本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是涉及一種在鎘誘導(dǎo)下，利用植株早期的鎘吸收相關(guān)基因mrna的表達(dá)變化篩選富鎘能力強(qiáng)的蕓薹屬植物的方法，該方法可以用于蕓薹屬植物吸鎘能力的種質(zhì)資源鑒定。
背景技術(shù)：
：隨著金屬礦山的采冶，肥料和農(nóng)藥的大量使用，導(dǎo)致了目前許多土壤受到不同程度的鎘污染。植物修復(fù)重金屬污染的土壤是一種比較可行的方法，利用超積累植物來吸收中度或輕度污染土壤中的鎘，收獲植物并處理，從而降低土壤中鎘的含量，達(dá)到土壤安全利用的目的。已有的報(bào)道表明，部分十字花科植物對(duì)鎘有很強(qiáng)的富集能力，如發(fā)現(xiàn)印度芥菜對(duì)鎘有很強(qiáng)的耐受和富集能力，且生物量大，但印度芥菜的生長(zhǎng)和分布有很強(qiáng)的地域性，很難大規(guī)模推廣。蕓薹屬植物種質(zhì)資源豐富，分布廣，其中某些品種或品系在累積鎘的能力很強(qiáng)，甚至超過印度芥菜。我們?cè)谇捌诘难芯恐?，通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，蕓薹屬植物在鎘脅迫下，一些基因的mrna表達(dá)量的增加與植株富集鎘的能力呈正相關(guān)，通過ncbi-blast發(fā)現(xiàn)，這些基因與植物吸收鎘的生物途徑密切相關(guān)，因此可以利用這些基因的表達(dá)變化來評(píng)價(jià)植物富集鎘的能力，通過定量pcr來檢測(cè)植物在鎘誘導(dǎo)下這些基因的表達(dá)變化來評(píng)價(jià)植物對(duì)鎘的吸收能力，從而到達(dá)快速選擇高富集鎘植物的目的。全基因組測(cè)序表明了蕓薹屬各物種（如：白菜、甘藍(lán)、甘藍(lán)型油菜和芥菜型油菜等）之間基因序列的相似性比較高，因此，在一定濃度的鎘處理下，可以利用定量pcr來測(cè)定蕓薹屬植物中與鎘吸收呈正相關(guān)的基因的表達(dá)變化來選擇鎘富集能力強(qiáng)的蕓薹屬植物。蕓薹屬植物生物量大，其中大部分種類耐旱和耐鹽堿，是重金屬污染植物修復(fù)的重要候選植物，通過該方法可以快速篩選用于修復(fù)重金屬中低度污染土壤的蕓薹屬植物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明針對(duì)蕓薹屬植物鎘吸收分子機(jī)制的相關(guān)信息較少，提供一種快速篩選高富集鎘的蕓薹屬植物的基因，本發(fā)明還提供一種早期鎘脅迫下利用基因的mrna表達(dá)變化篩選富集鎘蕓薹屬植物的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案：一種快速篩選高富集鎘的蕓薹屬植物的基因，其引物的具體序列如下：u-鎘-1：f:5'-tacggtacacgctttaggtta-3'r:5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-2：f:5'-acggagttgttgacggatgaa-3'r:5'-atggaggttgtatttgtaagaagca-3'u-鎘-3：f:5'-ttcgactacagaggaaatccacctt-3'r:5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-4：f:5'-caacagattcagaactgcgagat-3'r:5'-ggagaaagcgtgagaaagagg-3'u-鎘-5：f:5'-ttgctccttcacccacatttc-3'r:5'-ttccactaagagcccaagaca-3'u-鎘-6：f:5'-acgaccgctccaggtttgccttac-3'r:5'-gcatccgcaccacgcttctca-3'所述f為上游引物，r為下游引物。一種快速篩選高富鎘蕓薹屬植物的方法，包括如下步驟:（1）以芥菜型油菜的種子為材料，表面滅菌，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)；設(shè)置對(duì)照組和處理組，處理組含鎘為30mg·kg-1，對(duì)照組不含鎘，置于溫室中生長(zhǎng)；然后從處理組和對(duì)照組的芥菜型油菜根和葉中提取總rna，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，獲得表達(dá)量在根和葉中同時(shí)增加2.00倍以上mrna序列所對(duì)應(yīng)的基因，在這些基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物；（2）定量pcr分析mrna序列所對(duì)應(yīng)的基因表達(dá)量的變化與鎘富集的相關(guān)性：取芥菜型油菜的種子，滅菌后，接種于不同鎘濃度的常規(guī)ms固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后取各培養(yǎng)基上的植株，測(cè)定各處理組根部和葉片的鎘含量，分別提取根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈颍貜?fù)多次；（3）確定富鎘基因：根據(jù)定量pcr檢測(cè)基因表達(dá)量和鎘含量測(cè)定的結(jié)果，與對(duì)照組相比，找到在所有的處理組根和葉中表達(dá)量都增加了2.00倍以上的基因，確定這些基因?yàn)楦绘k基因，擴(kuò)增這些基因的引物如下：u-鎘-1：f:5'-tacggtacacgctttaggtta-3'r:5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-2：f:5'-acggagttgttgacggatgaa-3'r:5'-atggaggttgtatttgtaagaagca-3'u-鎘-3：f:5'-ttcgactacagaggaaatccacctt-3'r:5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-4：f:5'-caacagattcagaactgcgagat-3'r:5'-ggagaaagcgtgagaaagagg-3'u-鎘-5：f:5'-ttgctccttcacccacatttc-3'r:5'-ttccactaagagcccaagaca-3'u-鎘-6：f:5'-acgaccgctccaggtttgccttac-3'r:5'-gcatccgcaccacgcttctca-3'所述f為上游引物，r為下游引物；（4）利用富鎘基因的引物檢測(cè)在鎘濃度為10-50mg·kg-1的ms培養(yǎng)基上培養(yǎng)多天的蕓薹屬植株的根和葉中基因表達(dá)的變化；（5）作出結(jié)論：富鎘基因在根和葉中的表達(dá)量比對(duì)照都增加2.00倍以上的蕓薹屬植物屬于高富鎘的植物。作為優(yōu)選，步驟（1）中的處理組和對(duì)照組置于溫室中生長(zhǎng)30天，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為250μmolm-2s-1。作為優(yōu)選，步驟（2）中常規(guī)ms固體培養(yǎng)基的鎘濃度分別為0，10，20，30，40，50mg·kg-1，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1培養(yǎng)15天。作為優(yōu)選，步驟（4）中所述蕓薹屬植株在常規(guī)ms培養(yǎng)基上培養(yǎng)15天，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1。作為優(yōu)選，其特征在于，步驟（1）中采用高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組深度測(cè)序；利用軟件primerpremier5.0在基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明以鎘誘導(dǎo)下表達(dá)上調(diào)的鎘吸收基因序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)引物，建立了反轉(zhuǎn)錄-定量pcr技術(shù)體系，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，建立了利用鎘誘導(dǎo)下檢測(cè)基因mrna的變化來快速選擇高富集鎘的蕓薹屬植物的方法，此方法快速、敏感和特異性強(qiáng)，節(jié)約了鑒定的時(shí)間和費(fèi)用，提高了蕓薹屬植物富鎘性狀的鑒定效率，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。具體實(shí)施方式實(shí)施例1一種快速篩選高富鎘蕓薹屬植物的方法，包括如下步驟:1）以原子光譜吸收法確定的高富集鎘的芥菜型油菜為材料，取飽滿的種子，用升汞表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上。設(shè)置對(duì)照和處理，處理組鎘濃度為30mg·kg-1，對(duì)照組不含鎘，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為250μmolm-2s-1，在溫室中生長(zhǎng)30天。提取處理和對(duì)照組芥菜型油菜的根和葉的總rna，采用高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組深度測(cè)序，去除平均質(zhì)量值小于20的讀段，得到可用讀段，然后對(duì)可用讀段進(jìn)行denovo拼接后組裝得到芥菜型油菜混合轉(zhuǎn)錄組庫，通過數(shù)據(jù)分析，得出差異表達(dá)的mrna序列，選取表達(dá)量在根和葉中同時(shí)增加2.00倍以上mrna序列和對(duì)應(yīng)的基因，結(jié)合蕓薹屬植物已公布的同源基因的序列，利用軟件primerpremier5.0在基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，以actin基因?yàn)楸磉_(dá)參照基因并設(shè)計(jì)引物，為下一步的定量pcr分析這些基因表達(dá)量的變化與鎘富集的相關(guān)性備用。2）取上述芥菜型油菜的種子，用升汞表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上。取在常規(guī)ms培養(yǎng)基上，鎘濃度水平分別為0、10、20、30、40和50mg·kg-1，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1培養(yǎng)15天的植株。測(cè)定各處理組根部和葉片的鎘含量，分別提取根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈颍貜?fù)3次。3）根據(jù)定量pcr檢測(cè)基因mrna表達(dá)量和鎘含量測(cè)定的結(jié)果，與對(duì)照相比，找到了6個(gè)基因在所有的處理組根和葉中表達(dá)量都增加了2.00倍以上，且這些基因表達(dá)量與鎘富集量的相關(guān)系數(shù)在0.95以上，二者并呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)，因此確定這些基因?yàn)楦绘k基因，擴(kuò)增這些基因的引物序列如表1。表1富集鎘基因和actin基因引物引物名稱上游引物下游引物u-鎘-15'-tacggtacacgctttaggtta-3'5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-25'-acggagttgttgacggatgaa-3'5'-atggaggttgtatttgtaagaagca-3'u-鎘-35'-ttcgactacagaggaaatccacctt-3'5'-cgtcagccaagaaaccaccaa-3'u-鎘-45'-caacagattcagaactgcgagat-3'5'-ggagaaagcgtgagaaagagg-3'u-鎘-55'-ttgctccttcacccacatttc-3'5'-ttccactaagagcccaagaca-3'u-鎘-65'-acgaccgctccaggtttgccttac-3'5'-gcatccgcaccacgcttctca-3'actin5'-agatgcctgatggacaagtga-3'5'-ccaatcatagactgctggtaaag-3'4）利用上述引物檢測(cè)基因表達(dá)變化評(píng)價(jià)蕓薹屬植物富鎘能力。取在常規(guī)ms培養(yǎng)基上，鎘濃度水平為10-50mg·kg-1，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1培養(yǎng)15天的蕓薹屬植物的植株。分別提取植株根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后，以actin基因的表達(dá)為參照，進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，重復(fù)3次，取平均數(shù)。定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件和結(jié)果分析按常規(guī)的方法進(jìn)行。作出結(jié)論:如果引物u-鎘-1、u-鎘-2、u-鎘-3、u-鎘-4、u-鎘-5和u-鎘-6檢測(cè)的基因在處理組蕓薹屬植物的根部和葉片比對(duì)照組都顯著增加2.00倍以上，則可以判定該蕓薹屬植物材料是具有很強(qiáng)的鎘富集能力，可以作為鎘的高富集植物。實(shí)施例2確定鎘誘導(dǎo)下芥菜型油菜根和葉中表達(dá)量同時(shí)增加的富鎘基因的引物。選取已確定的高富集鎘的芥菜型油菜為材料，取飽滿的種子，用升汞表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上。設(shè)置對(duì)照和處理，處理組鎘濃度為30mg·kg-1，對(duì)照組不含鎘，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為250μmolm-2s-1，在溫室中生長(zhǎng)30天。提取處理和對(duì)照組芥菜型油菜的根和葉的總rna，采用高通量測(cè)序技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組深度測(cè)序，去除平均質(zhì)量值小于20的讀段，得到可用讀段，然后對(duì)可用讀段進(jìn)行denovo拼接后組裝得到芥菜型油菜混合轉(zhuǎn)錄組庫，通過數(shù)據(jù)分析，得出差異表達(dá)的mrna序列，選取表達(dá)量在根和葉中同時(shí)增加2.00倍以上mrna序列和對(duì)應(yīng)的基因，結(jié)合蕓薹屬植物已公布的同源基因的序列，在基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈虿⒃O(shè)計(jì)引物，引物序列為：正向引物5'-agatgcctgatggacaagtga-3'，反向引物：5'-ccaatcatagactgctggtaaag-3'。取上述芥菜型油菜的種子，用升汞表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基上。取在常規(guī)ms培養(yǎng)基上，鎘濃度水平分別為0、10、20、30、40、50mg·kg-1，日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1培養(yǎng)15天的植株。測(cè)定各處理芥菜型油菜根部和葉片的鎘含量，分別提取芥菜型油菜根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈?，重?fù)3次。根據(jù)定量pcr檢測(cè)基因mrna表達(dá)量的結(jié)果，與對(duì)照相比，確定了6個(gè)基因在所有的處理組中根和葉中表達(dá)量都顯著增加2.00倍以上，這些基因表達(dá)量與鎘富集量的相關(guān)系數(shù)在0.95以上且二者呈現(xiàn)顯著正相關(guān)，因此確定這些基因?yàn)楦绘k基因，以這些基因表達(dá)是否上調(diào)2.00倍以上來評(píng)價(jià)蕓薹屬植物的富鎘能力。所述芥菜油菜鎘誘導(dǎo)下在根和葉中表達(dá)量顯著上調(diào)6個(gè)基因的引物（上游引物簡(jiǎn)稱f，下游引物簡(jiǎn)稱r）具體序列如下：u-鎘-1：f：5'-tacggtacacgctttaggtta-3'r:5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-2：f：5'-acggagttgttgacggatgaa-3'r:5'-atggaggttgtatttgtaagaagca-3'u-鎘-3：f：5'-ttcgactacagaggaaatccacctt-3'r:5'-taatgggtctattgagtggtg-3'u-鎘-4：f：5'-caacagattcagaactgcgagat-3'r:5'-ggagaaagcgtgagaaagagg-3'u-鎘-5：f：5'-ttgctccttcacccacatttc-3'r:5'-ttccactaagagcccaagaca-3'u-鎘-6：f：5'-acgaccgctccaggtttgccttac-3'r:5'-gcatccgcaccacgcttctca-3'實(shí)施例31）以原子吸收光譜法測(cè)定確定的高富集鎘的芥菜型油菜材料，其鎘的富集能力如下，在鎘濃度為20mg·kg-1的ms培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天，其植株體內(nèi)的平均富集鎘濃度達(dá)到217.2mg·kg-1。2）取上述芥菜型油菜的種子，用升汞表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上，設(shè)置對(duì)照組和處理組，鎘濃度分別為0、20mg·kg-1。在日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1的條件下培養(yǎng)15天，提取上述芥菜型油菜根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈颍貜?fù)3次，取平均數(shù)。定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件和結(jié)果分析按常規(guī)的方法進(jìn)行。3）基因表達(dá)變化分析。采用定量pcr對(duì)實(shí)施例1中的提供的引物進(jìn)行基因表達(dá)的檢測(cè)，結(jié)果如表2。表220mg·kg-1鎘處理對(duì)芥菜型油菜富鎘基因表達(dá)量的影響4）當(dāng)ms培養(yǎng)基中鎘濃度為20mg·kg-1，與對(duì)照相比，高富集鎘的芥菜型油菜材料在鎘誘導(dǎo)下6個(gè)富鎘基因的表達(dá)量在根和葉中都增加了2.00倍以上。實(shí)施例4以湖南某尾礦周圍的鎘污染土壤生長(zhǎng)的甘藍(lán)型油菜的種子為材料。種子表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上，設(shè)置對(duì)照組和處理組，鎘濃度分別為0、50mg·kg-1。在日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1的條件下培養(yǎng)15天，提取上述甘藍(lán)型油菜根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈?，重?fù)3次，取平均數(shù)。定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件和結(jié)果分析按常規(guī)的方法進(jìn)行。利用定量pcr法對(duì)實(shí)施例1中的提供的引物進(jìn)行基因表達(dá)的檢測(cè)，結(jié)果如表3。表350mg·kg-1鎘處理對(duì)甘藍(lán)型油菜富鎘基因表達(dá)量的影響根據(jù)表3的結(jié)果，當(dāng)ms培養(yǎng)基中鎘濃度為50mg·kg-1，所選擇的甘藍(lán)型油菜的根和葉中這6個(gè)富鎘基因的表達(dá)量比對(duì)照的增加了2.00倍以上。通過原子吸收光譜儀測(cè)定，該材料鎘的富集能力如下，在本實(shí)施例中的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)15天，其植株體內(nèi)的平均富集鎘濃度達(dá)到451.2mg·kg-1，符合高富集鎘植物的標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)施例5以湖南某尾礦周圍的鎘污染土壤生長(zhǎng)的白菜的種子為材料。種子表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上，設(shè)置對(duì)照組和處理組，鎘濃度分別為0、40mg·kg-1。在日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1的條件下培養(yǎng)15天，提取上述白菜根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈颍貜?fù)3次，取平均數(shù)。定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件和結(jié)果分析按常規(guī)的方法進(jìn)行。采用定量pcr對(duì)實(shí)施例1中的提供的引物進(jìn)行基因表達(dá)的檢測(cè)，結(jié)果如表4。表440mg·kg-1鎘處理對(duì)白菜富鎘基因表達(dá)量的影響根據(jù)表4的結(jié)果，當(dāng)ms培養(yǎng)基中鎘濃度為40mg·kg-1，所選擇的白菜的根和葉中這6個(gè)富鎘基因的表達(dá)量比對(duì)照的增加了2.00倍以上。通過原子吸收光譜儀測(cè)定，該材料鎘的富集能力如下，在本實(shí)施例中的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)15天，其植株體內(nèi)的平均富集鎘濃度達(dá)到328.6mg·kg-1，符合高富集鎘植物的標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)施例6取從菜地收集的甘藍(lán)種子為材料。種子表面滅菌后，用無菌吸水紙吸干種子表面的水分，接種于常規(guī)ms固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上，設(shè)置對(duì)照組和處理組，鎘濃度分別為0、10mg·kg-1。在日夜長(zhǎng)比為16/8h，日夜溫為22/16℃，光照強(qiáng)度為200μmolm–2s–1的條件下培養(yǎng)15天，提取上述甘藍(lán)根部和葉片的總rna，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行定量pcr實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以actin基因?yàn)閰⒄栈?，重?fù)3次，取平均數(shù)。定量pcr擴(kuò)增的反應(yīng)條件和結(jié)果分析按常規(guī)的方法進(jìn)行。用定量pcr對(duì)實(shí)施例1中的提供的引物進(jìn)行基因表達(dá)的檢測(cè)，結(jié)果如表5。表510mg·kg-1鎘處理對(duì)甘藍(lán)富鎘基因表達(dá)量的影響根據(jù)表5的結(jié)果，當(dāng)ms培養(yǎng)基中鎘濃度為10mg·kg-1，所選擇的甘藍(lán)的根和葉中這6個(gè)富鎘基因的表達(dá)量比對(duì)照的增加了2.00倍以上。通過原子吸收光譜儀測(cè)定，該材料鎘的富集能力如下，在本實(shí)施例中的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)15天，其植株體內(nèi)的平均富集鎘濃度達(dá)到125.2mg·kg-1，符合高富集鎘植物的標(biāo)準(zhǔn)。序列表：<>湖南科技大學(xué)<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>agatgcctgatggacaagtga<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>ccaatcatagactgctggtaaag<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>tacggtacacgctttaggtta<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>taatgggtctattgagtggtg<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>acggagttgttgacggatgaa<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>atggaggttgtatttgtaagaagca<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>ttcgactacagaggaaatccacctt<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>taatgggtctattgagtggtg<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>caacagattcagaactgcgagat<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>ggagaaagcgtgagaaagagg<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>ttgctccttcacccacatttc<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>ttccactaagagcccaagaca<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>acgaccgctccaggtttgccttac<>dna<>芥菜型油菜（brassicajuncea）<>gcatccgcaccacgcttctca<110>湖南科技大學(xué)<120>一種快速篩選高富集鎘的蕓薹屬植物的基因及方法<160>14<210>1<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>1agatgcctgatggacaagtga21<210>2<211>23<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>2ccaatcatagactgctggtaaag23<210>3<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>3tacggtacacgctttaggtta21<210>4<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>4taatgggtctattgagtggtg21<210>5<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>5acggagttgttgacggatgaa21<210>6<211>25<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>6atggaggttgtatttgtaagaagca25<210>7<211>25<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>7ttcgactacagaggaaatccacctt25<210>8<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>8taatgggtctattgagtggtg21<210>9<211>23<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>9caacagattcagaactgcgagat23<210>10<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>10ggagaaagcgtgagaaagagg21<210>11<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>11ttgctccttcacccacatttc21<210>12<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>12ttccactaagagcccaagaca21<210>13<211>24<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>13acgaccgctccaggtttgccttac24<210>14<211>21<212>dna<213>芥菜型油菜（brassicajuncea）<400>14gcatccgcaccacgcttctca21當(dāng)前第1頁12