本發(fā)明涉及一種紫杉醇類化合物及其合成方法。特別涉及c-13和c-14位改造的紫杉醇類似物及其制備方法。
技術(shù)背景
紫杉醇(paclitaxol，商品名taxol)是從紅豆杉屬(taxus)植物中分離提取的一種具有獨(dú)特抗癌活性的新型抗癌藥。其結(jié)構(gòu)如下：
紫杉醇具有復(fù)雜的化學(xué)結(jié)構(gòu),分子由二菇類母核巴卡亭和側(cè)鏈苯異絲氨酸組成。紫杉醇,是從紅豆杉屬植物中提取出的一種具有高效抗腫瘤活性的天然物質(zhì),尤其對(duì)卵巢癌、乳腺癌、肺癌的治療具有較好的抗癌活性。自1992年上市后發(fā)展極其迅速,目前是臨床上普遍采用的一類廣譜抗腫瘤藥物,至今已累計(jì)銷售300億美元,并由此創(chuàng)造了化療藥物的新紀(jì)錄。c-14位改造的一系列紫杉醇類似物，發(fā)現(xiàn)這些化合物在臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)出比紫杉醇更好的性質(zhì)。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)高通量篩選新型化合物生物活性，研究結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系(sar)，豐富藥用樣品資源庫(kù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一在于提供一系列c-13和c-14位結(jié)構(gòu)改造的紫杉醇類化合物。
本發(fā)明的目的之二在于提供該紫杉醇類化合物新的制備方法，且該方法具有較高的產(chǎn)率。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下反應(yīng)合成過(guò)程：
根據(jù)上述反應(yīng)機(jī)理，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種c-13和c-7位結(jié)構(gòu)改造的紫杉醇類化合物，其特征在于該紫杉醇類化合物的結(jié)構(gòu)式為下列四種之一：
一種制備上述的c-13和c-14位結(jié)構(gòu)改造的紫杉醇類化合物的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：
a.將原料1-去羥基巴卡亭vi與水合肼按1：300～400的摩爾比溶于質(zhì)量百分比濃度為95％的酒精中，室溫下攪拌15～18小時(shí)；調(diào)節(jié)體系的ph值為6～7，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相經(jīng)干燥，去除溶劑得粗產(chǎn)物；該粗產(chǎn)物經(jīng)分離純化，得無(wú)色透明晶體7,9,10,13-四去乙?；?1-去氧巴卡亭vi，即化合物2，其結(jié)構(gòu)式為：
b.將步驟a所得化合物2和2,2-二甲氧基丙烷按1:2～5的摩爾比溶于二氯甲烷溶劑中，再加入催化量的蒙脫土k10，在30～50℃溫度下攪拌至反應(yīng)完全；除去催化劑和溶劑后，該粗產(chǎn)物經(jīng)分離純化，得白色固體7,9,10,13-四去乙?；?9,10-o-異亞丙基-1-去氧巴卡亭vi，即化合物3，其結(jié)構(gòu)式為：
c.在n2的保護(hù)下，將步驟b所得的化合物3和咪唑按照摩爾比1:20～25的比例溶于無(wú)水二氯甲烷，完全溶解后，加入化合物3的摩爾數(shù)的2～3倍量的三乙基氯硅烷，繼續(xù)攪拌，室溫反應(yīng)，tlc跟蹤反應(yīng)進(jìn)程；加入水終止反應(yīng)，去除溶劑，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層水洗數(shù)次，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，再經(jīng)分離立春得產(chǎn)物為白色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-1-去氧巴卡亭vi，即化合物4，其結(jié)構(gòu)式為：
d.將步驟c所得的化合物4和n-甲基-n-氧化嗎啉和催化量的四丙基銨過(guò)釕酸鹽按1：11～13的摩爾比溶解于無(wú)水二氯甲烷中，室溫反應(yīng)至原料完全消失；去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色產(chǎn)物7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即化合物5，其結(jié)構(gòu)式為：
e.在惰性氣體保護(hù)下，將步驟d所得的化合物5溶于體積比為3:1的無(wú)水四氫呋喃和n,n-二甲基丙烯基脲混合溶劑中，在-78℃下加入叔丁醇鉀的四氫呋喃混合溶液，45分鐘后再滴加(1s)-(+)-10-樟腦磺啞嗪的四氫呋喃溶液；0.5小時(shí)后用體積比為1:1～1.5的四氫呋喃和醋酸的混合溶液淬滅反應(yīng)；去除溶劑，用乙酸乙酯溶解，有機(jī)相水洗數(shù)次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，粗產(chǎn)品經(jīng)分離提純得到白色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-14-羥基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即化合物6，其結(jié)構(gòu)式為：
所述的化合物5、叔丁醇鉀和(1s)-(+)-10-樟腦磺啞嗪的摩爾比為1:2.5～3:1.5～2；
f.將(2r,3s)-3-苯基異絲氨酸溶于干燥甲苯中，在110℃溫度下，加入原苯甲酸三甲酯，反應(yīng)至原料完全消失，去除溶劑的初產(chǎn)物，該初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色產(chǎn)物(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸甲酯，即化合物7，其結(jié)構(gòu)為：
所述的(2r,3s)-3-苯基異絲氨酸與原苯甲酸三甲酯的摩爾比為1:2.2～2.5；g.將步驟f所得的化合物7溶于甲醇中，在堿性環(huán)境下進(jìn)行脫酯反應(yīng)得到白色固體(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸，即化合物8，其結(jié)構(gòu)為：
h.將步驟e所得化合物6、4-二甲氨基吡啶、化合物8和二環(huán)己基碳二亞胺按照1:1～1.5:2～2.5：2～3的摩爾比溶于無(wú)水甲苯中，攪拌均勻，在室溫下加入，攪拌反應(yīng)至溶液變混濁，加甲醇中止反應(yīng)，去除溶劑后用乙酸乙酯溶解并靜置后，抽濾，濾液用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液濃縮，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-氧化-14β-(4s,5r)-3-?；?2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-5-惡唑啉-1-去羥基巴卡亭vi，即化合物9，其結(jié)構(gòu)式為：
i.將步驟h中的化合物9溶于甲醇中，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液ph＝3～4，在40℃，攪拌反應(yīng)至原料點(diǎn)消失；室溫下，調(diào)節(jié)溶液ph至中性；去除溶劑后用etoac萃取，有機(jī)層水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇衍生物a,其結(jié)構(gòu)式為：
j.在惰性氣氛保護(hù)下，將步驟e所得化合物6和cis-1-叔丁氧羰基-3-(1-乙氧乙氧基)-4-苯基-吖叮啶酮按摩爾比1:2～2.5溶于四氫呋喃中，攪拌均勻，在-30℃下滴加雙(三甲基硅基)氨基和四氫呋喃溶液，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失，加入飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，用乙醚萃取，將有機(jī)層用鹽水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑得到中間體產(chǎn)物；將該中間體產(chǎn)物繼續(xù)溶于甲醇中，攪拌均勻，在室溫下調(diào)節(jié)溶液ph＝3～4，在60℃，攪拌反應(yīng)至原料點(diǎn)消失，冷至室溫，調(diào)節(jié)溶液ph值至中性；去除溶劑后用etoac萃取，有機(jī)層用水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧多烯紫杉醇衍生物，即為化合物b,其結(jié)構(gòu)式為：
其中化合物6與雙(三甲基硅基)氨基鈉的摩爾比為1:1.5～1.8；
k.將步驟e中的化合物6和二異丙基乙胺按照摩爾比1:25～30溶于二氯甲烷中，攪拌均勻，滴加氯甲基甲醚，繼續(xù)攪拌，室溫反應(yīng)3小時(shí)，加入飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，調(diào)節(jié)溶液ph至中性，用二氯甲烷萃取數(shù)次，有機(jī)層水洗，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-14-甲氧甲氧基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物10，其結(jié)構(gòu)式：
所述的化合物6與氯甲基甲醚的摩爾比為1:20～25；
l.將硼氫化鈉溶于無(wú)水乙醇中，在冰水浴下攪拌均勻，滴加化合物10的四氫呋喃溶液，繼續(xù)攪拌12小時(shí)，再加入體積比為1:4～6的丙酮和飽和nh4cl水溶液的混合溶液中止反應(yīng)，去除溶劑，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層水洗，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-羥基-14-甲氧甲氧基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物11，其結(jié)構(gòu)為：
所述的硼氫化鈉與化合物10的摩爾比為1:0.125～0.212；
m.步驟l所得化合物11、4-二甲氨基吡啶、(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸和二環(huán)己基碳二亞胺按照1：1～1.5：2～2.8：2～2.5的摩爾比溶于干燥5～8ml甲苯中，攪拌反應(yīng)至原料點(diǎn)消失，加甲醇中止反應(yīng)，去除溶劑后用etoac溶解并靜置后，抽濾，濾液濃縮后，再加入30～50ml的乙酸乙酯，再用10～20ml的水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，得到中間體產(chǎn)物；將該中間體產(chǎn)物繼續(xù)溶于5～8ml甲醇中，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液ph＝3～4，60℃，攪拌反應(yīng)至原料點(diǎn)消失，室溫下調(diào)節(jié)溶液ph至中性；去除溶劑后用20～30mletoac萃取，有機(jī)層用10～20ml水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體10-去乙?；?9,10-o-異亞丙基-9(r)-氫化-14-甲氧甲氧基-1-去羥基紫杉醇,即化合物c,其結(jié)構(gòu)為：
n.將步驟e所得化合物6和n-甲基-n-氧化嗎啉和催化量的四丙基銨過(guò)釕酸鹽按1：11.9～15的摩爾比溶解在無(wú)水二氯甲烷中，攪拌反應(yīng)至原料完全消失；去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得黃色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13,14-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物12，其結(jié)構(gòu)式：
o.將硼氫化鈉溶于無(wú)水乙醇中，在冰水浴下攪拌均勻，滴加化合物12的四氫呋喃溶液，繼續(xù)攪拌反應(yīng)12小時(shí)，加入體積比為1:4～8的丙酮和飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，去除溶劑，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層水洗，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-羥基-14-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物13，其結(jié)構(gòu)式為：
p.將步驟o所得化合物13，4-二甲氨基吡啶、(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸和二環(huán)己基碳二亞胺按照摩爾比1：1～2：2～4：2～4溶于甲苯中，攪拌均勻反應(yīng)至原料點(diǎn)消失；加甲醇中止反應(yīng)，去除溶劑后用etoac溶解并靜置后，抽濾，濾液濃縮，用乙酸乙酯萃取，再用水洗后，用無(wú)水硫酸鎂干燥，得到中間體產(chǎn)物；將中間體產(chǎn)物繼續(xù)溶于甲醇中，攪拌均勻，在室溫下調(diào)節(jié)溶液ph＝3～4，60℃下攪拌反應(yīng)至原料點(diǎn)消失,室溫下，調(diào)節(jié)溶液ph至中性；去除溶劑后用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)分離提純得白色固體10-去乙?；?9,10-o-異亞丙基-9(r)-氫化-14-氧化-1-去羥基-12,13-異紫杉醇，即為化合物d,其結(jié)構(gòu)式為：
上述步驟g的具體步驟為：將步驟f所得的化合物7溶于甲醇中和氫氧化鈉摩爾比為1:1.55～1.86的混合溶液中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)到新點(diǎn)的生成，再用5％的鹽酸溶液淬滅反應(yīng)，調(diào)節(jié)ph為6，去除溶劑，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，去除溶劑,得到白色固體(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸，即化合物8。
上述的c-13和c-7位結(jié)構(gòu)改造的紫杉醇類化合物在制備抑制a549肺癌細(xì)胞、a2780卵巢癌細(xì)胞或hl-60前髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞的體外增殖藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的1-去羥基巴卡亭vi紫杉烷在其c-13和c-14位引入取代基，保留紫杉烷類的環(huán)骨架和必要的官能團(tuán)，豐富了該類化合物，所得化合物具有天然紫杉醇的抗癌生物活性，且在降低天然紫杉醇的毒副作用方面具有一定的應(yīng)用前景，同時(shí)也為研究這類化合物的活性構(gòu)效關(guān)系鑒定了非常有意義的基礎(chǔ)。
具體實(shí)施方法
實(shí)施例一:制備化合物14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇衍生物a，該化合物的結(jié)構(gòu)式為：
a.1-去羥基巴卡亭vi1(419mg,0.6mmol)溶于20ml95％酒精中，加入10ml水合肼，室溫下攪拌15小時(shí)。用0.2n稀鹽酸中和，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用飽和食鹽水洗三次，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑。粗產(chǎn)物用甲醇和正己烷重結(jié)晶，得無(wú)色透明晶體7,9,10,13-四去乙酰基-1-去氧巴卡亭vi2為227mg，產(chǎn)率為87％；
1hnmr(500mhz,cdcl3)δ1.01(s,3h),1.59(s,6h),1.64-1.67(m,2h),1.72(dd,j＝8.7and0.8hz,1h),1.84(s,3h),2.15(s,3h),2.26-2.37(m,2h),2.87(d,j＝5.3hz,1h),3.95(d,j＝8.0hz,1h),4.01-4.08(br,1h),4.15(d,j＝8.0hz,1h),4.22(t,j＝8.2and8.4hz,1h),4.26-4.45(m,2h),4.68(d,j＝10.4hz,1h),4.90(d,j＝9.1hz,1h),4.99(d,j＝4.6hz,1h),5.58(dd,j＝4.4and1.7hz,1h),6.08(br,1h),6.27(br,1h),7.58(m,2h),7.69(m,1h),8.02(d,j＝7.4hz,2h)；13cnmr(125mhz,cdcl3)δ13.0,15.5,23.0,27.0,30.3,32.1,37.8,38.1,43.8,44.2,47.6,65.6,70.8,72.2,73.4,76.2,78.9,81.0,83.7,129.3,129.7,130.0,134.0,136.2,138.4,164.8,169.5；esi-ms:m/z553[m+na]+.
b.化合物2(239mg,0.5mmol)溶于18ml二氯甲烷和1.5ml甲醇，完全溶解后再加入2,2-二甲氧基丙烷(0.4ml,2.0mmol)，攪拌均勻，再加入montk10為24mg，室溫下攪拌0.5小時(shí)；減壓蒸餾除去低沸點(diǎn)的溶劑，較多的乙酸乙酯溶解后，抽濾除去montk10固體粉末，濾液水洗數(shù)次，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾除去溶劑。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯重結(jié)晶，得7,13-二去乙?；?9,10-o-異亞丙基-1-去氧巴卡亭vi3為236mg，產(chǎn)率為92％；
1hnmr(500mhz,cdcl3)δ1.09(s,3h),1.52(s,6h),1.54-1.57(m,1h),1.70(s,3h),1.75(s,3h),1.85-1.88(m,1h),1.91(d,j＝8.7hz,1h),2.04(s,3h),2.10(d,j＝7.6hz,1h),2.26(s,3h),2.58-2.61(m,2h),2.81(d,j＝5.4hz,1h),4.14(d,j＝8.3hz,1h),4.31(t,j＝8.7and8.4hz,1h),4.36(d,j＝8.3hz,1h),4.54(d,j＝9.9hz,1h),4.63(br,d,j＝8.5hz,1h),4.92(d,j＝8.7hz,1h),5.03(d,j＝9.9hz,1h),5.08(s,1h),5.78(dd,j＝5.4and2.0hz,1h),7.48(t,j＝7.7hz,2h),7.60(t,j＝7.4hz,1h),8.08(dd,j＝8.1and1.3hz,2h)；13cnmr(125mhz,cdcl3)δ12.9,15.7,22.9,25.8,26.9,27.1,30.5,31.7,36.8,38.2,41.7,42.5,47.6,67.7,71.6,72.2,74.8,76.5,81.8,83.8,84.6,107.3,128.6,129.8,132.7,133.5,143.2,165.1,171.5；esi-ms:m/z571[m+h]+.
c.在n2的保護(hù)下，化合物3(36.0mg，0.068mmol)和咪唑(92.5mg，1.360mmol)溶于2.5mlch2cl2，完全溶解后，加入tescl(0.0225ml，0.136mmol)，繼續(xù)攪拌，室溫反應(yīng)，tlc跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。加入適量的水終止反應(yīng)，減壓蒸除低沸點(diǎn)溶劑，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層水洗數(shù)次，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝5:1)得白色產(chǎn)物7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-1-去氧巴卡亭vi，即為化合物4為21.8mg,產(chǎn)率為50％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.68-0.80(m,6h),0.98(s,3h),1.03(t,j＝7.9hz,9h),1.51(s,6h),1.54(s,3h),1.67(s,3h),1.80(d,j＝5.3hz,1h),1.88-1.99(m,4h),2.36(d,j＝16.0hz,1h),2.39-2.49(m,2h),2.50-2.67(m,1h),3.72(s,1h),4.01(dd,j＝10.7,7.1hz,1h),4.24(d,j＝7.6hz,1h),4.35(d,j＝7.8hz,1h),4.41(t,j＝10.6hz,2h),4.69(dd,j＝9.3,3.0hz,1h),4.94(s,1h),4.98(d,j＝9.6hz,1h),5.62-5.89(m,1h),7.45(t,j＝7.7hz,2h),7.56(t,j＝7.4hz,1h),8.10(d,j＝7.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm4.6,6.8,12.3,18.4,24.4,26.9,27.0,30.6,34.3,36.6,37.3,42.1,45.6,46.5,68.5,70.1,72.1,74.7,75.4,78.9,83.4,88.3,107.6,128.5,129.8,130.0,133.3,135.4,142.1,165.3.
d.化合物4(30.0mg，0.044mmol)溶解于3ml無(wú)水二氯甲烷中，加n-甲基-n-氧化嗎啉(nmo,60.0mg,0.512mmol)和催化量的四丙基銨過(guò)釕酸鹽(tpap),室溫反應(yīng)20分鐘，tlc跟蹤原料完全消失。減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得產(chǎn)物7,9,10,13-四去乙酰基-7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi為28.8mg，即化合物5產(chǎn)率為96％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.64(dq,j＝8.2,7.9,2.4hz,6h),0.99(t,j＝7.9hz,9h),1.21(s,3h),1.50(s,3h),1.53(s,3h),1.62(s,3h),1.83(s,3h),1.84-1.89(m,1h),1.99(s,3h),2.20(s,3h),2.45(d,j＝20.0hz,1h),2.49-2.60(m,1h),2.78(dd,j＝19.9,6.7hz,1h),2.84(d,j＝4.8hz,1h),4.13(d,j＝8.2hz,1h),4.28(dd,j＝8.6,7.7hz,1h),4.40(d,j＝8.5hz,1h),4.43(d,j＝9.6hz,1h),4.86(d,j＝8.3hz,1h),4.92(d,j＝9.5hz,1h),5.95(dd,j＝5.0,1.9hz,1h),7.49(t,j＝7.8hz,2h),7.62(t,j＝7.4hz,1h),8.06(d,j＝7.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm5.8,7.1,12.8,14.2,21.9,25.4,27.1,28.1,29.7,35.4,37.6,38.6,38.7,41.5,44.2,48.1,69.9,72.1,75.4,76.3,80.9,82.3,84.4,107.8,128.7,129.4,129.8,133.7,138.0,153.4,165.0,170.0,198.2.
e.在n2保護(hù)下，化合物5(25.0mg，0.037mmol)溶于1ml的無(wú)水四氫呋喃和0.37ml的dmpu，轉(zhuǎn)移至-78℃的低溫裝置，15分鐘后加1m的t-buok的四氫呋喃溶液(0.1ml，0.100mmol)，45分鐘后再滴加(1s)-(+)-10-樟腦磺啞嗪的四氫呋喃溶液(12.9mg,0.056mmol)。tlc跟蹤反應(yīng)，觀察到新點(diǎn)的生成，0.5小時(shí)后用四氫呋喃和醋酸(1:1)溶液淬滅反應(yīng)。減壓蒸除低沸點(diǎn)的溶劑，用乙酸乙酯溶解，有機(jī)相水洗數(shù)次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，粗產(chǎn)品經(jīng)柱層析慢速分離提純(薄層層析硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:4)得到白色固體7,9,10,13-四去乙酰基-7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-14-羥基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即化合物6為17.3mg，產(chǎn)率為67％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.64(dq,j＝8.1,7.9,2.5hz,6h),0.99(t,j＝7.9hz,9h),1.19(s,3h),1.49(s,3h),1.52(s,3h),1.63(s,3h),1.81(s,3h),1.85-1.90(m,1h),2.04(s,3h),2.11(d,j＝2.4hz,1h),2.12(s,3h),2.46-2.58(m,1h),2.79(d,j＝5.1hz,1h),3.15(s,1h),3.92(s,1h),4.15(d,j＝8.3hz,1h),4.26(t,j＝8.1hz,1h),4.41(d,j＝8.4hz,1h),4.43(d,j＝9.5hz,1h),4.84(d,j＝8.1hz,1h),4.87(d,j＝9.5hz,1h),5.97(dd,j＝5.3,2.6hz,1h),7.48(t,j＝7.8hz,2h),7.60(t,j＝7.4hz,1h),8.08(d,j＝7.2hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm6.0,7.2,13.0,13.9,21.8,25.5,27.2,28.2,37.9,38.3,38.7,42.5,44.4,53.6,69.6,72.1,73.0,75.0,76.4,81.3,82.7,84.6,108.0,128.8,129.5,130.0,133.8,135.3,156.2,165.2,170.1,202.3.
f.將(2r,3s)-3-苯基異絲氨酸(2.87g,0.013mol)溶于50ml的干燥甲苯中，將溫度提高到110℃，然后再加入原苯甲酸三甲酯(5ml,0.029mol)，反應(yīng)8小時(shí)后，tlc跟蹤原料完全消失。減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝8:1)得白色產(chǎn)物(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸甲酯，即化合物7，產(chǎn)率為66％。
1hnmr(200mhz):δh3.90(3hs),4.96(1h,d,j＝6.5hz,),5.50(1h,d,j＝6.5hz,),7.30–7.62(8h,m),8.10–8.20(2h,m)；13cnmr(cdcl3,50mhz):δc52.68,74.59,83.07,126.39,126.72,127.97,128.15,128.22,128.39,128.64,128.79,131.86,141.04,163.89,170.55.
g.將f所得的化合物6(1.52g,0.0054mol)溶于8ml的甲醇中，再將氫氧化鈉(0.33g,0.00835mol)溶于20ml甲醇和0.5ml水的混合溶液中，室溫?cái)嚢?，反?yīng)大約5個(gè)小時(shí)，tlc跟蹤反應(yīng)，觀察到新點(diǎn)的生成，再用5％的鹽酸溶液淬滅反應(yīng)，調(diào)節(jié)ph為6，減壓蒸除低沸點(diǎn)的溶劑，用乙酸乙酯溶解，有機(jī)相水洗數(shù)次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，得到白色固體(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸，即化合物8，產(chǎn)率為86％。
1hnmr(200mhz,dmso-d6,):δh5.00(1h,d,j＝6.4hz,),5.41(1hd,j＝6.4hz,),7.20–7.70(8h,m),7.90–8.10(2h,m)；13cnmr(dmso-d6,500mhz)δc73.78,82.42,12653,126.64,127.79,128.18,128.71,128.80,132.09,141.54,162.86,171.45.
h.化合物6(35.0mg,0.050mmol)，dmap(6.1mg,0.050mmol)和化合物8(26.7mg,0.100mmol)溶于2ml甲苯中，攪拌均勻，在室溫下加入dcc(20.6mg,0.100mmol)，約2分鐘后溶液變混濁，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失。加適量甲醇中止反應(yīng)，減壓蒸除溶劑后用etoac溶解并靜置，有大量固體析出，抽濾，濾液濃縮，反復(fù)數(shù)次后再將有機(jī)層水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得白色固體7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-氧化-14β-(4s,5r)-3-?；?2-(4-甲氧基苯基)-4-苯基-5-惡唑啉-1-去羥基巴卡亭vi，即化合物9為42.6mg，產(chǎn)率為90％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.60-0.69(m,6h),0.99(t,j＝7.9hz,9h),1.12(s,3h),1.25(s,3h),1.50(s,3h),1.51(s,3h),1.63(s,3h),1.77(s,3h),1.89(ddd,j＝14.8,9.1,1.6hz,1h),2.00(d,j＝2.8hz,1h),2.06(s,3h),2.28(s,3h),2.55(ddd,j＝15.0,8.9,7.7hz,1h),2.97(d,j＝5.3hz,1h),4.12(d,j＝8.4hz,1h),4.32(dd,j＝8.9,7.6hz,1h),4.40(dd,j＝8.9,2.7hz,2h),4.79(d,j＝6.7hz,1h),4.83(d,j＝8.1hz,1h),4.91(d,j＝9.5hz,1h),5.32(d,j＝6.7hz,1h),5.76(s,1h),5.97(dd,j＝5.6,2.9hz,1h),7.05-7.13(m,2h),7.16-7.31(m,2h),7.35-7.55(m,6h),7.62(t,j＝7.4hz,1h),7.98(d,j＝7.1hz,2h),8.13(d,j＝7.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm6.0,7.2,12.8,14.2,14.2,22.2,25.3,27.2,28.3,29.8,32.0,37.9,38.3,38.9,42.8,44.4,54.3,69.1,72.2,72.3,75.2,75.2,76.5,81.0,82.6,82.9,84.7,108.2,126.6,126.8,128.1,128.5,128.6,128.8,128.8,128.9,129.0,129.0,130.3,132.0,134.0,136.1,141.0,155.8,164.0,165.2,168.8,171.6,194.6.
i.化合物9(20.0mg,0.021mmol)溶于1.5ml甲醇中，攪拌均勻，在室溫下加入0.04n的hcl溶液至ph＝3～4，過(guò)程中出現(xiàn)大量白色沉淀。油浴加熱至40℃，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失，反應(yīng)約3小時(shí)。轉(zhuǎn)移至室溫，加入飽和nahco3溶液調(diào)至中性。減壓蒸除甲醇后用etoac萃取三次，有機(jī)層水洗三次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得白色固體14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇衍生物，即化合物a為16.4mg，產(chǎn)率為92％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.89(s,3h),1.54(s,3h),1.55(s,3h),1.63(s,3h),1.69(s,3h),1.83(ddd,j＝15.0,9.6,1.2hz,1h),1.94(d,j＝2.7hz,1h),2.07(s,3h),2.09(s,3h),2.56(dt,j＝15.3,8.9hz,1h),2.89(d,j＝5.3hz,1h),2.96(d,j＝7.5hz,1h),4.07(d,j＝8.5hz,1h),4.26(dd,j＝9.1,8.1hz,1h),4.34(d,j＝8.6hz,1h),4.54(d,j＝9.6hz,1h),4.57-4.65(m,1h),4.78(s,1h),4.83(d,j＝8.9hz,1h),5.01(d,j＝9.6hz,1h),5.52(dd,j＝9.1,4.6hz,1h),5.70(s,1h),5.88(dd,j＝5.4,2.9hz,1h),7.29-7.45(m,8h),7.45-7.57(m,4h),7.75(d,j＝7.1hz,2h),8.05(d,j＝7.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm12.5,14.3,14.3,21.2,21.9,24.2,26.9,27.0,29.8,36.6,37.9,38.3,42.0,42.6,53.5,56.2,60.5,68.5,71.8,72.4,72.8,75.4,76.3,81.2,83.6,84.5,109.1,127.3,127.8,128.4,128.4,128.6,128.7,128.8,130.2,131.9,133.9,134.1,136.1,137.6,155.0,165.2,167.0,171.0,171.2,195.4.hr-ms:calcdforc48h53no13([m+h]+),852.3597,found852.3592
實(shí)施例二:制備化合物14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧多烯紫杉醇衍生物，該化合物的結(jié)構(gòu)式為：
a.在n2保護(hù)下，化合物6(43.0mg,0.062mmol)和cis-1-叔丁氧羰基-3-(1-乙氧乙氧基)-4-苯基-吖叮啶酮(41.3mg,0.123mmol)溶于3ml四氫呋喃中，攪拌均勻，在-30℃下滴加2m雙(三甲基硅基)氨基鈉的四氫呋喃溶液(0.05ml,0.093mmol)，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失，約反應(yīng)0.5小時(shí)。加入飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，用乙醚萃取水相三次，合并有機(jī)相，將有機(jī)層用鹽水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑得到中間體產(chǎn)物。將中間體產(chǎn)物繼續(xù)溶于2ml甲醇中，攪拌均勻，在室溫下加入0.04n的hcl溶液至ph＝3～4，過(guò)程中出現(xiàn)大量白色沉淀。油浴加熱至60℃，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失，約反應(yīng)4小時(shí)。轉(zhuǎn)移至室溫，加入飽和nahco3溶液調(diào)至中性。減壓蒸除甲醇后用etoac萃取三次，有機(jī)層水洗三次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得白色固體14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧多烯紫杉醇衍生物，即為化合物b為25.2mg，產(chǎn)率為48％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm1.26(s,3h),1.37(s,9h),1.57(s,6h),1.67(s,3h),1.78(s,3h),1.84(dd,j＝14.8,9.5hz,1h),1.98(d,j＝1.7hz,1h),2.08(s,3h),2.19(s,3h),2.48-2.70(m,1h),2.79(s,1h),2.93(d,j＝5.2hz,1h),4.10(d,j＝8.9hz,1h),4.30(t,j＝8.7hz,1h),4.37(d,j＝8.5hz,1h),4.40(s,1h),4.59(d,j＝9.5hz,1h),4.81(s,1h),4.86(d,j＝8.9hz,1h),5.02(s,1h),5.06(d,j＝9.5hz,1h),5.62(d,j＝9.4hz,1h),5.68(s,1h),5.93(dd,j＝5.4,2.8hz,1h),7.14-7.35(m,5h),7.46(t,j＝7.7hz,2h),7.59(t,j＝7.3hz,1h),8.08(d,j＝7.5hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm12.5,14.4,21.9,24.3,26.9,27.1,28.3,29.8,36.6,37.9,38.7,42.0,42.7,53.7,56.5,68.7,71.8,72.8,73.0,75.4,76.3,79.8,81.1,83.7,84.5,109.0,127.4,128.0,128.5,128.8,128.8,130.2,134.1,137.8,154.2,155.1,165.2,171.0,171.1,194.3.hr-ms:calcdforc46h57no14([m+h]+),848.3859,found848.3865
實(shí)施例三:制備化合物10-去乙?；?9,10-o-異亞丙基-9(r)-氫化-14-甲氧甲氧基-1-去羥基紫杉醇，該化合物的結(jié)構(gòu)式為：
a.化合物6(85.0mg，0.122mmol)和二異丙基乙胺(0.5ml，3.050mmol)溶于4mlch2cl2中，攪拌均勻，滴加氯甲基甲醚(0.18ml，2.440mmol)，繼續(xù)攪拌，室溫反應(yīng)，tlc跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，3小時(shí)后反應(yīng)完全。加入飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，加入飽和nahco3溶液調(diào)至中性，用ch2cl2萃取數(shù)次，有機(jī)層水洗數(shù)次，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得白色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-14-甲氧甲氧基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物10為85.1mg，產(chǎn)率為94％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.59-0.67(m,6h),0.98(t,j＝7.9hz,9h),1.26(s,3h),1.49(s,3h),1.51(s,3h),1.60(s,3h),1.81(s,3h),1.86(ddd,j＝14.8,8.8,1.4hz,1h),2.01(s,3h),2.06(d,j＝2.5hz,1h),2.21(s,3h),2.44-2.65(m,1h),2.85(d,j＝5.4hz,1h),3.23(s,3h),4.06(s,1h),4.11(d,j＝8.6hz,1h),4.26(t,j＝8.1hz,1h),4.40(d,j＝4.1hz,1h),4.42(d,j＝2.5hz,1h),4.50(d,j＝7.0hz,1h),4.74(d,j＝7.0hz,1h),4.82(d,j＝8.3hz,1h),4.88(d,j＝9.5hz,1h),5.95(dd,j＝5.4,2.7hz,1h),7.49(t,j＝7.8hz,2h),7.61(t,j＝7.4hz,1h),8.13(d,j＝7.3hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm5.9,7.2,12.9,14.1,21.7,25.4,27.2,28.2,37.9,38.8,38.9,42.4,44.4,54.9,55.9,69.3,72.0,74.1,75.3,76.5,81.0,82.5,84.6,95.5,108.0,128.7,129.1,130.1,133.9,136.6,155.0,165.1,170.6,198.4.
b.將nabh4(26.5mg，0.701mmol)溶于2.5ml無(wú)水乙醇，在冰水浴下攪拌均勻，滴加化合物10(65.0mg，0.088mmol)的四氫呋喃溶液，繼續(xù)攪拌12小時(shí)。加入0.5ml丙酮和2ml飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，減壓蒸除低沸點(diǎn)溶劑，用乙酸乙酯萃取數(shù)次，有機(jī)層水洗數(shù)次，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得得白色固體7,9,10,13-四去乙酰基-7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-羥基-14-甲氧甲氧基-13-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物11為42.5mg，產(chǎn)率為65％。
1hnmr(500mhz,(cd3)2co):δppm0.60-0.69(m,6h),1.00(t,j＝7.9hz,9h),1.21(s,3h),1.41(s,3h),1.41(s,3h),1.58(s,3h),1.62(s,3h),1.72(s,3h),1.79(ddd,j＝15.0,7.0,1.7hz,1h),1.83(d,j＝1.3hz,1h),2.30(s,3h),2.43(s,1h),2.52(td,j＝14.9,7.4hz,1h),2.81(d,j＝4.8hz,1h),3.18(s,3h),3.99(d,j＝10.0hz,1h),4.11(d,j＝7.9hz,1h),4.25(t,j＝7.2hz,1h),4.33(s,1h),4.38(d,j＝7.9hz,1h),4.41(d,j＝10.0hz,1h),4.49(d,j＝6.7hz,1h),4.59(d,j＝6.7hz,1h),4.90(d,j＝7.0hz,1h),5.94(dd,j＝5.0,2.2hz,1h),6.47(s,1h),7.57(t,j＝7.7hz,2h),7.68(t,j＝7.4hz,1h),8.18(d,j＝7.2hz,2h)；13cnmr(125hz,(cd3)2co):δppm6.4,7.4,14.4,15.0,22.6,26.1,27.8,28.6,35.1,36.9,39.2,42.2,43.0,50.9,55.4,55.6,70.7,71.4,73.6,76.9,77.3,80.7,83.7,85.1,96.7,104.6,108.6,127.3,128.9,129.5,130.6,130.8,134.3,147.3,165.5,170.3.
c.化合物11(18.0mg,0.024mmol)，dmap(2.9mg,0.024mmol)和(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸(12.8mg,0.048mmol)溶于1.5ml甲苯中，攪拌均勻，在室溫下加入dcc(9.9mg,0.048mmol)，約2分鐘后溶液變混濁，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失。加適量甲醇中止反應(yīng)，減壓蒸除溶劑后用etoac溶解并靜置，有大量固體析出，抽濾，濾液濃縮，反復(fù)數(shù)次后再將有機(jī)層水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，得到中間體產(chǎn)物。將中間體產(chǎn)物繼續(xù)溶于1.5ml甲醇中，攪拌均勻，在室溫下加入0.04n的hcl溶液至ph＝3～4，過(guò)程中出現(xiàn)大量白色沉淀。油浴加熱至60℃，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失，反應(yīng)約4小時(shí)。轉(zhuǎn)移至室溫，加入飽和nahco3溶液調(diào)至中性。減壓蒸除甲醇后用etoac萃取三次，有機(jī)層水洗三次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得白色固體10-去乙酰基-9,10-o-異亞丙基-9(r)-氫化-14-甲氧甲氧基-1-去羥基紫杉醇,即化合物c為7.1mg，產(chǎn)率為33％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm1.33(s,3h),1.44(s,3h),1.45(s,6h),1.58(s,3h),1.67(s,3h),1.85(ddd,j＝15.2,8.9,0.9hz,1h),1.96(d,j＝1.6hz,1h),2.38-2.68(m,5h),2.97(s,3h),3.87(s,1h),4.06(d,j＝10.1hz,1h),4.10(d,j＝7.4hz,1h),4.19(d,j＝8.5hz,1h),4.22(d,j＝6.6hz,1h),4.27(s,1h),4.39(d,j＝6.6hz,1h),4.48(d,j＝8.3hz,1h),4.57(d,j＝10.1hz,1h),4.78(d,j＝2.5hz,1h),4.93(d,j＝8.6hz,1h),5.13(s,1h),5.71(dd,j＝8.5,2.5hz,1h),5.83(dd,j＝5.2,2.2hz,1h),7.29-7.55(m,11h),7.61(t,j＝7.4hz,1h),7.85(d,j＝7.1hz,2h),8.10(d,j＝7.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm12.7,14.3,16.0,22.9,24.7,26.9,27.3,29.8,34.5,35.9,36.8,40.9,41.7,50.2,54.9,55.1,55.6,69.3,70.9,73.0,74.7,75.9,76.7,77.3,81.2,84.2,84.6,96.4,105.4,127.0,127.3,128.0,128.2,128.7,128.8,129.0,129.4,130.0,132.1,133.8,138.6,143.1,165.2,167.1,169.6,170.5.hr-ms:calcdforc50h59no14([m+h]+),898.4016,found898.4020
實(shí)施例四:制備化合物10-去乙?；?9,10-o-異亞丙基-9(r)-氫化-14-氧化-1-去羥基-12,13-異紫杉醇，該化合物的結(jié)構(gòu)式為：
a.化合物6(85.0mg，0.122mmol)溶解于3ml無(wú)水二氯甲烷中，加n-甲基-n-氧化嗎啉(nmo,170.0mg,1.451mmol)和催化量的四丙基銨過(guò)釕酸鹽(tpap),室溫反應(yīng)20分鐘，tlc跟蹤原料完全消失。減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得黃色固體7,9,10,13-四去乙?；?7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13,14-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物12為76.3mg，產(chǎn)率為98％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.63(td,j＝8.1,5.1hz,6h),0.99(t,j＝7.9hz,9h),1.32(s,3h),1.53(s,3h),1.55(s,3h),1.59(s,3h),1.84(s,3h),1.84-1.90(m,1h),2.08(s,3h),2.14(s,3h),2.52(td,j＝15.6,7.9hz,1h),2.78(d,j＝2.4hz,1h),3.06(d,j＝4.9hz,1h),4.11(d,j＝8.3hz,1h),4.27(t,j＝7.8hz,1h),4.34(d,j＝8.2hz,1h),4.46(d,j＝9.3hz,1h),4.76(d,j＝7.6hz,1h),4.97(d,j＝9.3hz,1h),5.99(dd,j＝4.8,3.0hz,1h),7.51(t,j＝7.7hz,2h),7.63(t,j＝7.4hz,1h),8.12(d,j＝7.3hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm5.9,7.2,13.1,14.4,22.0,25.5,27.1,28.1,38.7,39.2,39.8,41.9,44.5,61.9,68.9,71.6,75.5,76.5,80.1,83.2,84.5,108.4,128.8,129.2,130.2,134.0,138.5,158.5,165.4,171.3,182.2,194.5.
b.將nabh4(25.1mg，0.664mmol)溶于2.5ml無(wú)水乙醇，在冰水浴下攪拌均勻，滴加化合物12(58.0mg，0.083mmol)的四氫呋喃溶液，繼續(xù)攪拌12小時(shí)。加入0.5ml丙酮和2ml飽和nh4cl水溶液中止反應(yīng)，減壓蒸除低沸點(diǎn)溶劑，用乙酸乙酯萃取數(shù)次，有機(jī)層水洗數(shù)次，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得白色固體7,9,10,13-四去乙酰基-7-三乙基硅-9,10-o-異亞丙基-13-羥基-14-氧化-1-去羥基巴卡亭vi，即為化合物13為39.4mg，產(chǎn)率為68％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm0.57-0.65(m,6h),0.96(t,j＝7.9hz,9h),1.10(s,3h),1.45(s,3h),1.46(s,3h),1.61(s,3h),1.64(s,3h),1.88(ddd,j＝15.3,6.1,2.3hz,1h),1.98(s,3h),2.20(s,3h),2.33(d,j＝2.0hz,1h),2.44(td,j＝15.2,6.9hz,1h),2.74(s,1h),2.82(d,j＝4.3hz,1h),3.99(d,j＝9.9hz,1h),4.15-4.26(m,2h),4.41(d,j＝8.0hz,1h),4.49(d,j＝9.9hz,1h),4.88(dd,j＝6.4,2.0hz,1h),5.90(s,1h),5.99(dd,j＝4.8,2.2hz,1h),7.48(t,j＝7.8hz,2h),7.60(t,j＝7.4hz,1h),8.10(d,j＝8.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm5.8,7.2,14.7,16.2,22.6,25.3,27.4,28.1,29.8,34.8,36.9,38.0,41.4,42.7,51.4,60.3,68.9,69.6,76.2,76.8,79.9,83.1,84.8,104.8,128.7,128.8,129.7,130.1,133.7,146.3,165.5,169.8,193.5.
c.化合物13(34.0mg,0.049mmol)，dmap(6.0mg,0.049mmol)和化合物(4s,5r)-2,4-二苯基噁唑-5-甲酸(26.2mg,0.098mmol)溶于1.5ml甲苯中，攪拌均勻，在室溫下加入dcc(20.2mg,0.098mmol)，約2分鐘后溶液變混濁，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失。加適量甲醇中止反應(yīng)，減壓蒸除溶劑后用etoac溶解并靜置，有大量固體析出，抽濾，濾液濃縮，反復(fù)數(shù)次后再將有機(jī)層水洗，無(wú)水硫酸鎂干燥，得到中間體產(chǎn)物。將中間體產(chǎn)物繼續(xù)溶于1.5ml甲醇中，攪拌均勻，在室溫下加入0.04n的hcl溶液至ph＝3～4，過(guò)程中出現(xiàn)大量白色沉淀。油浴加熱至60℃，tlc跟蹤至原料點(diǎn)消失，約反應(yīng)4小時(shí)。轉(zhuǎn)移至室溫，加入飽和nahco3溶液調(diào)至中性。減壓蒸除甲醇后用etoac萃取三次，有機(jī)層水洗三次，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸除溶劑，初產(chǎn)物經(jīng)柱層析慢速分離(薄層層析硅膠，石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得白色固體10-去乙酰基-9,10-o-異亞丙基-9(r)-氫化-14-氧化-1-去羥基-12,13-異紫杉醇，即為化合物d為17.5mg，產(chǎn)率為42％。
1hnmr(500mhz,cdcl3):δppm1.28(s,3h),1.47(s,6h),1.60(s,3h),1.66(s,3h),1.69(s,3h),1.83(ddd,j＝15.4,8.9,1.0hz,1h),2.26(s,3h),2.34(d,j＝1.8hz,1h),2.50-2.65(m,1h),2.75(d,j＝5.0hz,1h),2.81(s,1h),4.10(t,j＝9.3hz,2h),4.16(d,j＝8.4hz,1h),4.33(d,j＝8.4hz,1h),4.67(d,j＝10.1hz,1h),4.83(d,j＝8.7hz,1h),4.88(s,1h),4.91(d,j＝3.3hz,1h),5.73(dd,j＝8.5,3.3hz,1h),5.88(dd,j＝5.1,2.0hz,1h),7.29-7.55(m,11h),7.61(t,j＝7.4hz,1h),7.85(d,j＝7.1hz,2h),8.09(d,j＝7.1hz,2h)；13cnmr(125hz,cdcl3):δppm12.9,17.0,22.5,24.6,27.0,27.2,34.8,36.6,36.7,41.1,41.5,51.9,56.0,61.6,67.9,70.8,74.3,75.6,76.6,77.3,80.3,84.3,84.4,105.8,127.2,127.3,128.3,128.8,128.9,129.4,130.2,132.0,133.8,133.9,137.8,144.1,147.7,165.5,167.2,169.4,171.2,189.6.hr-ms:calcdforc48h53no13([m+h]+),852.3597,found852.3589
實(shí)施例五:藥理活性實(shí)驗(yàn)方案
mtt法。96孔板每孔加入濃度為3～5×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液100μl，置37℃，5％co2培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后，加入樣品液，10μl/孔，設(shè)雙復(fù)孔，37℃，5％co2作用72h。每孔加入5mg/ml的mtt溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培養(yǎng)箱內(nèi)，溶解后用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)570nmod值。
實(shí)施例六:藥理活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明，14β-側(cè)鏈-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇衍生物a、b及14-氧化-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇衍生物d的活性大幅降低，而14-甲氧甲氧基-9(r)-氫化-1-去氧紫杉醇衍生物c對(duì)a549和a2780的毒性，和紫杉醇相當(dāng)。初步分析，在c-14β位引入側(cè)鏈的空間構(gòu)象和紫杉醇差異很大，是導(dǎo)致活性降低的主要原因。然而，在c-14位引入含氧基團(tuán)，保持著和紫杉醇相同數(shù)量級(jí)別的細(xì)胞毒性，對(duì)我們改造c-14位改善生物活性有一定的指導(dǎo)意義。
參見(jiàn)表1，化合物a,b,c,d和taxol對(duì)人體a549肺癌細(xì)胞,a2780卵巢癌細(xì)胞和hl-60前髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞的體外增殖抑制作用。