【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于羥基積雪草甙制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝。

背景技術(shù)：

積雪草為雙子葉植物傘形科植物積雪草的全草或帶根全草，具有清熱利濕，消腫解毒之功效；用于治療濕熱黃疸，痢疾風(fēng)疹、喉腫、腫毒和跌打損傷等。積雪草總甙是積雪草的活性成分，羥基積雪草甙是積雪草總甙的主要成分之一。已有研究發(fā)現(xiàn)，羥基積雪草甙具有較好的抗抑郁藥用，是較有發(fā)展前途的天然抗抑郁劑。

目前已公開(kāi)的從積雪草中提取分離出羥基積雪草甙的方法不多，具體有：

(1)公開(kāi)號(hào)為cn1377649a的發(fā)明專利中公開(kāi)了可以制得羥基積雪草甙的方法，具體是先將積雪草總甙溶于甲醇后，進(jìn)行硅膠正相色譜層析，以氯仿和甲醇的混合液為洗脫溶劑，收集其中氯仿∶甲醇＝2：1比例部分的洗脫液，減壓回收洗脫液，得到白色晶體狀單一化合物羥基積雪草甙。這種方法制得的羥基積雪草甙的純度不夠理想，而且洗脫溶劑中含有氯仿，不夠環(huán)保，危害操作人員的健康。

(2)公開(kāi)號(hào)為cn101210039a的發(fā)明專利，公開(kāi)了一種羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照品的分離制備方法，它是以重量含量30％-97％的羥基積雪草甙提取物為原料，以制備型高效液相色譜為分離手段，以甲醇-水溶液為洗脫體系，獲得純度98％以上羥基積雪草甙化學(xué)對(duì)照品。該方法雖然可獲得高純度的羥基積雪草甙單品，但它是以重量含量30％-97％的積雪草甙提取物為原料進(jìn)行分離提純的，必須先從積雪草中提取出一定含量的積雪草甙提取物；此外，該方法所用設(shè)備制備型高效液相色譜價(jià)格較高，導(dǎo)致產(chǎn)品的生產(chǎn)成本偏高。

專利文獻(xiàn)“一種羥基積雪草甙的制備方法(專利號(hào)：zl201010269888.0)”公開(kāi)了一種提取純化羥基積雪草甙的方法，得到的羥基積雪草甙的純度≥95％，質(zhì)量不穩(wěn)定，不滿足定性分析的要求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供的一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，以解決現(xiàn)有技術(shù)提取羥基積雪草甙純度較低，質(zhì)量不穩(wěn)定，不滿足定性分析的要求的問(wèn)題。本發(fā)明的方法制得的羥基積雪草甙的純度均高于現(xiàn)有技術(shù)制得的羥基積雪草甙的純度。

為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)工藝：

一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：

s1：將積雪草進(jìn)行粉碎并過(guò)篩子，制得積雪草粉末；

s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入乙醇，在水浴條件下回流提取2-3次，每次提取時(shí)長(zhǎng)為1.6-2h，提取完全后合并提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過(guò)活性炭脫色除雜，過(guò)濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏4.8-5.2倍體積的40-45℃的水進(jìn)行溶解，采用無(wú)水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2-3次，繼續(xù)用無(wú)水乙酸乙酯進(jìn)行2-3次結(jié)晶處理，結(jié)晶過(guò)程中固液比為1:4-5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)55％-60％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過(guò)活性炭脫色除雜，過(guò)濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙2％-10％，采用大孔吸附樹(shù)脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為48％-60％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹(shù)脂體積的1.6-3.2倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹(shù)脂吸附再生溶劑為3.6％-4.8％的koh溶液，吸附區(qū)流速5-10bv/h，解吸區(qū)流速10-20bv/h，水洗區(qū)流速20-25bv/h，再生區(qū)流速5-10bv/h，切換時(shí)間為700-750s，溫度為42-53℃，壓力為0.6-0.8mpa；

s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進(jìn)行濃縮后結(jié)晶，所得晶體在溫度為40-43℃下真空干燥，制得積雪草羥基積雪草甙。

優(yōu)選地，步驟s1中所述篩子的目數(shù)為30-70。

優(yōu)選地，步驟s2中所述積雪草粉末與乙醇的重量比為1:6-8。

優(yōu)選地，所述乙醇的體積分?jǐn)?shù)為72％-86％。

優(yōu)選地，步驟s2中所述通過(guò)活性炭脫色除雜的時(shí)間為0.6-1.3h。

優(yōu)選地，步驟s4中所述通過(guò)活性炭脫色除雜的時(shí)間為0.4-0.9h。

優(yōu)選地，步驟s5中所述大孔吸附樹(shù)脂為hpd700型大孔吸附樹(shù)脂。

優(yōu)選地，步驟s6中所述濃縮為真空減壓濃縮。

優(yōu)選地，步驟s6中所述結(jié)晶是在溫度為2-9℃下進(jìn)行的。

優(yōu)選地，步驟s6中所述晶體在溫度為40-43℃下真空干燥至含水率≤1％。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明的方法制得的羥基積雪草甙的純度在99.06％以上，均高于現(xiàn)有技術(shù)制得的羥基積雪草甙的純度，且能作為定性、定量的對(duì)照品。

【具體實(shí)施方式】

為便于更好地理解本發(fā)明，通過(guò)以下實(shí)施例加以說(shuō)明，這些實(shí)施例屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，但不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

在實(shí)施例中，所述從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：

s1：將積雪草進(jìn)行粉碎并過(guò)30-70目篩子，制得積雪草粉末；

s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量6-8倍72％-86％的乙醇，在水浴條件下回流提取2-3次，每次提取時(shí)長(zhǎng)為1.6-2h，提取完全后合并提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過(guò)活性炭脫色除雜0.6-1.3h，過(guò)濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏4.8-5.2倍體積的40-45℃的水進(jìn)行溶解，采用無(wú)水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2-3次，繼續(xù)用無(wú)水乙酸乙酯進(jìn)行2-3次結(jié)晶處理，結(jié)晶過(guò)程中固液比為1:4-5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)55％-60％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至3.8-4.3，溫度控制為70-75℃，通過(guò)活性炭脫色除雜0.4-0.9h，過(guò)濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙2％-10％，采用hpd700型大孔吸附樹(shù)脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為48％-60％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹(shù)脂體積的1.6-3.2倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹(shù)脂吸附再生溶劑為3.6％-4.8％的koh溶液，吸附區(qū)流速5-10bv/h，解吸區(qū)流速10-20bv/h，水洗區(qū)流速20-25bv/h，再生區(qū)流速5-10bv/h，切換時(shí)間為700-750s，溫度為42-53℃，壓力為0.6-0.8mpa；

s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為2-9℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為40-43℃下真空干燥至含水率≤1％，制得積雪草羥基積雪草甙。

實(shí)施例1

一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：

s1：將積雪草進(jìn)行粉碎并過(guò)50目篩子，制得積雪草粉末；

s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量7倍78％的乙醇，在水浴條件下回流提取2次，每次提取時(shí)長(zhǎng)為1.8h，提取完全后合并提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至4.2，溫度控制為73℃，通過(guò)活性炭脫色除雜1h，過(guò)濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5倍體積的42℃的水進(jìn)行溶解，采用無(wú)水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2次，繼續(xù)用無(wú)水乙酸乙酯進(jìn)行2次結(jié)晶處理，結(jié)晶過(guò)程中固液比為1:4.5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)58％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至4.1，溫度控制為73℃，通過(guò)活性炭脫色除雜0.6h，過(guò)濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙6％，采用hpd700型大孔吸附樹(shù)脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為55％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹(shù)脂體積的2.5倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹(shù)脂吸附再生溶劑為4.2％的koh溶液，吸附區(qū)流速8bv/h，解吸區(qū)流速15bv/h，水洗區(qū)流速22bv/h，再生區(qū)流速8bv/h，切換時(shí)間為720s，溫度為48℃，壓力為0.7mpa；

s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為6℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為42℃下真空干燥至含水率為1％，制得積雪草羥基積雪草甙。

實(shí)施例2

一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：

s1：將積雪草進(jìn)行粉碎并過(guò)30目篩子，制得積雪草粉末；

s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量6.2倍72％％的乙醇，在水浴條件下回流提取2次，每次提取時(shí)長(zhǎng)為2h，提取完全后合并提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至3.8，溫度控制為70℃，通過(guò)活性炭脫色除雜1.3h，過(guò)濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏4.8倍體積的40℃的水進(jìn)行溶解，采用無(wú)水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2次，繼續(xù)用無(wú)水乙酸乙酯進(jìn)行2次結(jié)晶處理，結(jié)晶過(guò)程中固液比為1:4(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)55％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至3.8，溫度控制為70℃，通過(guò)活性炭脫色除雜0.9h，過(guò)濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙2％，采用hpd700型大孔吸附樹(shù)脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為48％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹(shù)脂體積的1.6倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹(shù)脂吸附再生溶劑為3.6％的koh溶液，吸附區(qū)流速5bv/h，解吸區(qū)流速10bv/h，水洗區(qū)流速20bv/h，再生區(qū)流速5bv/h，切換時(shí)間為700s，溫度為42℃，壓力為0.6mpa；

s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為2℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為40℃下真空干燥至含水率為0.8％，制得積雪草羥基積雪草甙。

實(shí)施例3

一種從積雪草中提取羥基積雪草甙的工藝，包括以下步驟：

s1：將積雪草進(jìn)行粉碎并過(guò)70目篩子，制得積雪草粉末；

s2：向步驟s1制得的積雪草粉末中加入其重量8倍85％的乙醇，在水浴條件下回流提取2次，每次提取時(shí)長(zhǎng)為2h，提取完全后合并提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至4.3，溫度控制為75℃，通過(guò)活性炭脫色除雜0.6h，過(guò)濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5.2倍體積的45℃的水進(jìn)行溶解，采用無(wú)水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取3次，繼續(xù)用無(wú)水乙酸乙酯進(jìn)行3次結(jié)晶處理，結(jié)晶過(guò)程中固液比為1:5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)60％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至4.3，溫度控制為75℃，通過(guò)活性炭脫色除雜0.4h，過(guò)濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含積雪草羥基積雪草甙10％，采用hpd700型大孔吸附樹(shù)脂分離提純制得積雪草羥基積雪草甙的液體，條件為：解析劑為60％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹(shù)脂體積的3.2倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹(shù)脂吸附再生溶劑為4.8％的koh溶液，吸附區(qū)流速10bv/h，解吸區(qū)流速20bv/h，水洗區(qū)流速25bv/h，再生區(qū)流速10bv/h，切換時(shí)間為750s，溫度為53℃，壓力為0.8mpa；

s6：將步驟s5制得的積雪草羥基積雪草甙液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為8℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為43℃下真空干燥至含水率為0.9％，制得積雪草羥基積雪草甙。

對(duì)比例1，采用“一種羥基積雪草甙的制備方法(專利號(hào)：zl201010269888.0)”的實(shí)施例1-3的方法制備羥基積雪草甙。

對(duì)實(shí)施例1-3和對(duì)比例1制得的羥基積雪草甙的純度進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表所示。

由以上表可知，本發(fā)明的方法制得的羥基積雪草甙的純度在99.06％以上，均高于現(xiàn)有技術(shù)制得的羥基積雪草甙的純度，且能作為定性、定量的對(duì)照品。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明，對(duì)于所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明由所提交的權(quán)利要求書(shū)確定的專利保護(hù)范圍。