīng)3h后經(jīng)tlc監(jiān)控，原料反應(yīng)完全，把反應(yīng)液倒入水中，有大量固體析出，抽濾反應(yīng)液，濾餅為純品化合物27g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.28-7.27(m,1h),7.16(t,j＝4hz,1h),6.99-6.97(m,2h),3.34-3.32(m,2h),2.46-2.42(m,2h),2.01-2.00(m,2h)；ms-esi(m/z):281.1[m+h⁺]。

實(shí)施例7

在高壓釜中，把28g、醋酸鈀2.8g和碳酸鈉20g加入甲苯100ml中，用氮?dú)庵脫Q反應(yīng)釜中的氣體后，在真空條件下通入一氧化碳使反應(yīng)釜中的壓力達(dá)到0.2mpa；緩慢升高溫度至50℃，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，過(guò)濾反應(yīng)液，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑得到20g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.28-7.27(m,2h),7.16(t,j＝4hz,1h),7.01-7.00(m,1h),2.24(d,j＝4hz,2h),2.22(d,j＝4hz,2h),2.01(s,1h)；ms-esi(m/z):228.3[m+h⁺]。

實(shí)施例8

藥效學(xué)研究

為了評(píng)價(jià)和比較硫普羅寧及的藥效學(xué)，采用四氯化碳、d-氨基半乳糖(dag)引起急、慢性肝損傷模型，以血清中轉(zhuǎn)氨酶got、gpt，總蛋白t-p、白蛋白alb、白球比例a/g以及組織中羥脯氨酸、唾液酸、肝膠原含量的變化作為肝功能變化、肝組織纖維化的評(píng)價(jià)指標(biāo)，并結(jié)合病理組織學(xué)檢查，對(duì)二者的藥效學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。藥物設(shè)計(jì)一系列同等劑量進(jìn)行比較觀察，以注射途徑進(jìn)行給藥，觀察在預(yù)防性給藥和慢性治療性給藥方式下二者的作用情況，結(jié)果顯示：

對(duì)急性肝損傷模型的作用：

(1)對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的作用：經(jīng)注射給藥后，37.5-150mg/kg能明顯抑制ccl4引起的急性肝損傷所致的血清got和gpt的升高(p<0.05、p<0.01)，表明對(duì)ccl4引起的急性肝損傷有顯著的保護(hù)作用。同樣試驗(yàn)條件下，硫普羅寧150mg/kg對(duì)ccl4引起的急性肝損傷同樣具有顯著的保護(hù)作用。

(2)對(duì)d-氨基半乳糖(dag)致小鼠急性肝損傷的作用

預(yù)防作用：經(jīng)預(yù)防性注射給藥后，高劑量150mg/kg能明顯抑制dag引起的急性肝損傷所致的血清got和gpt的升高(p<0.05、p<0.01)，表明能抑制dag引起的急性肝損傷，有顯著的保護(hù)作用。同樣試驗(yàn)條件下，硫普羅寧75-150mg/kg對(duì)dag引起的急性肝損傷同樣具有顯著的保護(hù)作用。

治療作用：治療32h后，37.5-150mg/kg能明顯抑制dag引起的肝損傷所致的血清gpt的升高(p<0.05、p<0.01)，表明短期治療后，對(duì)損傷的肝功能有部分的恢復(fù)作用。同樣試驗(yàn)條件下，硫普羅寧75-150mg/kg對(duì)dag引起的肝損傷，短期治療后，對(duì)損傷的肝功能同樣具有部分的恢復(fù)作用。

治療7d后，37.5-150mg/kg能明顯抑制dag引起的肝損傷所致的血清gpt、got的升高(p<0.05、p<0.01)，表明長(zhǎng)期治療后，對(duì)損傷的肝功能有較好的恢復(fù)作用。同樣試驗(yàn)條件下，硫普羅寧37.5-150mg/kg對(duì)dag引起的肝損傷，長(zhǎng)期治療后，對(duì)損傷的肝功能同樣具有較好的恢復(fù)作用。

對(duì)慢性肝損傷模型的作用：

連續(xù)注射給藥1個(gè)月后，50-100mg/kg劑量使升高的轉(zhuǎn)氨酶alt、ast顯著降低(p<0.05、p<0.01)，100mg/kg劑量使降低的alb顯著升高(p<0.01)，顯著升高a/g倒轉(zhuǎn)的比例(p<0.01)；25-100mg/kg劑量顯著降低升高的唾液酸含量(p<0.01)，100mg/kg劑量顯著降低升高的羥脯氨酸含量(p<0.01)。表明對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷有顯著的治療作用。同樣試驗(yàn)條件下，硫普羅寧100mg/kg對(duì)四氯化碳致慢性肝損傷同樣有顯著的治療作用。

結(jié)論：注射給藥對(duì)于四氯化碳、d-氨基半乳糖引起的急、慢性肝損傷有顯著的預(yù)防或治療作用，作用的劑量和強(qiáng)度與硫普羅寧相當(dāng)或近似。

以上實(shí)施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。