本發(fā)明涉及植物提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法。

背景技術(shù)：

羅漢果，為葫蘆科植物羅漢果屬多年生草質(zhì)藤本植物羅漢果momordicagrosvenoriswingle的干燥成熟果實(shí)，為一常用中藥，具有清熱解暑、潤肺止渴作用，臨床上可用于治療高血壓、肺結(jié)核、哮喘、胃炎、百日咳、急慢性支氣管炎和急慢性扁桃體炎等多種疾病，同時羅漢果也是常用飲料干果，提取物是常用甜味劑，大量出口，遠(yuǎn)銷日本、韓國、中國臺灣、東南亞、加拿大、美國等地。

羅漢果及羅漢果提取物中的主要成分為葫蘆烷型三萜皂苷，包括羅漢果苷iv(mogrosideiv)、羅漢果苷v(mogrosidev)、賽門苷i(siamenosidei)、11-氧-羅漢果苷v(11-oxo-mogrosidev)、羅漢果苷iie(mogrosideiie)、羅漢果苷iiie(mogrosideiiie)等多種皂苷，其中羅漢果苷v為主要皂苷類成分。羅漢果苷v也是羅漢果的主要甜味成分，其甜度高，為蔗糖的四百多倍。由于制藥工業(yè)及食品工業(yè)的發(fā)展，目前國內(nèi)外對高純度的羅漢果v的需求量非常大，但目前尚未見有高純度的羅漢果苷v生產(chǎn)、銷售。雖有多項專利申請涉及羅漢果甜苷的提取，方法簡單，但所得產(chǎn)物為羅漢果總苷，提取物中羅漢果苷v的純度均較低，不超過80％，限制了其應(yīng)用范圍和發(fā)展前景。

現(xiàn)有技術(shù)中提取羅漢果苷v純度不夠高，即使純度高，但是提取率還是相對比較低。因此研究開發(fā)高純度和高提取率的羅漢果苷v的方法很有必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，該方法制備得到的羅漢果甙v具有高純度，高生物活性，高提取率。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所要解決的技術(shù)方案為：

本發(fā)明提供從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量8～12倍的乙醇溶液，在78～90mpa下高壓處理3～6min，得到漿液；

2)將漿液在600～900w功率下超聲波提取25～35min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在4000～6000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3～7min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量5～8倍重量的無水甲醇洗滌；

5)將洗滌后的沉淀用其6～9倍的去離子水溶解，用截留分子量為8～10萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為110～120萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

6)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，干燥，得到羅漢果甙v。

本發(fā)明所述步驟1)中，乙醇溶液的體積濃度為30～40％。合適乙醇溶液濃度，有助于提高羅漢果甙v的提取率。

本發(fā)明所述步驟1)中，在35～50℃下進(jìn)行高壓處理。通過高壓處理，有利于后面羅漢果甙v的提取，提高羅漢果甙v的提取率。

本發(fā)明所述步驟2)中，在35～45℃下進(jìn)行超聲波提取。超聲波提取條件溫和，有利于提高羅漢果甙v的生物活性。

本發(fā)明所述步驟4)中，洗滌重復(fù)進(jìn)行2～3次。多次洗滌有助于提高羅漢果甙v的純度。

本發(fā)明所述步驟5)中，超濾分離時的操作溫度為25～35℃，壓力為0.35～0.4mpa。通過限定超濾條件，有利于提高超濾的效果。

本發(fā)明所述步驟6)中，真空冷凍干燥。真空冷凍干燥，效率高，且有利于保護(hù)羅漢果甙v的生物活性。

本發(fā)明所述步驟6)中，在干燥前還進(jìn)行離心分離。干燥前進(jìn)行離心分離有利于提高羅漢果甙v的純度。

本發(fā)明所述步驟6)中，在7000～9000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離。轉(zhuǎn)速控制得到，以確保羅漢果甙v的純度和提取率。

本發(fā)明所述步驟6)中，離心分離1～4min。

通過本發(fā)明方法從羅漢果中提取羅漢果甙v先進(jìn)行高壓處理，有助于加快羅漢果甙v的溶出，提高提取效率，然后再進(jìn)行超聲波提取條件溫和，最大限度保護(hù)有效成分不被破壞，且加快提取速度，后面使用不同截留分子量的超濾膜過濾得到的羅漢果甙v生物活性較好，且能夠有效延長在體內(nèi)中的作用，延長藥效和提高效果，制備得到的羅漢果甙v純度和提取率高。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。

實(shí)施例1

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量8倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在78mpa和35℃溫度下高壓處理3min，得到漿液；

2)將漿液在900w功率和35℃溫度下超聲波提取35min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離7min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量5倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行2次；

5)將洗滌后的沉淀用其6倍的去離子水溶解，用截留分子量為9萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，操作溫度為25℃，壓力為0.4mpa，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為110萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

6)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，在9000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離1min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為89.9％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為98.8％。

實(shí)施例2

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量9倍體積濃度為35％的乙醇溶液，在81mpa和50℃溫度下高壓處理4min，得到漿液；

2)將漿液在800w功率和40℃溫度下超聲波提取25min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在4500r/min轉(zhuǎn)速下離心分離6min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量6倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行3次；

5)將洗滌后的沉淀用其7倍的去離子水溶解，用截留分子量為8萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，操作溫度為30℃，壓力為0.38mpa，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為112萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

6)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，在8500r/min轉(zhuǎn)速下離心分離2min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為91.2％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為98.8％。

實(shí)施例3

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量10倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在84mpa和45℃溫度下高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液在700w功率和45℃溫度下超聲波提取35min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離5min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量7倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行2次；

5)將洗滌后的沉淀用其8倍的去離子水溶解，用截留分子量為10萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，操作溫度為35℃，壓力為0.37mpa，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為115萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

6)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，在8000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為90.5％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為99.1％。

實(shí)施例4

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量11倍體積濃度為35％的乙醇溶液，在87mpa和40℃溫度下高壓處理6min，得到漿液；

2)將漿液在650w功率和40℃溫度下超聲波提取30min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在5500r/min轉(zhuǎn)速下離心分離4min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量8倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行3次；

5)將洗滌后的沉淀用其9倍的去離子水溶解，用截留分子量為9萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，操作溫度為25℃，壓力為0.36mpa，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為118萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

6)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，在7500r/min轉(zhuǎn)速下離心分離4min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為90.6％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為99.2％。

實(shí)施例5

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量12倍體積濃度為30％的乙醇溶液，在90mpa和35℃溫度下高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液在600w功率和35℃溫度下超聲波提取25min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在6000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量5倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行2次；

5)將洗滌后的沉淀用其6倍的去離子水溶解，用截留分子量為8萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，操作溫度為35℃，壓力為0.35mpa，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為120萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

6)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，在7000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離1min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為89.2％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為99.3％。

對比例1

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量10倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在700w功率和45℃溫度下超聲波提取35min，得到提取粗液；

2)將提取粗液在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離5min，取沉淀；

3)將沉淀用其重量7倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行2次；

4)將洗滌后的沉淀用其8倍的去離子水溶解，用截留分子量為10萬da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，操作溫度為35℃，壓力為0.37mpa，得到超濾液，然后將超濾液用截留分子量為115萬da的超濾膜進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；

5)將濃縮液結(jié)晶，重結(jié)晶，在8000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為78.1％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為98.9％。

對比例2

從羅漢果中提取羅漢果甙v的方法，包括以下制備步驟：

1)取羅漢果粉碎，加入羅漢果重量10倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在84mpa和45℃溫度下高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液在700w功率和45℃溫度下超聲波提取35min，得到提取粗液；

3)將提取粗液在5000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離5min，取沉淀；

4)將沉淀用其重量7倍重量的無水甲醇洗滌，洗滌重復(fù)進(jìn)行2次；

5)將洗滌后的沉淀用其8倍的乙醇溶液溶解，結(jié)晶，重結(jié)晶，在8000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3min，真空冷凍干燥，得到羅漢果甙v。

經(jīng)計算，羅漢果甙v提取率為78.9％，經(jīng)hplc檢測羅漢果甙v純度為90.2％。