本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物及其應用。

背景技術(shù)：

煙堿型乙酰膽堿受體(nachr)是一類門控-遞質(zhì)離子通道，普遍存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)(pns)中，與多種生理功能相關(guān)。nachr存在不同的亞型，其一般是由α亞基(如α2-α10)和β亞基(β2-β4)構(gòu)成。其中，α7煙堿型乙酰膽堿受體(α7nachr)則是由5個完全相同的α亞基構(gòu)成的同源五聚體，它主要存在于海馬，丘腦以及大腦皮質(zhì)等有關(guān)于記憶、學習等的重要區(qū)域。近期的臨床研究發(fā)現(xiàn)，在阿爾茨海默病和帕金森病等神經(jīng)退行性疾病的病人腦中均發(fā)現(xiàn)了α7nachr蛋白質(zhì)密度的減少，在基因剔除、亞型選擇性配體等方面的研究表明：靶向性的α7nachr配體能夠提高認知能力以及聽覺門控缺陷，例如pnu-282987、pha-543613以及a-582941等高選擇性的α7nachr激動劑提高了感覺-門控缺陷、短期工作記憶、以及記憶固化等模型的認知功能。因此，針對α7煙堿型乙酰膽堿受體激動劑及放射性配體的合成也越來越受到廣泛的關(guān)注。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明實施例的目的在于提供一種α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物，以得到與α7煙堿型乙酰膽堿受體具有高親和性的放射性或非放射性的配體分子。具體技術(shù)方案如下：

一種α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物，其具有以下通式中的任一種，

其中，

(1)x為：r1為r7為鹵素；

(2)r2為氫，且r3為鹵素或氨基；或者r3為氫，且r2為鹵素或氨基；

(3)r6為氫，且r4和r5結(jié)合成：或者r4為氫，且r5和r6結(jié)合成：r8為鹵素；

(4)y為氮或碳；z為r9、r10分別為鹵素；其中表示基團與母體的連接位置。

本文中，所說的鹵素包括氟、氯、溴或碘。

在一些實施方案中，鹵素經(jīng)過放射性標記或未經(jīng)放射性標記。

在一些實施方案中，所述鹵素為f或¹⁸f。

在一些實施方案中，本發(fā)明提供的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物可以選自以下化合物：

在一些具體實施方案中，本發(fā)明所提供的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物可以作為α7煙堿型乙酰膽堿受體的激動劑。

在一些具體實施方案中，本發(fā)明所提供的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物可以作為α7煙堿型乙酰膽堿受體的部分激動劑。

本文所用術(shù)語“激動劑”應理解為賦予了其最寬泛的含義，即，作為部分或全部地激活目標材料(例如，α7煙堿型乙酰膽堿受體)至少一種生物活性的任何分子。例如，本發(fā)明提供的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物可特異性結(jié)合至α7煙堿型乙酰膽堿受體的胞外結(jié)構(gòu)域以誘導胞內(nèi)信號傳遞，從而證明其在預防或治療認知障礙和在神經(jīng)性康復中的功效。

α7煙堿型乙酰膽堿受體已知在提高例如，學習、記憶和注意力方面的認知功能上很重要。例如，α7煙堿型乙酰膽堿受體與下述疾病有關(guān)：輕度認知障礙、阿爾茨海默癥、與年齡相關(guān)的和其他認知障礙、精神分裂癥、注意力缺陷障礙、注意缺陷多動障礙(adhd)、注射或代謝失調(diào)引起的癡呆癥、路易體癡呆癥、抽搐如癲癇、多發(fā)性腦梗塞、情緒失調(diào)、強迫性和上癮行為、炎性疾病，以及與控制由這些失調(diào)導致的疼痛有關(guān)的疾病和病癥。α7煙堿型乙酰膽堿受體的活性可通過施用α7受體配體來改變或調(diào)節(jié)，所述α7受體配體的非限制性實例有：拮抗劑、激動劑、部分激動劑和反向激動劑。α7受體配體可用于治療和預防這些和各種類型的認知障礙和其他病癥和疾病，而其激動劑和部分激動劑已知能在嚙齒動物、非人類靈長類和人類中改善認知功能和注意力。

基于此，本發(fā)明的另一方面α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物在制備預防或治療認知障礙的藥物中的用途。

本文所用術(shù)語“認知障礙”是指動物在認知功能或認知領(lǐng)域方面大范圍的退化，例如，在工作記憶、注意力和警覺、語言學習和記憶、視覺學習和記憶、推理和解決問題方面，尤其是，例如，在執(zhí)行能力、任務處理速度和/或社會認知方面。認知障礙已知表現(xiàn)出注意力缺陷、思維紊亂、思維反應遲鈍、理解困難、注意力差、失去解決問題能力、記憶不準確、表達思想和/或綜合思維以及感覺和行為上有困難或在消除不合理思維上有困難。

術(shù)語“治療”可認為是包括預防、抑制和減緩(消退)動物的與認知障礙相關(guān)的疾病、失調(diào)或病癥，該動物過去從未診斷為患有由認知障礙導致的這類疾病、失調(diào)或病癥，但其易于患上這類疾病、失調(diào)或病癥。相應地，術(shù)語“治療上有效量”是指用于緩解、減輕或預防待治療疾病的癥狀所需有效劑量的臨床指標，或用于降低或延遲這類癥狀發(fā)作的有效活性化合物的有效劑量，其可在待治療疾病的體內(nèi)和/或體外模型中通過實驗根據(jù)經(jīng)驗來確定。

本發(fā)明還提供了鹵素經(jīng)過放射性標記的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物，其作為pet(，positronemissioncomputedtomography，正電子發(fā)射計算機斷層顯像)顯像劑的用途。

本發(fā)明還提供了用于預防或治療認知障礙的藥物組合物，所述組合物包含治療上有效量的前述的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物；以及藥學上可接受的載體。

在一些具體實施方式中，其中所述認知障礙選自下組：早老年性癡呆癥、早發(fā)性阿爾茨海默病、老年性癡呆癥、阿爾茨海默型癡呆癥、路易體小體性癡呆癥、微小梗塞性癡呆癥、aids相關(guān)癡呆癥、hiv癡呆癥、路易體相關(guān)癡呆癥、唐氏綜合征相關(guān)癡呆癥、皮克氏病、輕度認知功能障礙、與年齡相關(guān)的記憶障礙、最近短期記憶障礙、年齡相關(guān)認知障礙、藥物相關(guān)的認知障礙、免疫缺陷綜合征相關(guān)的認知障礙、血管疾病相關(guān)的認知功能障礙、精神分裂癥、注意力缺陷障礙、注意缺陷多動障礙(adhd)以及學習缺陷障礙。

本發(fā)明所提供的各配體化合物，與α7煙堿型乙酰膽堿受體具有較高的親和性，是α7煙堿型乙酰膽堿受體的優(yōu)良配體化合物，進一步地，將本發(fā)明提供的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物經(jīng)過放射性化學標記后，其可以作為pet顯像劑，并具有親和性好、特異性強、選擇性高、腦攝取和代謝速率適中的特點，具有臨床應用價值。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為[¹⁸f]ⅱ-15和ⅱ-15的hplc分析譜圖。

圖2為[¹²⁵i]ɑ-bgt與ɑ7nachrs膜蛋白結(jié)合的特異性結(jié)合曲線。

圖3為[¹²⁵i]ɑ-bgt與受體膜蛋白結(jié)合的hill直線。

圖4為scatchard直線；

圖5為機率單位y與logd(x)的曲線圖。

圖6為放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15在胎牛血清和生理鹽水中的穩(wěn)定性分析的hplc圖；

圖7為[¹⁸f]ⅱ-15的在小鼠腦內(nèi)的選擇性實驗結(jié)果；

圖8為雌性cd-1大鼠pet顯像圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1：合成(簡稱化合物ⅰ-9)

化合物ⅰ-9的合成路線如下：

(1)化合物ⅰ-2的合成

向潔凈干燥的反應瓶中加入化合物ⅰ-1(5g，35.7mmol)，用50ml甲醇溶解，置換氮氣三次后，將甲醇鈉(2.89g，53.5mmol)的甲醇溶液(15ml)滴加到反應體系中，室溫下攪拌反應30min；然后將反應體系降溫至0℃，逐滴加入溴素(6.3g，39.4mmol)，控制反應體系的溫度在0-5℃的條件下反應4h；tlc檢測反應結(jié)束后(ch2cl2:ch3oh＝25:1)，用少量10％的亞硫酸鈉水溶液終止反應，將反應體系降溫至-15℃后攪拌析出黃色固體，抽濾之后用冰甲醇(2×5ml)洗滌濾餅，干燥，得黃色固體即為目標產(chǎn)物ⅰ-2(4.2g，53％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.85(d,j＝8.64hz,1h),7.66(d,j＝8.64hz,1h)；ms(m+h⁺):m/z＝216.97.

(2)化合物ⅰ-3的合成

將化合物ⅰ-2(1g，4.6mmol)加入三口瓶中，用20ml乙醇將其溶解，置換氮氣三次后，向其中加入鋅粉(1.5g，22.9mmol)和氯化銨(2.46g，46mmol)，再次置換氮氣；50℃條件下反應16h，tlc檢測反應結(jié)束后(ch2cl2:ch3oh＝25:1)，將反應液過濾，收集濾液，減壓濃縮后用石油醚/乙酸乙酯(5:1)過柱純化，得灰黑色固體即為目標產(chǎn)物ⅰ-3(524mg，60％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ9.70(s,1h),6.74(d,j＝7.8hz,1h),6.49(d,j＝7.8hz,1h),5.91(s,1h)；ms(m+h⁺):m/z＝188.99.

(3)化合物ⅰ-5的合成

向反應瓶中加入化合物ⅰ-3(0.3g，1.59mmol)，用10ml乙醇將其溶解，然后邊攪拌邊加入二硫化碳(2.42g，31.7mmol)和氫氧化鉀(191mg，4.76mmol)；80-85℃條件下反應16h，tlc檢測反應結(jié)束后(ch2cl2:ch3oh＝25:1)，減壓濃縮除去乙醇和二硫化碳，加水溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)體系的ph至3左右，析出固體，過濾干燥得化合物ⅰ-4粗產(chǎn)品0.26g，直接進行下一步反應。

向三口反應瓶中加入化合物ⅰ-4(0.26g，1.13mmol)和碳酸鉀(156mg，1.13mmol)用10mldmf溶解，置換氮氣三次后，將反應體系降至0℃；然后將176mg碘甲烷(1.24mmol)逐滴加入到反應瓶中，滴加完畢后在0℃條件下攪拌反應10min，然后室溫反應3h；tlc檢測反應結(jié)束后(ch2cl2:ch3oh＝25:1)，向反應體系中加入60ml水和20ml乙酸乙酯，攪拌5min后靜置；收集有機相，用無水mgso4干燥，過濾，減壓濃縮除去溶劑得棕褐色固體ⅰ-5(180mg，65％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.06(d,j＝8.4hz,1h),7.55(d,j＝8.4hz,1h),2.79(s,3h)；ms(m+h⁺):m/z＝246.93.

(4)化合物ⅰ-6的合成

向反應瓶中依次加入1,4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷(200mg，1.58mmol)，化合物ⅰ-5(466mg，1.9mmol)，三乙胺(321mg，3.17mmol)和10ml異丙醇，邊攪拌邊加熱使體系升溫至100℃，待溶劑揮發(fā)完后，繼續(xù)攪拌過夜反應；tlc檢測反應結(jié)束后(乙酸乙酯/甲醇＝10:1)，直接用乙酸乙酯(含1％甲醇和1‰三乙胺)作為洗脫劑過柱純化，得淺黃色固體ⅰ-6(250mg，48.8％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ7.68(d,j＝8.12hz,1h),7.15(d,j＝8.12hz,1h),4.43-4.42(m,1h),3.90(t,j＝5.56hz,2h),3.09(t,j＝5.76hz,2h),3.04-2.95(m,4h),2.10-2.07(m,2h),1.84-1.76(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝323.905.

(5)化合物ⅰ-9的合成

向反應瓶中加入化合物ⅰ-6(100mg，0.31mmol)，化合物ⅰ-7(70mg，0.314mmol)，碳酸銫(303mg，0.93mmol)和pd(dppf)cl2(45mg，0.062mmol)，將反應體系置換氮氣三次后，加入重蒸的1,4-二氧六環(huán)(10ml)；85-90℃條件下反應，反應結(jié)束后減壓濃縮除去溶劑，用乙酸乙酯/甲醇(10:1)作為洗脫劑過柱純化，得淡黃色固體產(chǎn)品即為ⅰ-9(89.4mg，85％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.72(td,j＝8.82hz,2hz,1h),8.18(dt,j＝1.76hz,4.32hz,1h),7.61(dd,j＝8.24hz,1.32hz,1h),7.49(d,j＝8.2hz,1h),7.30(td,j＝5.94hz,2.04hz,1h),4.61(s,1h),3.99(m,2h),3.21-3.13(m,4h),3.06-2.99(m,2h),2.18-2.16(m,2h),1.88-1.80(m,2h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ163.54,161.83,159.45,158.78,146.72,146.02,141.72,141.05,122.63,122.37,122.01,116.37,114.92,56.96,50.73,46.32,44.33,26.82；ms(m+h⁺):m/z＝340.15.

實施例2：合成(簡稱化合物ⅰ-10)

化合物ⅰ-10的合成路線如下：

向反應瓶中加入化合物ⅰ-6(100mg，0.31mmol)，化合物ⅰ-8(44mg，0.313mmol)，碳酸銫(303mg，0.93mmol)和pd(dppf)cl2(45mg，0.062mmol)，將反應體系置換氮氣三次后，加入重蒸的1,4-二氧六環(huán)(10ml)；85-90℃條件下反應，反應結(jié)束后減壓濃縮除去溶劑，用乙酸乙酯/甲醇(10:1)作為洗脫劑過柱純化，得淺黃色固體產(chǎn)品ⅰ-10(53mg，50％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.80(d,j＝2.32hz,1h),8.52(td,j＝7.8hz,2.52hz,1h),7.50(d,j＝8.16hz,1h),7.35(d,j＝8.12hz,1h),6.99(dd,j＝8.52hz,2.8hz,1h),4.65(s,1h),4.03(t,j＝5.36hz,2h),3.25-3.19(m,4h),3.10-3.04(m,2h),2.22(m,2h),1.93-1.86(m,2h)；¹³c-nmr(100mhz,cdcl3)δ164.88,163.48,162.49,158.88,149.03,145.90,141.07,139.96,133.43,115.37,112.24,109.51,109.14,55.83,50.57,46.30,26.43,8.70；ms(m+h⁺):m/z＝340.15.

實施例3：合成化合物(簡稱化合物ⅱ-5)

化合物ⅱ-5的合成路線如下：

(1)化合物ⅱ-2的合成

向1000ml的反應瓶中加入30.0g9-芴酮(ⅱ-1)(0.17mol)和100ml水，加熱至80-85℃，然后在30min內(nèi)將溴(32.0g,0.2mol)逐滴加入到反應瓶中，滴加完畢后，繼續(xù)在80-85℃條件下反應4h；待反應體系降至室溫后，向其中加入300ml水淬滅反應，然后向其中加入300ml10％的nahso3溶液，攪拌30min后抽濾得到淡黃色固體物質(zhì)；將該淡黃色固體物質(zhì)溶于300ml乙醇中，然后在80℃條件下回流攪拌約16h，降至室溫后抽濾得淡黃色固體，50℃條件下真空干燥即得2-溴-9-芴酮(ⅱ-2)(39.1g，90.4％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.76(d,j＝1.76hz,1h),7.66(d,j＝7.32hz,1h),7.61(dd,j＝7.88hz,1.76hz,1h),7.51-7.50(m,2h),7.39(d,j＝7.88hz,1h),7.34-7.30(m,1h)；ms(m+h⁺):m/z＝260.98.

(2)化合物ⅱ-3的合成

向1000ml的反應瓶中加入23.4g2-溴-9-芴酮(ⅱ-2)(0.09mol)和180ml水，加熱至80-85℃，然后將180ml65％的硝酸溶液(2.6mol)和180ml98％的硫酸溶液(3.3mol)的混合溶液逐滴加入到反應體系中，大約30min內(nèi)滴加完畢；將反應體系升溫至110-120℃，回流4h，待降至室溫后，向其中加入300ml水淬滅反應，過濾得黃色固體；所得固體用水(3×100ml)洗滌后，再加入200ml甲醇打漿洗滌，過濾收集固體，然后在50℃條件下真空干燥，即得2-溴-7-硝基-9-芴酮(ⅱ-3)(21.0g,76.4％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.49(s,1h),8.44(d,j＝8.16hz,1h),7.90(s,1h),7.75(d,j＝7.92hz,1h),7.71(d,j＝8.16hz,1h),7.55(d,j＝7.92hz,1h)；ms(m+h⁺):m/z＝306.02.

(3)化合物ⅱ-4的合成

向500ml反應瓶中依次加入2-溴-7-硝基-9-芴酮(ⅱ-3)(9.0g,0.03mol)，pd2(dba)3(0.6g,0.655mmol)，binap(1.3g,2.087mmol)，叔丁醇鈉(3.3g,0.0343mol)，1,4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷(3.0g,0.024mol)和1,4-二氧六環(huán)(150ml)，置換氮氣三次后，將反應體系加熱至80-85℃，在氮氣保護下反應16h；反應結(jié)束后，加入150ml乙酸乙酯，然后通過墊有硅藻土的漏斗過濾除去不溶性物質(zhì)；在濾液中加入10％k2co3溶液調(diào)節(jié)ph至8.0左右，然后用ch2cl2萃取，直至水相無顏色為止，合并有機相，用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮得到藍紫色產(chǎn)品(ⅱ-4)(2.1g,20.4％)，該產(chǎn)品可直接用于下一步反應。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.56(d,j＝7.24hz,1h),7.38(d,j＝6.56hz,1h),7.34(d,j＝2.8hz,1h),7.14-7.09(m,2h),6.78(d,j＝8.16hz,1h),4.13-4.11(m,1h),3.67-3.65(m,1h),3.61-3.58(m,1h),3.15-3.14(m,4h),3.04(m,2h),2.14(m,2h),1.78(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝350.16.

(4)化合物ⅱ-5的合成

向反應瓶中依次加入化合物ⅱ-4(2.1g，6.02mmol)，鐵粉(1.7g,0.03mol)，乙醇(80ml)，水(54ml)和濃鹽酸(1.8ml)，升溫至80℃，tlc檢測原料反應完全(大約5h)；用10％k2co3溶液調(diào)節(jié)反應體系的ph值至8.0左右，加入150ml乙酸乙酯，通過墊有硅藻土的漏斗過濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，合并有機相，減壓濃縮除去溶劑，然后將固體溶解于ch2cl2中，加水洗滌，分離得有機相，用無水na2so4干燥，過濾，減壓濃縮得終產(chǎn)物ⅱ-5(1.5g，80％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.12(d,j＝8.24hz,1h),7.08(d,j＝7.92hz,1h),7.01(d,j＝2.44hz,1h),6.88(d,j＝2.2hz,1h),6.70(dd,j＝8.24hz,2.52hz,1h),6.64(dd,j＝7.88hz,2.24hz,1h),4.01(m,2h),3.51-3.48(m,2h),3.13-3.06(m,4h),3.01-2.94(m,2h),2.12-2.05(m,2h),1.75-1.67(m,2h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ194.18,148.14,144.99,135.02,134.79,134.56,132.85,119.00,118.94,117.11,110.32,108.94,55.59,50.91,45.26,43.25,25.50；ms(m+h⁺):m/z＝320.0.

實施例4：合成化合物(簡稱化合物ⅱ-6)

化合物ⅱ-6的合成路線如下：

向反應瓶中加入化合物ⅱ-5(1.9g,6mmol)和四氟硼酸(30ml)，將反應瓶置于冰浴中，使反應體系降溫至0-5℃，然后將亞硝酸鈉水溶液(0.5g，7.2mmol，15ml)在15min內(nèi)逐滴加入到反應體系中；滴加完畢，繼續(xù)反應30min后，停止攪拌，抽濾，濾餅先用15ml乙醇洗滌，再用15ml甲基叔丁基醚洗滌，最后用甲基叔丁基醚打漿洗滌，過濾得固體；將固體轉(zhuǎn)移至反應瓶中，加熱至120℃，tlc檢測，當原料完全轉(zhuǎn)換后，將反應體系冷卻至室溫，加入50mlch2cl2溶解，過濾除去不溶性固體，濾餅用50mlch2cl2打漿洗滌，收集有機相，無水na2so4干燥后，過濾，減壓濃縮除去溶劑；粗產(chǎn)品用二氯甲烷和甲醇梯度(ch2cl2:ch3oh＝25:1)過柱純化，得紫色固體即為終產(chǎn)物ⅱ-6(1.2g，67.3％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24-7.19(m,3h),7.05(d,j＝2.28hz,1h),7.02(dd,j＝8.4hz,2.4hz,1h),6.74(dd,j＝8.32hz,2.56hz,1h),4.0437-4.0391(m,1h),3.55-3.52(m,2h),3.15-3.07(m,4h),3.01-2.94(m,2h),2.12-2.05(m,2h),1.77-1.68(m,2h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ192.51(d,j＝2.2hz),162.49(s),160.03(s),148.88(s),140.55(d,j＝2.9hz),130.56(s),120.13(s),119.86(s),119.63(s),118.92(s),118.85(s),116.74(s),110.86(s),110.63(s),108.67(s),55.97(s),50.73(s),45.48(s),43.49(s),25.76(s)；¹⁹fnmr(376mhz,cdcl3)δ-115.21(s)；ms(m+h⁺):m/z＝323.2.

實施例5：合成化合物(簡稱化合物ⅱ-14)

化合物ⅱ-14的合成路線如下：

(1)化合物ⅱ-8的合成

將三氧化鉻(138.0g,1.38mol)溶于120ml水和80ml乙酸的混合溶液中，攪拌使其全部溶解，待用；向反應瓶中加入40.0g熒蒽(ⅱ-7)(0.2mol)和500ml乙酸，將反應體系加熱至80-85℃，然后將三氧化鉻溶液逐滴加入其中，控制體系的溫度在80-85℃，滴加完畢后將反應體系升溫至110-120℃，反應2h后，冷卻至室溫，將反應液傾倒入3l水中，有大量黃色固體析出，抽濾后將固體溶解在600ml2m的naoh溶液中，抽濾除去不溶性雜質(zhì)，用500ml水洗滌濾餅；加入甲基叔丁基醚洗滌水相，分離得水相，用濃鹽酸調(diào)節(jié)其ph至1.0左右，黃色固體再次析出，抽濾后將其在60℃條件下真空干燥即得目標產(chǎn)物ⅱ-8(9-芴酮-1-羧酸)(29.5g，66.0％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(d,j＝7.52hz,1h),7.74-7.53(m,5h),7.36(t,j＝7.16hz,1h)；ms(m+h⁺):m/z＝225.10.

(2)化合物ⅱ-9的合成

向反應瓶中加入9-芴酮-1-羧酸(ⅱ-8)(15.0g,0.067mol)和300ml水，將反應體系加熱至80-85℃，然后將10mlbr2(0.23mol)逐滴加入其中，滴加完畢后，繼續(xù)反應16h，tlc檢測(ch2cl2:ch3oh＝10:1)反應完全后，向其中加入10％的亞硫酸氫鈉水溶液300ml，攪拌30min，過濾得黃色固體，50℃條件下真空干燥得終產(chǎn)物ⅱ-9(19.5g,96.5％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.22(d,j＝7.04hz,1h),7.85(s,1h),7.73-7.66(m,3h),7.43(d,j＝7.84hz,1h).

(3)化合物ⅱ-10的合成

在攪拌的條件下，向反應瓶中依次加入ⅱ-9(6g，19.87mmol)，甲苯(60ml)，三乙胺(4.1ml，29.8mmol)，dppa(6.4ml，29.8mmol)和叔丁醇(10ml)，然后將反應體系升溫至110℃回流反應，tlc檢測反應結(jié)束后(原料，ch2cl2:ch3oh＝5:1；中間體，石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，除去溶劑，用硅膠柱純化(石油醚:乙酸乙酯＝30:1)得黃色固體即為產(chǎn)物ⅱ-10(5.5g，74％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.15(d,j＝8.56hz,1h),7.71(d,j＝1.72hz,1h),7.59(dd,j＝7.88hz,1.8hz,1h),7.42(dd,j＝7.44hz,8.36hz,1h),7.37(d,j＝7.92hz,1h),7.09(d,j＝7.16hz,1h),1.55(s,9h).

(4)化合物ⅱ-11的合成

將化合物ⅱ-10(808mg，2.16mmol)溶于40ml乙腈中，向其中再加入22ml1m的鹽酸(21.6mmol)，82℃條件下加熱反應4h，tlc檢測反應結(jié)束后，冷卻至室溫，向反應體系中加入適量的1mnaoh溶液調(diào)節(jié)ph至強堿性，然后用乙酸乙酯萃取，收集有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮除去溶劑，得到黃色固體即為產(chǎn)物ⅱ-11(500mg，84.5％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.71(d,j＝1.4hz,1h),7.55(dd,j＝7.8hz,1h),7.35(d,j＝7.9hz,1h),7.22(t,j＝7.6hz,1h),6.81(d,j＝7.1hz,1h),6.52(d,j＝8.4hz,1h),5.54(s,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝273.99.

(5)化合物ⅱ-12的合成

向25ml的三口燒瓶中加入1.729ml30％的雙氧水(16.95mmol)，冰浴冷卻至0℃后，在氬氣保護下，向其中滴加三氟乙酸酐(2.736ml，19.68mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液，滴加完畢后，繼續(xù)在0℃條件下攪拌1.5h(反應混合物由無色變?yōu)樽厣?；然后向反應體系中滴加化合物ⅱ-11(500mg，1.824mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液，滴加完畢升至室溫，攪拌反應1h，tlc檢測反應結(jié)束后，加入適量水猝滅反應，用二氯甲烷萃取，收集有機相，用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸除去溶劑，經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)后，得黃色固體ⅱ-12(212mg，38.2％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.32(d,j＝8.4hz,1h),7.75(d,j＝1.8hz,1h),7.64(dd,j＝7.9hz,1h),7.54(t,j＝7.6hz,1h),7.41(d,j＝7.9hz,1h),7.31(d,j＝7.4hz,1h).

(6)化合物ⅱ-13的合成

將化合物ⅱ-12(100mg，0.329mmol)，1,4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷(125mg，0.989mmol)和碳酸銫(426mg，1.31mmol)溶于2ml重蒸的無水甲苯中，待用；在氬氣保護下，將pd2(dba)3(30mg，0.033mmol)和(±)-binap(61mg，0.099mmol)溶于2ml重蒸的無水甲苯中，90℃條件下攪拌15min后(反應混合物由深紫色渾濁液變?yōu)槌赛S色澄清液)，冷卻至室溫；然后將前述溶液加入到該反應體系中，氬氣保護，60℃條件下攪拌14h后(反應混合物由橙黃色澄清液體變?yōu)樽丶t色液體)，冷卻至室溫，加入10ml水猝滅反應，用二氯甲烷萃取，收集有機相，用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓旋蒸除去溶劑，經(jīng)硅膠柱層析純化(ch2cl2:ch3oh＝20:1)后，得紫黑色固體ⅱ-13(48mg，41.8％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.49-7.52(m,2h),7.36(d,j＝7.9hz,2h),7.10(s,1h),6.82(t,j＝7.6hz,1h)，4.13(s,1h),3.62-3.63(m,2h),3.04-3.18(m,6h),2.31(s,2h),1.82-1.83(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝350.37.

(7)化合物ⅱ-14的合成

向反應瓶中依次加入ⅱ-12(2.1g，6.02mmol)，鐵粉(1.7g，0.03mol)，乙醇(80ml)，水(54ml)和濃鹽酸(1.8ml)，升溫至80℃反應5h；tlc檢測原料反應完全后，用10％k2co3溶液調(diào)節(jié)ph值至8.0左右，加入150ml乙酸乙酯，通過墊有硅藻土的漏斗過濾，合并有機相，減壓濃縮除去溶劑，然后將固體溶解于ch2cl2中，加水洗滌，分離得有機相，用無水na2so4干燥，過濾，減壓濃縮得終產(chǎn)物ⅱ-14(1.5g，80％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.30(d,j＝8.28hz,1h),7.16-7.12(m,1h),7.06(d,j＝2.48hz,1h),6.75(dd,j＝8.28hz,2.52hz,1h),6.67(d,j＝7.04hz,1h),6.35(d,j＝8.28hz,1h),5.43(s,2h),4.10(s,1h),3.58(t,j＝5.48hz,2h),3.19-3.13(m,3h),3.07-3.00(m,2h),2.14-2.11(m,2h),1.80-1.74(m,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ195.66(s),150.20(s),147.18(s),137.02-136.73(m),136.37(s),131.22(s),121.42(s),116.55(s),115.39(s),108.58(s),108.48(s),57.06(s),51.87(s),46.56(s),44.64(s),26.91(s)；ms(m+h⁺):m/z＝320.16.

實施例6：合成化合物(簡稱化合物ⅱ-15)

化合物ⅱ-15的合成路線如下：

向反應瓶中加入化合物ⅱ-14(1.3g，4.07mmol)和四氟硼酸(20ml)，將其置于冰浴中待溫度降至0-5℃后，向其中逐滴加入nano2溶液(0.4g,5.8mmol,10ml)，滴加完畢繼續(xù)反應30min；停止攪拌，抽濾，濾餅先用15ml的乙醇洗滌，再用15ml的甲基叔丁基醚洗滌，最后用甲基叔丁基醚打漿洗滌，過濾得固體；將固體轉(zhuǎn)移至反應瓶中，加熱至120℃，tlc檢測反應結(jié)束后降至室溫，加入50ml二氯甲烷溶解，過濾除去不溶性固體，濾餅再用50ml二氯甲烷打漿洗滌，合并有機相，減壓濃縮除去溶劑得粗產(chǎn)物，用二氯甲烷和甲醇(25:1)過柱純化得紫色固體ⅱ-15(446mg，34.0％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39-7.34(m,1h),7.32(d,j＝8.36hz,1h),7.11(d,j＝7.36hz,1h),7.09(d,j＝2.48hz,1h),6.80-6.74(m,2h),4.10(s,1h),3.60(t,j＝5.76hz,2h),3.19-3.12(m,4h),3.05-2.99(m,2h),2.15-2.10(m,2h),1.82-1.73(m,2h)；¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ191.17(s),158.08(s),150.54(s),137.22(s),137.14(s),135.82(s),130.97(s),121.76(s),117.27(s),115.33(s),115.12(s),114.98(s),109.26(s),56.85(s),51.62(s),46.36(s),44.39(s),29.70(s),26.65(s)；¹⁹fnmr(376mhz,cdcl3)δ-114.11(s)；ms(m+h⁺):m/z＝323.2.

實施例7：合成化合物(簡稱化合物ⅲ-5)

化合物ⅲ-5的合成路線如下：

(1)化合物ⅲ-2的合成

將5-羥基吲哚(ⅲ-1)(10g，75.1mmol)溶于100ml乙腈中，向該溶液中加入二碳酸二叔丁酯(49.2g,225.3mmol)和dmap(917mg,7.51mmol)，室溫下攪拌15h；反應結(jié)束后，將反應液減壓濃縮，加入400ml甲醇溶解，然后再加入k2co3(51.9g,375.5mmol)，室溫下攪拌4h；反應完全后，用乙酸調(diào)節(jié)ph至中性，加h2o稀釋，萃取有機相(乙酸乙酯作萃取劑)，除去溶劑，過柱分離(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得產(chǎn)物即為化合物ⅲ-2(12.5g，71％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.99(d,j＝6.96hz,1h),7.56(d,j＝2.84hz,1h),6.98(d,j＝2.44hz,1h),6.85-6.82(m,1h),6.46(d,j＝3.64hz,1h),1.66(s,9h)；ms(m-h⁺):m/z＝232.11.

(2)化合物ⅲ-3的合成

將化合物ⅲ-2(3.2g,13.7mmol)溶于20mlch2cl2中，二異丙基乙胺(1.77g,13.7mmol)溶于120ml四氫呋喃中，兩者混合，然后將混合溶液緩慢加入到三光氣(1.3g,4.38mmol)的ch2cl2(100ml)溶液中，室溫下攪拌1h后，將1,4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷(1.72g,13.7mmol)的ch2cl2溶液緩慢加入其中，室溫下反應4h；反應結(jié)束后，加h2o稀釋，用chcl3萃取，收集有機相，用nacl的飽和水溶液洗滌，無水na2so4干燥，除去溶劑得粗產(chǎn)品；用chcl3和ch3oh(90:10)做展開劑過柱分離得產(chǎn)物ⅲ-3(2.4g,45％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(d,j＝7.6hz,1h),7.60(s,1h),7.30(m,1h),7.05(d,j＝8.96hz,1h),6.52(d,j＝3.2hz,1h),4.52-4.41(m,1h),3.89(t,j＝5.48hz,1h),3.78(t,j＝5.68hz,1h),3.20-3.06(m,6h),2.14-2.11(m,2h),1.82-1.72(m,2h),1.66(s,9h)；ms(m+h⁺):m/z＝386.21.

(3)化合物ⅲ-4的合成

將化合物ⅲ-3(2.4g,6.23mmol)溶于20mlch2cl2，待反應液降至0℃后，將10ml三氟乙酸加入其中，然后在30℃條件下攪拌2h；反應結(jié)束后，將反應液濃縮，加水稀釋，用ch2cl2萃取；水相用飽和nahco3溶液調(diào)節(jié)ph至8-9，然后用ch2cl2萃取，無水硫酸鈉干燥，除去溶劑得產(chǎn)物ⅲ-4(360mg,20％)。¹hnmr(400mhz,dmso)δ11.16(s,1h),7.38-7.26(m,3h),6.84(d,j＝8.52hz,1h),6.40(s,1h),4.53-4.33(m,1h),3.95(m,1h),3.79(m,1h),3.30(m,6h),2.20-2.10(m,2h),1.95-1.93(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝286.15.

(4)化合物ⅲ-5的合成

0℃條件下，向化合物ⅲ-4(350mg,1.23mmol)的無水dmf(3ml)溶液中加入氫化鈉(59mg,1.48mmol)，攪拌20min后，將1-氟-2-碘乙烷(321mg,1.85mmol)的無水dmf(3ml)溶液緩慢加入其中，然后在室溫下反應2h；反應結(jié)束后，向其中加入氯化銨溶液稀釋，用乙酸乙酯萃取，收集有機相，用chcl3和ch3oh(95:5,含有20滴氨水)過柱純化得目標物ⅲ-5(50mg,12.3％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36-7.34(m,1h),7.26(d,j＝8.76hz,1h),7.14(d,j＝3.04hz,1h),6.98(d,j＝8.76hz,1h),6.48(d,j＝3.0hz,1h),4.72(t,j＝4.88hz,1h),4.61(t,j＝4.88hz,1h),4.51(m,1h),4.39(t,j＝4.88hz,1h),4.32(t,j＝4.88hz,1h),3.87(t,j＝5.72hz,1h),3.76(t,j＝5.8hz,1h),3.17-3.01(m,6h),2.13-2.10(m,2h),1.80-1.69(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝332.19.

實施例8：合成化合物(簡稱化合物ⅲ-12)

化合物ⅲ-12的合成路線如下：

(1)化合物ⅲ-9的合成

將6-羥基吲哚(ⅲ-8)(10g，75.1mmol)溶于100ml乙腈中，向該溶液中加入二碳酸二叔丁酯(49.2g,225.3mmol)和dmap(917mg,7.51mmol)，室溫下攪拌15h；反應結(jié)束后，將反應液減壓濃縮，加入400ml甲醇溶解，然后再加入k2co3(51.9g,375.5mmol)，室溫下攪拌4h；反應完全后，用ch3cooh調(diào)節(jié)ph至中性，加h2o稀釋，萃取收集有機相(乙酸乙酯作萃取劑)；除去溶劑后，過柱分離(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)得產(chǎn)物ⅲ-9(12.5g，71％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.68(s,1h),7.45(d,j＝3.16hz,1h),7.39(d,j＝8.4hz,1h),6.79(dd,j＝8.4hz,2.2hz,1h),6.48(d,j＝3.68hz,1h)；ms(m-h⁺):m/z＝232.11.

(2)化合物ⅲ-10的合成

將化合物ⅲ-9(3.2g,13.7mmol)溶于20mlch2cl2中，二異丙基乙胺(1.77g,13.7mmol)溶于120ml四氫呋喃中，兩者混合，然后將混合溶液緩慢加入到三光氣(1.3g,4.38mmol)的ch2cl2(100ml)溶液中，室溫下攪拌1h后，將1,4-二氮雜雙環(huán)[3.2.2]壬烷(1.72g,13.7mmol)的ch2cl2溶液緩慢加入其中，室溫下反應4h；反應完全后，加h2o稀釋，用chcl3萃取，收集有機相，用nacl的飽和水溶液洗滌，無水naso4干燥，除去溶劑得粗產(chǎn)品；用chcl3和ch3oh(90:10)做展開劑過柱分離得產(chǎn)物ⅲ-10(2.4g,45％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(s,1h),7.54(d,j＝3hz,1h),7.50(d,j＝8.44hz,1h),7.02(d,j＝8.44hz,1h),6.54(d,j＝3.64hz,1h),4.50-4.40(m,1h),3.85(t,j＝5.64hz,1h),3.77(t,j＝5.8hz,1h),3.18-3.02(m,6h),2.13-2.10(m,2h),1.81-1.70(m,2h),1.65(s,9h)；ms(m+h⁺):m/z＝386.21.

(3)化合物ⅲ-11的合成

將化合物ⅲ-10(2.4g,6.23mmol)溶于20mlch2cl2，待反應液降至0℃后，將10ml三氟乙酸加入其中，然后在30℃條件下攪拌2h；反應結(jié)束后，將反應液濃縮，加水稀釋，用ch2cl2萃??；水相用nahco3的飽和溶液調(diào)節(jié)ph至8-9，然后用ch2cl2萃取，無水naso4干燥，除去溶劑得產(chǎn)物ⅲ-11(360mg,20％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.27(s,1h),7.57(d,j＝8.52hz,1h),7.17(d,j＝2.36hz,1h),6.87(d,j＝8.48hz,1h),6.52(m,1h),4.54-4.44(m,1h),3.90(t,j＝5.72hz,1h),3.80(t,j＝5.72hz,1h),3.22-3.08(m,1h),2.17-2.13(m,2h),1.84-1.74(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝286.16.

(4)化合物ⅲ-12的合成

0℃條件下，向化合物ⅲ-11(350mg,1.23mmol)的無水dmf(3ml)溶液中加入氫化鈉(59mg,1.48mmol)，攪拌20min后，將1-氟-2-碘乙烷(321mg,1.85mmol)的無水dmf(3ml)溶液緩慢加入其中，然后在室溫下反應2h；反應結(jié)束后，向其中加入nh4cl溶液稀釋，用乙酸乙酯萃取，收集有機相，用chcl3和ch3oh(95:5，含有20滴氨水)過柱純化得目標物ⅲ-12(50mg,12.3％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.57(d,j＝8.48hz,1h),7.13-7.11(m,2h),6.90-6.87(m,1h),6.51(d,j＝3.04hz,1h),4.75(t,j＝4.84hz,1h),4.63(t,j＝4.92hz,1h),4.51(m,1h),4.38(t,j＝4.92hz,1h),4.31(t,j＝4.88hz,1h),3.87(t,j＝5.64hz,1h),3.77(t,j＝5.68hz,1h),3.18-3.01(m,6h),2.13-2.10(m,2h),1.81-1.69(m,2h)；ms(m+h⁺):m/z＝332.18.

實施例9：合成化合物(簡稱化合物ⅲ-19)

化合物ⅲ-19的合成路線如下:

(1)化合物ⅲ-15的合成

將化合物ⅲ-14(2g，15.85mmol)，3-溴吡啶(3g，18.99mmol)，pd2(dba)3(320mg,0.35mmol)，rac-binap(660mg，1.06mmol)和叔丁醇鈉(1.83g，19.04mmol)溶于20ml甲苯中，85℃條件下加熱反應16h；反應結(jié)束后，冷卻，減壓濃縮除去溶劑，粗產(chǎn)品用ch2cl2:ch3oh(0.1％nh3·h2o)＝10:1過柱分離得棕色固體即為目標產(chǎn)物ⅲ-15(2.2g，68％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.05(d,j＝2.4hz,1h),7.98(d,j＝4.52hz,1h),7.12-7.09(m,1h),6.90(d,j＝8.28hz,1h),3.43-3.39(m,2h),3.23-3.20(m,2h),3.0025-2.9960(m,2h),2.76-2.72(m,2h),2.50-2.47(m,2h),2.34(s,3h)；ms(m+h⁺):m/z＝204.15.

(2)化合物ⅲ-16的合成

0℃條件下，將化合物ⅲ-15(2.2g,10.82mmol)溶于80ml乙腈中，然后在30min內(nèi)把n-溴代丁二酰亞胺(1.93g，10.82mmol)的乙腈(10ml)溶液逐滴加入其中，攪拌30min后升至室溫；用40ml水淬滅反應，加入ch2cl2(2×40ml)萃取，收集有機相，用nacl的飽和溶液洗滌，無水naso4干燥，減壓濃縮除去溶劑后，粗產(chǎn)品用ch2cl2:ch3oh(0.1％nh3·h2o)＝15:1過柱純化得淺棕色固體即為目標產(chǎn)物ⅲ-16(1.4g，46％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.74(s,1h),7.23(d,j＝8.68hz,1h),6.78(d,j＝8.68hz,1h),3.43-3.39(m,2h),3.18-3.16(m,2h),3.00(m,2h),2.69-2.66(m,2h),2.54-2.51(m,2h),2.34(s,3h)；ms(m+h⁺):m/z＝282.06.

(3)化合物ⅲ-18的合成

將化合物ⅲ-16(1.35g，4.78mmol)，化合物ⅲ-17(1.16g，7.21mmol)和pd2(dba)3(553mg,0.48mmol)溶于40ml1,4-二氧六環(huán)中，攪拌10min后將10ml碳酸鈉(1.93g，18.21mmol)溶液加入其中；將反應體系升溫至115℃，回流2h；反應結(jié)束后，冷卻，向其中加入水/乙酸乙酯(50:50)的混合溶劑；過濾收集固體，用30ml乙酸乙酯洗滌，得淺黃色固體即為目標產(chǎn)物ⅲ-18(1.0g，66％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.23(s,1h),8.16(m,2h),7.81(d,j＝8.48hz,1h),7.63(d,j＝8.68hz,1h),7.44(d,j＝8.52hz,1h),7.22(s,1h),7.03-6.99(m,1h),6.60(s,1h),3.47-3.43(m,2h),3.29-3.27(m,2h),3.01(m,2h),2.79-2.75(m,2h),2.50-2.47(m,2h),2.35(s,3h)；ms(m+h⁺):m/z＝319.19.

(4)化合物ⅲ-19的合成

0℃條件下，將94mg氫化鈉(2.35mmol)加到化合物ⅲ-18(500mg，1.57mmol)的無水dmf(3ml)溶液中，攪拌30min后，將1-氟-2碘乙烷(546mg，3.14mmol)的無水dmf(3ml)溶液緩慢加入其中，移去冰水浴升至室溫，反應2h；反應完全，用nh4cl溶液稀釋反應體系，加入ch2cl2萃取，收集有機相，用ch2cl2:ch3oh(0.1％nh3·h2o)＝15:1過柱分離即得目標產(chǎn)物ⅲ-19(180mg，31％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.16(s,2h),7.85(d,j＝8.6hz,1h),7.64(d,j＝8.64hz,1h),7.37(d,j＝8.64hz,1h),7.16(d,j＝2.8hz,1h),7.03-7.00(m,1h),6.58(d,j＝2.88hz,1h),4.80(t,j＝4.84hz,1h),4.68(t,j＝4.84hz,1h),4.47(t,j＝4.92hz,1h),4.40(t,j＝4.8hz,1h),3.45-3.41(m,2h),3.31-3.29(m,2h),3.05(m,2h),2.88-2.87(m,2h),2.52-2.50(m,2h),2.40(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ147.67,143.13,135.99,135.71,131.92,129.22,128.68,121.21,120.68,120.28,118.62,109.19,102.66,83.21,81.53,63.13,54.49,42.37,41.80；ms(m+h⁺):m/z＝365.21.

實施例10：合成化合物(簡稱化合物ⅲ-24)

化合物ⅲ-24的合成路線如下：

(1)化合物ⅲ-21的合成

將2.22mldiepa(13.4mmol)和化合物ⅲ-14(847mg,6.71mmol)加入到化合物ⅲ-20(1g,6.71mmol)的正辛醇(20ml)溶液中，120℃條件下過夜反應；反應完全后，減壓濃縮除去溶劑，粗產(chǎn)物以ch2cl2:ch3oh(2mnh3·h2o)＝4:1為洗脫劑過柱純化，得白色固體即為目標產(chǎn)物ⅲ-21(1.2g,75％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.165(d,j＝9.36hz,1h),6.656(d,j＝9.4hz,1h),3.72-3.68(m,2h),3.47(m,2h),3.06(m,2h),2.76-2.72(m,2h),2.59-2.57(m,2h),2.366(s,3h)；ms(m+h⁺):m/z＝239.11.

(2)化合物ⅲ-23的合成

室溫下，向化合物ⅲ-21(1.1g,4.61mmol)和ⅲ-22(763mg,5.53mmol)的1,4-二氧六環(huán)(80ml)混合溶液中加入pd2(dba)3(421mg,0.46mmol)和1,3-雙(2，6-二異丙基苯基)氯化咪唑翁(587mg,1.38mmol)；置換氮氣三次后，向其中加入20％na2co3(10ml,18.4mmol)，再次置換氮氣(4次)；氮氣保護，85℃條件下反應19h，反應結(jié)束后，冷卻；向其中加入200ml乙酸乙酯，通過硅藻土過濾；收集濾液，濃縮除去溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)過ch2cl2：ch3oh(2mnh3·h2o)＝9:1過柱純化，得棕褐色固體即為目標產(chǎn)物ⅲ-23(850mg，62％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.596(d,j＝8.2hz,2h),7.231(m,1h),6.722(d,j＝8.24hz,2h),6.388(d,j＝9.44hz,1h),3.72-3.70(m,2h),3.68-3.59(m,2h),3.093(m,2h),2.88-2.86(m,2h),2.67-2.63(m,2h),2.407(s,3h)；ms(m+h⁺):m/z＝297.16.

(3)化合物ⅲ-24的合成

向1-氟-2-碘乙烷(351mg,2.02mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中，依次加入k2co3(652mg,4.72mmol)和化合物ⅲ-23(400mg,1.35mmol)；室溫下攪拌過夜，反應完全后，向其中加入水和乙酸乙酯，分離有機相和水相，水相用乙酸乙酯萃取兩次，收集有機相，用無水na2so4干燥，過濾，除去溶劑；粗產(chǎn)品用ch2cl2:ch3oh(2mnh3·h2o)＝9:1過柱分離，得目標產(chǎn)物ⅲ-24(160mg，34.6％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.947(d,j＝8.68hz,2h),7.587(d,j＝9.4hz,1h),7.014(d,j＝8.72hz,2h),6.751(d,j＝9.4hz,1h),4.844(t,j＝3.92hz,1h),4.726(t,j＝4.08hz,1h),4.304(t,j＝3.96hz,1h),4.234(t,j＝4.16hz,1h),3.76-3.72(m,2h),3.60-3.57(m,2h),3.116(m,2h),2.96-2.90(m,2h),2.60-2.58(m,2h),2.431(s,3h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ158.21,148.87,139.36,133.07,121.35,120.55,120.09,118.33,110.13,82.70,81.01,63.01,54.79,42.25,41.70；ms(m+h⁺):m/z＝343.19.

實施例11：合成放射性配體(簡稱[¹⁸f]ⅱ-15)

[¹⁸f]ⅱ-15的合成路線如下：

將15mgkryptofix222溶于0.7ml無水乙腈中，2mgk2c2o4溶于0.3ml水中，然后將兩者均勻混合配制成1.0mlkryptofix222/k2c2o4淋洗液；用該淋洗液將俘獲在qma柱上的¹⁸f^-淋洗至反應瓶中，100℃條件下用n2流將反應瓶中的溶劑吹干，然后向其中加入0.5ml無水乙腈，再次吹干，該過程反復進行三次，保證充分除去反應瓶中的水分；將標記前體ⅱ-13(2mg)的無水dmso溶液(0.3ml)迅速加入到上述反應瓶中，密封，160℃條件下反應30min；反應結(jié)束后，加入蒸餾水(2×10ml)猝滅反應，用注射器吸取反應液通過提前活化的sep-pakc18固相萃取柱；然后，用2ml乙腈將反應產(chǎn)物從該c18小柱上淋洗下來，收集淋洗液，減壓濃縮除去溶劑，加入適量的乙腈溶解后以乙腈：水(含有0.2％的乙酸銨)＝28:72為流動相進行radio-hplc分離純化，流速為4ml/min，波長為280nm，半制備柱為ods-3型c18反相半制備柱(glsciences,inc.5μm,10mm×250mm)。

經(jīng)過radio-hplc分離純化之后，該放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15的放化純度大于98％，放射性標記率約為13.1％(未經(jīng)衰變校正)；將經(jīng)過純化的[¹⁸f]ⅱ-15和未標記的穩(wěn)定化合物ⅱ-15共注射進行hplc分析，流動相組成為乙腈：水(含0.2％乙酸銨)＝30:70，流速為1ml/min，波長為280nm，分析柱為agelatechnologies，venusilxbpc18(l)，5μm,4.6×250mm；分析結(jié)果如圖1所示，[¹⁸f]ⅱ-15和ⅱ-15的保留時間分別為14.037min和13.466min，兩者的保留時間相匹配，確認了放射性配體的準確性。

實施例12：配體化合物的體外競爭實驗

(1)飽和結(jié)合實驗

a)受體蛋白的制備及其濃度的測定

實驗過程中用到的受體蛋白均是從雌性sd大鼠(180-200g)的大腦中分離提取而得的。將雌性sd大鼠(180-200g)斷頸處死后，迅速取出其大腦置于冰塊上，用冰冷的生理鹽水沖洗血絲后，解剖出大腦皮層(該區(qū)域富集ɑ7nachrs受體蛋白)，置于10倍體積冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液(50mmtris，120mmnacl,5mmkcl,2mmcacl2,1mmmgcl2,ph＝7.4,4℃)中，然后將燒杯放在冰水浴中用手持式組織勻漿機對該混合物進行勻漿30s(設(shè)置為no.6)。將勻漿后的膜溶液分成三等份于50ml離心管中，用低溫高速離心機離心20min(4℃,48000g)，離心完成后棄去上清液，將下層沉淀物溶于10倍體積冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液中，按照同樣的方法對混合物進行勻漿，離心和洗滌。該步驟重復3次之后得到的下層沉淀物即為受體膜蛋白，將其溶于10倍體積冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液中，勻漿使其充分混合均勻。取出10μl混合均勻后的受體膜蛋白溶液，用lowry法測定蛋白的濃度，將剩余的膜溶液分裝于2ml離心管中，放在-80℃的冰箱中保存待用。

b)受體膜蛋白的飽和結(jié)合實驗

飽和結(jié)合實驗是通過測定放射性配體[¹²⁵i]ɑ-銀環(huán)蛇毒素(簡稱：[¹²⁵i]ɑ-bgt)與老鼠大腦膜蛋白的結(jié)合來進行的。實驗中，[¹²⁵i]ɑ-bgt設(shè)置了8個不同的濃度點(0.005-5nm)，每個濃度點平行3組。取出保存于-80℃冰箱中的受體膜蛋白，置于4℃條件下凍融，凍融之后根據(jù)測定的蛋白濃度加入適當體積冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液(50mmtris，120mmnacl,5mmkcl,2mmcacl2,1mmmgcl2,ph＝7.4,4℃)進行稀釋?？偨Y(jié)合管中反應混合物的總體積為500μl，包括100μl膜蛋白溶液(最終每個試管中蛋白的量為1.5mg),10μl不同濃度的放射性配體[¹²⁵i]ɑ-bgt和390μl冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液，加樣順序為：膜蛋白，tris-hcl緩沖溶液和[¹²⁵i]ɑ-bgt(表1)。非特異性結(jié)合是通過2μm非標記的ɑ-bgt來確定的，試管中的反應混合物包括100μl膜蛋白溶液(最終每個試管中蛋白的量為1.5mg),10μl不同濃度的放射性配體[¹²⁵i]ɑ-bgt，100μl2μm的ɑ-bgt和290μl冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液，總體積為500μl，加樣順序為：膜蛋白，tris-hcl緩沖溶液，ɑ-bgt和[¹²⁵i]ɑ-bgt(表2)。加樣結(jié)束后，將試管用封口膜封好，渦旋幾秒使其充分混勻，然后放在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中孵育2.5h，孵育完成后，取出試管將其置于冰水浴中以終止受體蛋白與配體的結(jié)合，然后用48孔細胞收集器將混合液過濾至whatmangf/b濾紙(提前用0.5％的聚乙酰亞胺溶液浸泡2.5h)上，濾紙用5ml冰冷的50mmtris-hcl緩沖溶液沖洗3次，取下濾紙，剪下濾紙片置于測量的pe管中，用γ-counter測定計數(shù)。總結(jié)合(tb)與非特異性結(jié)合(nsb)之間的差值即為特異性結(jié)合(sb)，即sb(cpm)＝tb(cpm)-nsb(cpm)。

表1飽和結(jié)合實驗總結(jié)合管加樣表

表2飽和結(jié)合實驗非特異性結(jié)合管加樣表

c)實驗結(jié)果

飽和結(jié)合實驗中，放射性配體[¹²⁵i]ɑ-bgt設(shè)立8個不同的濃度(0.005-5nm)，每個濃度平行測定3組。實驗結(jié)果顯示，在所測定的濃度范圍內(nèi)，[¹²⁵i]ɑ-bgt與受體膜蛋白的特異性結(jié)合快速達到了飽和，其特異性結(jié)合曲線如圖2所示；根據(jù)特異性結(jié)合曲線及公式log[b/(bmax-b)]＝nhlog[l]-logkd以log[b/(bmax-b)]對log[l]作圖，得到hill直線(如圖3所示)：y＝1.05828x+0.08731(r＝0.99031)，其斜率即為hill系數(shù)nh＝1.058，說明[¹²⁵i]ɑ-bgt與受體膜蛋白的結(jié)合為簡單的單位點作用系統(tǒng)。

根據(jù)單位點作用系統(tǒng)的scatchard方程：b/f＝-b/kd+bmax/kd，以特異性結(jié)合量b對相應的b/f作圖(如圖4所示)，得到線性回歸方程y＝46.42857-1.2987x(r＝1)，根據(jù)該方程得到在本實驗條件下[¹²⁵i]ɑ-bgt的平衡解離常數(shù)為kd＝0.77±0.088nm(95％可信區(qū)間為0.36-1.172nm)，最大結(jié)合量為bmax＝35.75±4.64fmol/mg蛋白質(zhì)(95％可信區(qū)間為29.88-41.62fmol/mg蛋白質(zhì))。該實驗結(jié)果與文獻中報道的數(shù)據(jù)相吻合(kd＝1.5±0.7nm，bmax＝63±17pmol/mg蛋白質(zhì))，說明的本文中所采用的的測定方法是可信的，可以用于待測化合物生物活性的測定。

(2)競爭結(jié)合實驗

a)實驗方法

為了定量測定配體化合物與ɑ7nachrs的親和性，我們進行了以[¹²⁵i]ɑ-bgt為放射性標準品的體外競爭結(jié)合實驗。實驗中，膜蛋白溶液(每個反應管中蛋白的量為1.5mg)與0.4nm的[¹²⁵i]ɑ-bgt溶液及一系列8個不同濃度(每個濃度平行測定3組)的非標記配體溶液在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中共同孵育2.5h，孵育完成后，按照與前述飽和結(jié)合實驗同樣的方法處理并用γ-counter測定計數(shù)。同時，為了確保該實驗體系的準確性和可靠性，以mla(已知的ɑ7nachrs的高選擇性，高親和性配體)為參考配體，測定其與老鼠腦中ɑ7nachrs的親和性。配體化合物的配制方法和加樣方法如下表3和表4所示：

表3配體化合物的配制方法

注：表3只是針對部分濃度范圍在10^-3-10^-10mol/l的化合物的配制方法，對于它化合物在其它濃度范圍例如10^-6-10^-14mol/l、10^-5-10^-13mol/l，參照圖3的方法略作調(diào)整即可。

表4競爭結(jié)合實驗加樣表

注：加樣順序為：蛋白，tris-hcl緩沖溶液，藥物(包括配體化合物及mla)，[¹²⁵i]ɑ-bgt。

b)實驗結(jié)果

為了進行比較，選取mla作為參考配體，在相同的實驗條件下同時測定mla和所設(shè)計的待測化合物對ɑ7nachrs的親和性。

競爭結(jié)合實驗中，參考配體mla和一系列待測化合物設(shè)立8個不同的濃度(除ⅱ-14為10^-6-10^-14mol/l、ⅱ-5為10^-5-10^-13mol/l外，其余化合物為10^-3-10^-10mol/l)，通過抑制0.4nm[¹²⁵i]ɑ-bgt(kd＝0.77±0.088nm)對ɑ7nachrs的結(jié)合測定其ic50值，并通過cheng-prusoff公式(ki＝ic50/(1+[l]/kd))計算得到各自的ki值。測定結(jié)果如表5所示，在該實驗條件下，mla的抑制常數(shù)ki＝2.88±0.78nm，與文獻中報道的ki值(1.09±0.09nm)基本相近，表明了本文中所采用的實驗方法的可行性。

從表5中可以看出，各配體化合物對ɑ7nachr膜蛋白均顯示出親和性，抑制常數(shù)(ki)分布在0.005-450nm范圍內(nèi)，其中化合物ⅱ-14,ⅱ-5,ⅱ-15,ⅱ-6和ⅰ-9對[¹²⁵i]α-bungaratoxin表現(xiàn)出很強的抑制作用，其ki值分別為0.0069±0.004nm,0.064±0.058nm,2.98±1.41nm,7.24±1.02nm和21.76±1.22nm，說明它們對α7nachr具有很高的親和性，尤其是化合物ⅱ-14的親和性(ki＝0.0069±0.004nm)已超越了目前國際上同類配體分子的最高值(ki＝0.023nm)。

表5mla和各待測配體化合物對ɑ7nachrs的體外結(jié)合親和性(ki,nm)^[a]

[a]三次測量平均值±標準偏差

實施例13：體外herg鉀離子通道抑制實驗

a)實驗方法

目前，測定藥物對herg鉀通道抑制作用的方法主要有三種：全自動膜片鉗技術(shù)，傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)和fluxortmthalliumassay。本文中采用傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)測定化合物對herg鉀通道的抑制作用，該方法是心臟毒性研究的公認標準方法，是最準確的測量方法。實驗中，以西沙比利(cisapride，已知對herg鉀通道具有強抑制作用的化合物)作為標準化合物，評價待測配體化合物對herg鉀通道的抑制作用。

37℃條件下，用dmem培養(yǎng)基(含10％胎牛血清和0.8mg/mlg418)培養(yǎng)herg鉀離子通道穩(wěn)定表達的hek293細胞系(creacell)(5％的co2)；經(jīng)過傳代培養(yǎng)后，用tryple^tmexpress溶液對細胞進行分離，然后將3×10³細胞鋪到蓋玻片上，在24孔板中培養(yǎng)18h后檢測細胞的電生理活性，當全細胞記錄的herg電流穩(wěn)定后開始進行藥物檢測；實驗中，每個待測配體化合物設(shè)置4個濃度梯度(0.4μμ-50μμ)，相鄰濃度之間的比例為5，標準化合物西沙比利的濃度范圍為1nm-1μμ，相鄰濃度之間的比例為10；檢測時，每個藥物(包括配體化合物和西沙比利)濃度持續(xù)5min(或持續(xù)作用至電流穩(wěn)定)，然后進入下一個濃度的檢測，藥物溶液通過重力灌流的方法由低濃度向高濃度依次經(jīng)過記錄室作用于細胞，在記錄室中進行液體交換；在進行藥物檢測之前，設(shè)立空白對照組，所有實驗組和對照組獨立重復檢測3次。

b)實驗結(jié)果

數(shù)據(jù)處理時，先用空白對照組的記錄電流對待測藥物每個濃度的作用電流進行校準(待測藥物的尾電流峰值/空白對照的尾電流峰值)，然后計算待測藥物每個濃度對應的抑制率(1-待測藥物的尾電流峰值/空白對照的尾電流峰值)，求得3次重復實驗的平均值和相對標準偏差后，用下列方程計算每個待測化合物的半抑制濃度ic50值：

抑制率＝1/[1+(ic50/c)^h]

其中，c表示待測藥物的濃度，h表示hill系數(shù)；曲線的擬合及ic50值的計算通過igor軟件輔助完成。

標準化合物西沙比利及待測化合物ⅱ-15，ⅱ-14，ⅱ-6，ⅱ-5對herg鉀離子通道的抑制作用結(jié)果如表6和7。實驗結(jié)果顯示，化合物ⅱ-14對herg鉀離子通道幾乎沒有抑制作用(ic50>10μm)，化合物ⅱ-5對herg鉀離子通道具有中度的抑制作用(1μm≤ic50≤10μm)，化合物ⅱ-15和ⅱ-6對herg鉀離子通道具有較強的抑制作用(0.1μm≤ic50≤1μm)，但它們對于該離子通道蛋白的親和性(ic50在460nm-2500nm范圍)遠小于其對于α7nachr膜蛋白的親和性(ic50值在0.21nm-21nm范圍)(見表8)，此外，雖然該測定方法是研究herg毒性最靈敏的方法，但藥物在體內(nèi)對herg鉀電流的抑制作用還與其血液中的濃度等生理因素相關(guān)，因此，這些配體分子可以作為潛在的α7nachr激動劑進行進一步的深入研究。

表6標準化合物西沙比利對herg鉀電流的抑制作用(ic50，nm)

表7化合物ⅱ-15，ⅱ-14，ⅱ-6，ⅱ-5對herg鉀電流的抑制作用(ic50，μm)

表8化合物ⅱ-15，ⅱ-14，ⅱ-6，ⅱ-5對herg鉀離子通道及α7nachr的親和性對比

實施例14：配體化合物ⅱ-15半致死劑量ld50的測定

a)實驗方法

取昆明種小鼠(18-20g)，雌雄各半共計60只，在實驗條件下飼養(yǎng)3天后，禁食不禁水12h，然后對其逐一稱重并記錄，按體重大小隨機分成6組，每組共計10只(雌雄各半)；按照預實驗探索的濃度范圍配制5個不同濃度的溶液和空白對照溶液，實驗組相鄰濃度之間的比例為0.90-0.95，通過尾靜脈注射的給藥方式為各組小鼠注射0.1ml藥品溶液或空白對照溶液；注射完成后將小鼠分濃度分雌雄放置飼養(yǎng)，并在給藥后的0.5h，1h，3h，6h，12h和24h內(nèi)密切觀察并記錄小鼠的反應情況(包括行為活動是否活躍，對刺激的反映情況，飲食情況，是否出現(xiàn)抽搐，癲狂，吐血，步履蹣跚等癥狀)，對出現(xiàn)死亡的小鼠要立即將其解剖觀察各器官的異常情況；以后每天定時觀察，連續(xù)觀察14天，并在給藥后的第2，4，6，8，10，12，14天分別為每組小鼠稱量體重并記錄；計算在觀察期內(nèi)各組小鼠的死亡率，根據(jù)各組的實驗濃度和死亡率計算該化合物對小鼠的半致死劑量ld50。

b)實驗結(jié)果

1.觀察期內(nèi)老鼠的反映情況

實驗中，給藥后出現(xiàn)死亡的老鼠，在觀察階段內(nèi)均出現(xiàn)抽搐現(xiàn)象，部分小鼠出現(xiàn)顫抖，吐血，步履蹣跚，狂躁現(xiàn)象；對死亡的小鼠進行解剖，觀察其各組織器官，均未發(fā)現(xiàn)異常；所有給藥的小鼠，在給藥后的1h內(nèi)，均表現(xiàn)出食欲不振現(xiàn)象，后恢復正常；實驗組存活的小鼠和空白對照組小鼠在觀察期內(nèi)，體重增長正常，各組小鼠的體重變化沒有明顯的濃度組差異和雌雄差異。觀察期內(nèi)老鼠的反應情況記錄如表9所示：

表9觀察期內(nèi)老鼠的反映情況

2.半致死劑量ld50的計算

ld50的計算方法有很多種，其中由bliss創(chuàng)建又經(jīng)后來研究者發(fā)展的加權(quán)概率單位法最精確、嚴謹，成為研究者公認的標準的ld50計算方法。本文將采取該種計算方法求解待測化合物對小鼠的ld50值。

表10化合物ⅱ-15的ld50計算表

注：權(quán)重＝權(quán)重系數(shù)*各組動物數(shù)(n)；

以機率單位y對logd(x)作圖，得到方程y＝14.76x-20.53(如圖5)，當死亡率為50％時，查表得機率單位y為5.00，代入方程計算得x＝m＝logd＝1.73，d＝53.70mg/kg。

標準偏差：其中b＝14.76；

根據(jù)上述公式，計算得標準偏差sm²＝0.0001977577，sm＝0.014；

m±1.96sm＝1.73±0.02744，即1.70256-1.75744；分別求其反對數(shù)，取ld50的95％可信限：50.4150-57.2058mg/kg；因此，化合物ⅱ-15的ld50值為53.70mg/kg。

由上述過程可知，化合物ⅱ-15的半致死劑量ld50值在mg/kg數(shù)量級別，遠遠超出臨床上做一次pet顯像所注射的劑量，因此，將化合物ⅱ-15用¹⁸f標記所得到的放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15的體內(nèi)應用是安全的。

實施例15：[¹⁸f]ⅱ-15脂水分配系數(shù)的測定

大部分神經(jīng)類藥物的研發(fā)都必須考慮其穿越血腦屏障(bbb)的能力，藥物分子能否穿越血腦屏障與其脂溶性的大小緊密相關(guān)。通常情況下，配體分子的脂溶性(logp)數(shù)值在1.0-3.0之間時，認為其可以穿越血腦屏障。

在正辛醇與ph＝7.4的pbs混合體系中測定[¹⁸f]ⅱ-15的脂水分配系數(shù)(logp)，具體實驗方法為，向含有900μlpbs(提前用正辛醇飽和)和1000μl正辛醇(提前用pbs飽和)的10ml離心管中加入100μl10μci放射性配體(生理鹽水溶液)，將混合溶液渦旋5分鐘后，置于離心機上離心5min(7000rmp/min)。離心后分別取100μl有機相和水相于pe試管中，測定放射性計數(shù)，并每組再取100μl有機相于10ml離心管中，加入900μl正辛醇和1000μlpbs，按上述渦旋離心，測定放射性計數(shù)，如此再重復3次，求平均值。logp＝log(有機相計數(shù)/水相計數(shù))

通過測定，得放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15的脂水分配系數(shù)logp值為1.64±0.12，該數(shù)值符合藥物穿越血腦屏障(bbb)進入腦內(nèi)的脂溶性范圍。

實施例16：[¹⁸f]ⅱ-15的體外穩(wěn)定性實驗

放射性配體的體外穩(wěn)定性對其進一步的體內(nèi)研究具有重要意義，通常情況下，體外穩(wěn)定性研究是在生理鹽水和動物血清中進行的。具體方法是：取10μci經(jīng)過hplc純化的放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15與100μl胎牛血清在37℃條件下分別孵育1h和2h，孵育結(jié)束后向其中加入200μl的乙腈使蛋白充分沉淀，然后在4℃條件下離心5min(7000rpm)，收集上清液，經(jīng)濾膜過濾后取100μl進行hplc分析；再取10μci經(jīng)過hplc純化的放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15與100μl生理鹽水在室溫下分別培養(yǎng)1h和2h，然后直接通過hplc進行分析。

放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15的體外穩(wěn)定性實驗結(jié)果如圖6所示，由圖6可以看出，[¹⁸f]ⅱ-15在生理鹽水和胎牛血清中都表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性。37℃條件下，在胎牛血清中孵育1h(圖6中a圖)和2h(圖6中b圖)后，其放化純均大于98％；室溫下，在生理鹽水中培養(yǎng)1h(圖6中c圖)和2h(圖6中d圖)后，其放化純?nèi)源笥?8％。

實施例17：[¹⁸f]ⅱ-15的動物體內(nèi)分布實驗

將經(jīng)過hplc純化的[¹⁸f]ⅱ-15(10μci，溶于0.1ml生理鹽水，含5％dmso)通過尾靜脈注射的方式注入正常昆明種小鼠體內(nèi)(18-22g，雌性，n＝5)，分別在5min，15min，30min，60min，90min時將小鼠斷頭處死，解剖取出血、腦、心、肺、肝、脾、腎、肌肉、骨和尾，稱量各個器官的濕重并用γ-counter測定其計數(shù)，每個組織的攝取情況最終以％id/g表示，％id/g＝id/g÷1％，其中id/g＝組織的放射性計數(shù)(counts)÷組織質(zhì)量(mg)，1％＝每個時相1％id的平均值-尾部放射性計數(shù)/100，該放射性配體的體內(nèi)分布結(jié)果見表11。

表11化合物[¹⁸f]ⅱ-15在雌性昆明種小鼠(18-22g)體內(nèi)的分布情況

表中數(shù)據(jù)為五次測量的平均值±標準偏差；

由表11可以看出，¹⁸f標記的放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15在小鼠腦內(nèi)具有非常高的初始腦攝取，在注射5min后其攝取值即達到8.98±0.41％id/g，15min后顯示出最高的腦攝取值11.60±0.14％id/g；同時，該放射性配體表現(xiàn)出適宜的腦清除速率，在給藥60min、90min后，其腦內(nèi)的攝取值分別降為5.46±0.27％id/g和3.63±0.25％id/g，這表明了該化合物具有適宜的腦內(nèi)動力學性質(zhì)；該結(jié)果與目前已報道的進入臨床實驗的[¹⁸f]asem(其最高的腦攝取值出現(xiàn)在給藥5min后，為7.5％id/g)相比，已表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢。另外，[¹⁸f]ⅱ-15在血液中的攝取值很低，表現(xiàn)出很高的腦/血比值，在5min和15min時分別為9.35和9.57。

放射性配體的體內(nèi)脫氟現(xiàn)象在研究f-18標記的顯像劑的過程中是一個必須考慮的問題，從上表的實驗結(jié)果可以看到，[¹⁸f]ⅱ-15的骨吸收值在研究的時間范圍內(nèi)有所增加，但增加速率和增加幅度并不是很大，這表明該化合物的體內(nèi)脫氟現(xiàn)象比較弱，預計該現(xiàn)象對于放射性配體的體內(nèi)顯像研究并不會產(chǎn)生太大的干擾。此外，在其它的組織器官也有較高的放射性攝取，例如在腎臟和肺部，放射性配體的初始攝取值都很高，但隨著時間的延長其攝取值逐漸降低，清除速率很快。該放射性配體與[¹⁸f]asem相比，具有更好的腦部吸收特性。

實施例18：[¹⁸f]ⅱ-15的腦區(qū)域分布實驗

將經(jīng)過hplc純化的[¹⁸f]ⅱ-15(10μci，溶于0.1ml生理鹽水，含5％dmso)通過尾靜脈注射的方式注入正常昆明種小鼠體內(nèi)(28-32g，雌性，n＝5)，分別在給藥5min，15min，30min，60min，90min時通過頸椎脫臼的方式將小鼠處死，迅速解剖出腦部置于冰上，用冰冷的生理鹽水除去血跡，然后分區(qū)域解剖出皮層、紋狀體、海馬、上下丘、丘腦、小腦和余腦，稱量各個腦區(qū)域的濕重并用γ-counter測定其放射性計數(shù)，每個區(qū)域的放射性配體攝取情況最終以％id/g表示，％id/g＝id/g÷1％，其中id/g＝組織的放射性計數(shù)(counts)÷組織質(zhì)量(mg)，1％＝每個時相1％id的平均值，該放射性配體的腦區(qū)域分布情況見表12。

由表12可以看出，將10μci[¹⁸f]ⅱ-15注入小鼠體內(nèi)后，該放射性配體在α7nachr最為富集的皮層、紋狀體和海馬區(qū)有較高的吸收，并在給藥30min后達到峰值，分別為9.39±0.24％id/g，8.37±0.27％id/g和6.31±0.82％id/g，在隨后的觀察期內(nèi)，這些區(qū)域的攝取值逐漸下降；中度攝取區(qū)域為上下丘和丘腦，攝取最低的區(qū)域為小腦(小鼠腦內(nèi)α7nachr分布最少的區(qū)域)。該腦區(qū)域分布特點與[¹⁸f]asem相似，并與文獻中報道的α7nachr在體內(nèi)外的分布情況是一致的，而且其在α7nachr密集區(qū)域的攝取值與[¹⁸f]asem相比具有一定的優(yōu)勢：[¹⁸f]asem在給藥后5min時達到吸收的最高值，皮層、紋狀體和海馬區(qū)的攝取值分別為7.2％id/g，6.0％id/g和5.0％id/g。在整個實驗過程中，組織/小腦比值逐漸增加，并在給藥90min后達到了2.5(皮層)，2.9(紋狀體)和3.6(海馬)(表13)，表明了該放射性配體不僅具有較高的腦攝取，而且具有良好的腦區(qū)域選擇性。

表12化合物[¹⁸f]ⅱ-15在雌性昆明種小鼠(28-32g)腦內(nèi)的分布情況

表13[¹⁸f]ⅱ-15在小鼠腦內(nèi)各組織不同時間點的組織/小腦比值

實施例19：[¹⁸f]ⅱ-15的在小鼠腦內(nèi)的選擇性實驗

放射性配體對于α4β2nachr的選擇性是通過提前5min皮下注射1mg/kg的cytisine(金雀花堿)(0.1ml，以等體積的生理鹽水和1,2-丙二醇做溶劑)進行探究的，而對于5-羥色胺受體的選擇性是通過提前10min皮下注射2mg/kg的ondanstron(昂丹司瓊)(0.1ml，以生理鹽水:dmso＝5:1(v:v)做溶劑)來進行的。實驗中，兩組小鼠(n＝5，昆明種雌性，28-30g)通過尾靜脈注射的方式，注射[¹⁸f]ⅱ-150.1ml(60μci)，空白對照組小鼠按照相同的方式注射0.1ml對應的溶劑。給藥60min后，將小鼠斷頸處死，迅速解剖出大腦置于冰上，用冰冷的生理鹽水沖盡血跡后，分區(qū)域解剖出皮層、紋狀體、海馬、上下丘、丘腦、小腦和余腦，測定各個區(qū)域的質(zhì)量及放射性計數(shù)，最終的攝取情況以％id/g表示。

cytisine是α4β2nachr的選擇性激動劑，而ondanstron是5-羥色胺受體的選擇性拮抗劑。由圖7可以看出，放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15在實驗組和對照組的攝取沒有明顯差別。這表明，[¹⁸f]ⅱ-15對于α4β2nachr和5-羥色胺受體幾乎沒有結(jié)合，該放射性配體對于α7nachr具有良好的選擇性。

實施例20：[¹⁸f]ⅱ-15的大鼠pet顯像

通過尾靜脈注射的方式將放射性配體[¹⁸f]ⅱ-15(0.3ml,200μci)注射入雌性cd-1大鼠(180-200g)體內(nèi)，然后用3％的異氟烷將老鼠麻醉至昏迷后，以俯臥的姿勢將老鼠固定于小動物micro-pet/ct顯像儀上(superarguspet4rl/ct180)，掃描顯像過程中采用1％的異氟烷維持老鼠處于麻醉狀態(tài)。分別在給藥15min,30min和60min后進行圖像采集，觀察[¹⁸f]ⅱ-15在老鼠腦內(nèi)的分布情況。

圖8分別為雌性cd-1大鼠在注射[¹⁸f]ⅱ-1515min、30min和60min后腦部的冠狀、矢狀、軸狀micro-pet顯像圖。由圖8可以看出，[¹⁸f]ⅱ-15在老鼠腦內(nèi)有較高的攝取，其在腦內(nèi)的分布情況基本與動物體內(nèi)分布實驗結(jié)果保持一致，15min時攝取最高，隨著時間的延長，放射性配體的濃度逐漸降低，同時，在腦內(nèi)的滯留較為適宜，在給藥60min后依然可以觀察到一定濃度的富集。根據(jù)上述良好的顯像結(jié)果，[¹⁸f]ⅱ-15適合作為α7nachrpet顯像劑。

以上對本發(fā)明所提供的α7煙堿型乙酰膽堿受體的配體化合物及其應用進行了詳細介紹。本文中應用了具體實施例對本發(fā)明的原理及實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其中心思想。應當指出，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護。