本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性易患的常見癌癥，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，發(fā)病率逐年上升且呈年輕化，嚴(yán)重影響女性健康。臨床研究發(fā)現(xiàn)，雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌的浸潤(rùn)性行為較低，且對(duì)內(nèi)分泌治療較為敏感。但經(jīng)過一階段內(nèi)分泌治療后，病灶的雌激素受體活性可發(fā)生改變進(jìn)而影響后續(xù)療效。免疫病理檢查只能獲取手術(shù)病灶的雌激素受體分布情況，而原發(fā)灶受體的情況并不能完全代表轉(zhuǎn)移灶，尤其是治療病灶雌激素受體的活性。因此，在早期正確的判斷乳腺癌治療過程中各部分病灶的雌激素受體活性狀況，是及時(shí)調(diào)整治療方案和建立個(gè)體化治療的關(guān)鍵。

正電子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像(positronemissioncomputedtomography，簡(jiǎn)稱pet)，是核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域比較先進(jìn)的臨床檢查影像技術(shù)。目前，pet在腫瘤、冠心病和腦部疾病這三大類疾病的診療中尤其顯示出重要的價(jià)值。16α-¹⁸f-17β-雌二醇(16α-[¹⁸f]-fluoro-17β-estradiol，¹⁸f-fes)是一種雌二醇衍生物，能特異性地與雌激素受體結(jié)合，作為雌激素受體的分子影像探針，通過pet/ct顯像能動(dòng)態(tài)、定量和無(wú)創(chuàng)傷地反映體內(nèi)雌激素受體表達(dá)水平和分布情況，為乳腺癌患者提供一種有力評(píng)價(jià)方法。乳腺癌患者的¹⁸f-fespet和pet/ct顯像的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳腺癌對(duì)¹⁸f-fes的吸收與雌激素受體的表達(dá)水平有明顯的相關(guān)性，而且，抗雌激素治療后¹⁸f-fes的吸收明顯減少。隨著¹⁸f-fespet和pet/ct在女性乳腺癌領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)一步擴(kuò)展，¹⁸f-fes的合成已成為亟需解決的問題。

1984年，daleo.kiesewetter等人報(bào)道了在16α-17β-雌二醇的五元環(huán)上直接引入[¹⁸f]氟離子進(jìn)行標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，但是該方法標(biāo)記條件苛刻，需要在-78℃下加入氫化鋁鋰進(jìn)行反應(yīng)，這給標(biāo)記實(shí)驗(yàn)增加了很大的難度和危險(xiǎn)性，不具有通用性。1995年，jojannesromer等人改善了標(biāo)記條件，首先將16α-17β-雌二醇引入磺?；缓笤诨酋；弦隱¹⁸f]氟離子進(jìn)行標(biāo)記，雖然反應(yīng)條件相對(duì)溫和，但是該標(biāo)記反應(yīng)需要兩步才能完成，時(shí)間較長(zhǎng)，放射化學(xué)產(chǎn)率較低。如何對(duì)現(xiàn)有的雌二醇衍生物的合成路線進(jìn)行改進(jìn)并標(biāo)記以最大限度地利用pet技術(shù)清楚判斷雌激素受體活性情況，為患者及時(shí)調(diào)整治療方案，建立個(gè)體化治療，已成為本領(lǐng)域亟待解決的一大技術(shù)難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)中¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇合成和標(biāo)記反應(yīng)條件苛刻且在用藥過程存在嚴(yán)重不良反應(yīng)的缺陷，從而提供一種療效安全、易于合成和標(biāo)記，并能利用pet技術(shù)以清楚判斷雌激素受體活性情況的¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇。

為此，本發(fā)明提供了一種¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，具有式(i)所示的結(jié)構(gòu)，

其中，r1選自烷基或烷氧基。

優(yōu)選的，r1為亞乙基或3，6，9，12-四氧雜十四烷基。

本發(fā)明提供了一種制備¹⁸f標(biāo)記炔雌醇的方法，包括如下步驟：

(1)取炔雌醇溶解于與水互溶性較好有機(jī)溶劑中，將式a-i所示的化合物加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o的水溶液、naasc的水溶液和三(2-苯并咪唑基甲基)胺的水溶液，于40-50℃下反應(yīng)0.5-2h，將所得反應(yīng)液旋干，加入與水互溶性較好有機(jī)溶劑并離心，取上清液，即得式a-ii所示的化合物；

(2)將所述式a-ii所示的化合物溶于n，n-二甲基甲酰胺中，然后加入¹⁸f^-溶液中，于80-100℃下反應(yīng)10-40min，將所得反應(yīng)液進(jìn)行純化、洗滌，即得所述式(i)所示的化合物；

優(yōu)選的，所述步驟(1)中，炔雌醇、式a-i所示的化合物、cuso4·5h2o、抗壞血酸鈉和三(2-苯并咪唑基甲基)胺加入的摩爾比為1∶(0.90～1.30)∶(0.18～0.22)∶(1.8～2.2)∶(0.08～0.12)。

優(yōu)選的，在所述步驟(1)反應(yīng)體系中，所述與水互溶性較好有機(jī)溶劑與水的體積比為1∶1。

優(yōu)選的，式a-i所示的化合物如下，

上述式a-i-1所示的化合物的合成步驟包括：

q1、將式x-1所示的化合物2-(二甲氨基)溴乙烷氫溴酸鹽與疊氮化鈉混合，加水溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，87～93℃下反應(yīng)15～17h，將所得反應(yīng)液調(diào)節(jié)ph值至中性，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以二氯甲烷∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.5，采用二氯甲烷萃取，所得有機(jī)相經(jīng)干燥，旋干，得油狀液體，即為式x-2所示的化合物；

q2、將式x-2所示的化合物加入醚類溶劑中溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后逐滴加入溴甲基硼酸頻哪醇酯的醚類溶液，滴加完畢，20-30℃繼續(xù)反應(yīng)2～4h，至出現(xiàn)白色渾濁，用醚類溶劑沉淀，離心，真空干燥，得到化合物x-3；

q3、向式x-3所示的化合物中加入氟氫化鉀、鹽酸、水、與水互溶性較好的有機(jī)溶劑，42～47℃下反應(yīng)1～3h，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.3，用乙酸乙酯萃取，旋干，純化，得到上述式a-i-1所示的化合物；

優(yōu)選的，式a-i所示的化合物如下，

上述式a-i-2所示的化合物的合成步驟包括：

f1、將式y(tǒng)-1所示的四聚乙二醇溶解于極性非質(zhì)子性溶劑中，加入堿液，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯的溶液，滴加完畢，置于冰浴中反應(yīng)1.5～2.5h，萃取，純化，得到油狀物，即式y(tǒng)-2所示的化合物；

f2、將式y(tǒng)-2所示的化合物與疊氮化鈉溶于極性非質(zhì)子性溶劑中，93～97℃下加熱反應(yīng)15～17h，萃取，旋蒸，得到油狀物，即式y(tǒng)-3所示的化合物；

f3、將式y(tǒng)-3所示的化合物溶于極性非質(zhì)子性溶劑中，加入4-二甲氨基吡啶和三乙胺，冰浴下攪拌，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯的溶液，滴加完畢，室溫反應(yīng)過夜，然后經(jīng)洗滌、旋蒸和純化，得到黃色油狀物，即式y(tǒng)-4所示的化合物；

f4、將式y(tǒng)-4所示的化合物、n，n-二甲基乙醇胺、堿溶于極性非質(zhì)子性溶劑中，67～72℃加熱反應(yīng)10～12h，過濾，收集濾液，經(jīng)旋蒸、萃取、旋干和純化，得式y(tǒng)-5所示的化合物；

f5、將式y(tǒng)-5所示的化合物溶于干燥的極性非質(zhì)子性溶劑中，將溴甲基硼酸頻那醇酯溶于干燥的的極性非質(zhì)子性溶劑中，然后將上述溴甲基硼酸頻那醇酯的溶液逐滴加入上述式y(tǒng)-5所示的化合物的溶液中，在室溫、氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下反應(yīng)2.5～3.5h，旋干，得到式y(tǒng)-6所示的化合物；

f6、將式y(tǒng)-6所示的化合物溶于與水互溶性較好的有機(jī)溶劑中，加入氟氫化鉀水溶液、鹽酸，氮?dú)獗Ｗo(hù)，42～47℃反應(yīng)1.5～2.5h，加入氨水淬滅，調(diào)節(jié)ph值至中性，旋干，純化，得到上述式a-i-2所示的化合物；

優(yōu)選的，所述步驟(1)、q3、f6中，所述與水互溶性好的有機(jī)溶劑包括n，n-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙酮、乙腈、甲醇和乙醇中的至少一種。

優(yōu)選的，所述步驟f1中，所述極性非質(zhì)子性溶劑包括四氫呋喃、n，n-二甲基甲酰胺和二氧六環(huán)中的至少一種。

優(yōu)選的，所述步驟f2中，所述極性非質(zhì)子性溶劑包括乙腈、二甲亞砜和n，n-二甲基甲酰胺中的至少一種。

優(yōu)選的，所述步驟f3中，所述極性非質(zhì)子性溶劑包括二氯甲烷、四氫呋喃、n，n-二甲基甲酰胺和二甲亞砜中至少一種。

優(yōu)選的，所述步驟f4、f5中，所述極性非質(zhì)子性溶劑包括四氫呋喃、n，n-二甲基甲酰胺、二甲亞砜和乙腈中的至少一種。

優(yōu)選的，所述的堿液包括氫氧化鉀或氫氧化鈉。

優(yōu)選的，所述的醚類溶劑包括乙醚。

本發(fā)明提供上述¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供上述¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇在制備pet示蹤劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供一種pet示蹤劑，包括上述¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇。

本發(fā)明技術(shù)方案，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1.本發(fā)明在炔雌醇上引入修飾基團(tuán)并經(jīng)過¹⁸f標(biāo)記，所獲得的¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，具備良好的生物活性和優(yōu)異的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，而且體外穩(wěn)定性好，對(duì)乳腺癌er⁺細(xì)胞具有較好的靶向性，可以作為pet示蹤劑，用于高轉(zhuǎn)移乳腺癌er⁺細(xì)胞的早期診斷或療效評(píng)價(jià)。

2.本發(fā)明還提供¹⁸f標(biāo)記炔雌醇的制備方法，以炔雌醇為原料，通過click反應(yīng)引入標(biāo)記基團(tuán)，在相對(duì)溫和的條件下加熱，通過¹⁸f^-交換，簡(jiǎn)化標(biāo)記步驟和純化時(shí)間，所獲得的¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇放射化學(xué)產(chǎn)率高，更加有利于放射性標(biāo)記化合物的商業(yè)應(yīng)用于臨床推廣。

3.本發(fā)明還提供標(biāo)記基團(tuán)的制備方法，該制備方法反應(yīng)速率快、生產(chǎn)效率高，條件簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化控制，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著，解決了現(xiàn)有生產(chǎn)工藝中反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、難以控制反應(yīng)條件、無(wú)法滿足工業(yè)化生產(chǎn)需求的問題。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1-6制備的¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇結(jié)構(gòu)式；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例1制備的標(biāo)記前體a-ii-a的¹h-nmr圖譜；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例4制備的標(biāo)記前體a-ii-b的¹h-nmr圖譜；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記前體a-ii-a的hplc圖譜；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記前體a-ii-b的hplc圖譜；

圖6是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記產(chǎn)物i-a的放射性高效液相圖譜；

圖7是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記產(chǎn)物i-b的放射性高效液相圖譜；

圖8是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記前體a-ii-a不同溫度下的標(biāo)記率；

圖9是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記前體a-ii-b不同溫度下的標(biāo)記率；

圖10是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記前體a-ii-a體外穩(wěn)定性測(cè)試圖譜；

圖11是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記前體a-ii-b體外穩(wěn)定性測(cè)試圖譜；

圖12是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記產(chǎn)物i-a在pbs中孵育4h后radio-hplc分析圖譜；

圖13是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記產(chǎn)物i-a在血清中孵育4h后radio-hplc分析圖譜；

圖14是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記產(chǎn)物i-a在pbs和血清中孵育不同時(shí)間的放化純圖譜；

圖15是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記產(chǎn)物i-b在pbs中孵育4h后radio-hplc分析圖譜；

圖16是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記產(chǎn)物i-b在血清中孵育4h后radio-hplc分析圖譜；

圖17是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記產(chǎn)物i-b在pbs和血清中孵育不同時(shí)間的放化純圖譜；

圖18是在本發(fā)明實(shí)施例1中不同濃度標(biāo)記前體a-ii-a下t47d細(xì)胞生存率；

圖19是在本發(fā)明實(shí)施例4中不同濃度標(biāo)記前體a-ii-b下t47d細(xì)胞生存率；

圖20是本發(fā)明實(shí)施例1中標(biāo)記產(chǎn)物i-a在t47d細(xì)胞中的總攝取率與阻斷組攝取率；

圖21是本發(fā)明實(shí)施例4中標(biāo)記產(chǎn)物i-b在t47d細(xì)胞中的總攝取率與阻斷組攝取率。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。此外，下面所描述的本發(fā)明不同實(shí)施方式中所涉及的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互結(jié)合。

下述實(shí)施例中涉及到的試劑如下：

2-(二甲氨基)溴乙烷氫溴酸鹽、疊氮化鈉、溴甲基硼酸頻哪醇酯、氟氫化鉀、四聚乙二醇、對(duì)甲苯磺酰氯、n，n-二甲基乙醇胺、乙醚、乙酸乙酯、n，n-二甲基甲酰胺、cuso4·5h2o、naasc、三(2-苯并咪唑基甲基)胺、四氫呋喃、二氯甲烷、甲醇、乙醇、正己烷、鹽酸、氯化鈉。所有試劑均為分析純，使用前未經(jīng)純化，購(gòu)置于阿拉丁試劑公司。

炔雌醇的生產(chǎn)廠家為安耐吉化學(xué)。

下述實(shí)施例中涉及到的儀器如下：

核磁共振儀(brukerdrx-500)、高效液相色譜儀(waters2445)，γ計(jì)數(shù)儀(perkin-elmer1470)。

實(shí)施例1

本實(shí)施例所述的具有式(i)結(jié)構(gòu)¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，如圖1所示，其中r1為亞乙基，具有式(i-a)結(jié)構(gòu)：

化合物(i-a)的合成路線為：

上述式i-a所示的化合物的合成步驟包括：

q1、將式x-1所示的化合物2-(二甲氨基)溴乙烷氫溴酸鹽2.33g(10mmol)與疊氮化鈉2.60g(40mmol)混合，加水50ml溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，90℃下反應(yīng)16h，反應(yīng)結(jié)束加入na2co3將所得反應(yīng)液調(diào)節(jié)ph值至中性，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以二氯甲烷∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.5，采用二氯甲烷萃取，所得有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干，得油狀液體，質(zhì)譜檢測(cè)：115為m+h+，即為式x-2所示的化合物；

q2、將式x-2所示的化合物757mg(6.63mmol)加入10ml乙醚溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后逐滴加入含有溴甲基硼酸頻哪醇酯1537.8mg(6.96mmol)的乙醚溶液5ml，滴加完畢，25℃繼續(xù)反應(yīng)3h，至出現(xiàn)白色渾濁，加入乙醚20ml繼續(xù)沉淀，離心，40℃真空干燥，質(zhì)譜檢測(cè)m+na：255.，得到化合物x-3；

q3、向式x-3所示的化合物1.73g(6.78mmol)中加入氟氫化鉀溶液(3m)4ml、鹽酸(4m)4ml、水2ml、n，n-二甲基甲酰胺2ml，45℃下反應(yīng)2h，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.3，用乙酸乙酯萃取，旋干，經(jīng)硅膠柱層析純化，質(zhì)譜檢測(cè)：177(m-f^-)，219(m+na⁺)，415(2m+na⁺)，得到上述式a-i-1所示的化合物；

q4、取炔雌醇50.4mg(0.17mmol)溶解于1.5ml的n，n-二甲基甲酰胺中，將式a-i-1所示的化合物40.5mg(0.22mmol)加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o8.44mg(0.034mmol)的水溶液300μl、naasc66.8mg(0.34mmol)的水溶液1000μl和三(2-苯并咪唑基甲基)胺7.2mg(0.017mmol)的水溶液200μl，在45℃下反應(yīng)2h，將所得反應(yīng)液旋干，加入n，n-二甲基甲酰胺30ml并離心，收集上清液，即得式a-ii-a所示的化合物；

q5、將所述式a-ii-a所示的化合物1.23mg(0.0025mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺100μl中，配制成25nm/μl溶液，然后用300μl噠嗪-鹽酸-n，n-二甲基甲酰胺(ph＝2.5)緩沖液將200mci的¹⁸f^-溶液經(jīng)qma柱洗脫，收集，取20μl式a-ii-a所示的化合物加入到收集的¹⁸f^-溶液中，在90℃下反應(yīng)20min，將所得反應(yīng)液用水稀釋，然后負(fù)載c18柱純化，用水洗滌三次，每次10ml，經(jīng)c18柱純化后，放化純＞98％，即得所述式(i-a)所示的化合物。

將上述制備得到的標(biāo)記前體a-ii-a進(jìn)行¹h-nmr分析，其圖譜如圖2所示。

實(shí)施例2

本實(shí)施例所述的具有式(i)所示結(jié)構(gòu)¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，如圖1所示，，其中r1為亞乙基，具有式(i-a)結(jié)構(gòu)：

化合物(i-a)的合成路線為：

上述式i-a所示的化合物的合成步驟包括：

q1、將式x-1所示的化合物2-(二甲氨基)溴乙烷氫溴酸鹽4.66g(20mmol)與疊氮化鈉4.9g(76mmol)混合，加水100ml溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，93℃下反應(yīng)15h，反應(yīng)結(jié)束加入na2co3將所得反應(yīng)液調(diào)節(jié)ph值至中性，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以二氯甲烷∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.5，采用二氯甲烷萃取，所得有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干，得油狀液體，即為式x-2所示的化合物；

q2、將式x-2所示的化合物1484.0mg(13mmol)加入20ml乙醚溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后逐滴加入溴甲基硼酸頻哪醇酯3158.9mg(14.3mmol)的乙醚溶液10ml，滴加完畢，20℃繼續(xù)反應(yīng)4h，至出現(xiàn)白色渾濁，加入乙醚40ml繼續(xù)沉淀，離心，42℃真空干燥，得到化合物x-3；

q3、向式x-3所示的化合物2.552g(10mmol)中加入氟氫化鉀(3m)6ml、鹽酸(4m)6ml、水3ml、二甲亞砜3ml，42℃下反應(yīng)3h，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.3，用乙酸乙酯萃取，旋干，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到上述式a-i-1所示的化合物；

q4、取炔雌醇118.5mg(0.4mmol)溶解于4ml的甲醇中，將式a-i-1所示的化合物81.0mg(0.44mmol)加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o22.0mg(0.088mmol)的水溶液600μl、naasc142.6mg(0.72mmol)的水溶液2000μl和三(2-苯并咪唑基甲基)胺20.33mg(0.048mmol)的水溶液400μl，控制上述反應(yīng)體系中甲醇與h2o體積比為1∶1.1，在40℃下反應(yīng)1.5h，將所得反應(yīng)液旋干，加入甲醇溶液70ml并離心，收集上清液，即得式a-ii-a所示的化合物；

q5、將所述式a-ii-a所示的化合物2.26mg(0.0050mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺200ml中，配制成25nm/μl溶液，然后用500μl噠嗪-鹽酸-n，n-二甲基甲酰胺(ph＝2.5)緩沖液將200mci的¹⁸f^-溶液經(jīng)qma柱洗脫，收集，取20μl式a-ii-a所示的化合物加入到收集的¹⁸f^-溶液中，在90℃下反應(yīng)20min，將所得反應(yīng)液用水稀釋，然后負(fù)載c18柱純化，用水洗滌三次，每次10ml，即得所述式(i-a)所示的化合物。

實(shí)施例3

本實(shí)施例所述的具有式(i)所示結(jié)構(gòu)¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，如圖1所示，其中r1為亞乙基，具有式(i-a)結(jié)構(gòu)：

化合物(i-a)的合成路線為：

上述式i-a所示的化合物的合成步驟包括：

q1、將式x-1所示的化合物2-(二甲氨基)溴乙烷氫溴酸鹽3493.5mg(15mmol)與疊氮化鈉4095.6mg(63mmol)混合，加水75ml溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，87℃下反應(yīng)17h，反應(yīng)結(jié)束加入na2co3將所得反應(yīng)液調(diào)節(jié)ph值至中性，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以二氯甲烷∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑為碘單質(zhì)，rf＝0.5，采用二氯甲烷萃取，所得有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干，得油狀液體，即為式x-2所示的化合物；

q2、將式x-2所示的化合物1141.5mg(10mmol)加入15ml乙醚溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后逐滴加入溴甲基硼酸頻哪醇酯3556.5mg(16.1mmol)的乙醚溶液5ml，滴加完畢，30℃繼續(xù)反應(yīng)2h，至出現(xiàn)白色渾濁，加入乙醚30ml繼續(xù)沉淀，離心，41℃真空干燥，得到化合物x-3；

q3、向式x-3所示的化合物2041.6mg(8mmol)中加入氟氫化鉀(3m)5ml、鹽酸(4m)5ml、水2.5ml、乙腈2.5ml，47℃下反應(yīng)1h，將上述反應(yīng)液進(jìn)行tlc檢測(cè)，以乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1(v/v)展開，顯色劑碘單質(zhì)，rf＝0.3，用乙酸乙酯萃取，旋干，經(jīng)硅膠柱層析純化，得到上述式a-i-1所示的化合物；

q4、取炔雌醇88.9mg(0.3mmol)溶解于2.2ml二甲亞砜中，將式a-i-1所示的化合物49.7mg(0.27mmol)加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o13.5mg(0.054mmol)的水溶液450μl、naasc107.0mg(0.54mmol)的水溶液3000μl和三(2-苯并咪唑基甲基)胺9.8mg(0.024mmol)的水溶液300μl，控制上述反應(yīng)體系中二甲亞砜與h2o體積比為1∶1，在50℃下反應(yīng)0.5h，將所得反應(yīng)液旋干，加入二甲亞砜45ml并離心，收集上清液，即得式a-ii-a所示的化合物；

q5、將所述式a-ii-a所示的化合物3.69mg(0.0075mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺300ml中，配制成25nm/μl溶液，然后用900μl噠嗪-鹽酸-n，n-二甲基甲酰胺(ph＝2.5)緩沖液將600mci的¹⁸f^-溶液經(jīng)qma柱洗脫，收集，取20μl式a-ii-a所示的化合物加入到收集的¹⁸f^-溶液中，在90℃下反應(yīng)20min，將所得反應(yīng)液用水稀釋，然后負(fù)載c18柱純化，用水洗滌三次，每次10ml，即得所述式(1-a)所示的化合物。

實(shí)施例4

本實(shí)施例所述的具有式(i)所示結(jié)構(gòu)¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，如圖1所示，其中r1為3，6，9，12-四氧雜十四烷亞基，具有式(i-b)結(jié)構(gòu)：

化合物(i-b)的合成路線為：

上述式i-a所示的化合物的合成步驟包括：

f1、室溫下，將式y(tǒng)-1所示的四聚乙二醇4464.8mg(23mmol)溶解20ml四氫呋喃中，加入koh2917.5mg(52mmol)水溶液3ml，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯4385.0mg(23mmol)的四氫呋喃溶液30ml，滴加完畢，置于冰浴中反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢采用二氯甲烷萃取，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝30/1，v/v)，得到油狀物，即式y(tǒng)-2所示的化合物；

f2、將式y(tǒng)-2所示的化合物3481.2mg(10mmol)與疊氮化鈉1800.0mg(30mmol)溶于20ml乙腈中，在95℃下加熱反應(yīng)16h，反應(yīng)結(jié)束采用二氯甲烷萃取，旋蒸，得到油狀物，即式y(tǒng)-3所示的化合物；

f3、將式y(tǒng)-3所示的化合物1468.1g(6.7mmol)溶于20ml二氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶357.2mg(2.9mmol)和三乙胺8.9ml(67mmol)，冰浴下攪拌，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯3813.0g(20mmol)的二氯甲烷溶液20ml，滴加完畢，室溫反應(yīng)過夜，分別用1m鹽酸和飽和食鹽水洗滌各洗滌三次，有機(jī)相旋蒸，經(jīng)柱層析分離純化(正己烷/乙酸乙酯＝2/1，v/v)，得到黃色油狀物，即式y(tǒng)-4所示的化合物；

f4、將式y(tǒng)-4所示的化合物3208.9g(8.6mmol)、n，n-二甲基乙醇胺772μl(668.1mg，7.5mmol)、koh1627.1mg(29mmol)溶于50ml四氫呋喃中，在70℃加熱反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后過濾，收集濾液，旋蒸，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相旋干，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得式y(tǒng)-5所示的化合物；

f5、將式y(tǒng)-5所示的化合物480mg(1.6mmol)溶于10ml干燥的四氫呋喃中，將溴甲基硼酸頻那醇酯279.4μl(352.0mg，1.6mmol)溶于5ml干燥的四氫呋喃中，然后將上述溴甲基硼酸頻那醇酯的四氫呋喃溶液逐滴加入上述式y(tǒng)-5所示的化合物的四氫呋喃溶液中，在室溫、氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下反應(yīng)3h，將四氫呋喃旋干，得到式y(tǒng)-6所示的化合物；

f6、將式y(tǒng)-6所示的化合物478mg(1.1mmol)溶于1mln，n-二甲基甲酰胺中，加入1ml氟氫化鉀水溶液(4m)、1ml鹽酸(3m)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，在45℃反應(yīng)2h，加入10μl氨水淬滅，調(diào)節(jié)ph值至中性，旋干，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝20/1，v/v)，得到上述式a-i-2所示的化合物；

f7、取炔雌醇53.3mg(0.18mmol)溶解于4mln，n-二甲基甲酰胺/水(1/1，v/v)中，將式a-i-2所示的化合物66mg(0.18mmol)加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o9mg(0.036mmol)、naasc71.3mg(0.36mmol)和三(2-苯并咪唑基甲基)胺7.2mg(0.018mmol)，控制上述反應(yīng)體系中n，n-二甲基甲酰胺與h2o體積比為1∶0.9，在45℃下反應(yīng)2h，將所得反應(yīng)液旋干，加入n，n-二甲基甲酰胺30ml并離心，取上清液，即得式a-ii-b所示的化合物；

f8、將所述式a-ii-b所示的化合物1.67mg(0.0025mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺100μl中，配制成25nm/μl溶液，然后用300μl噠嗪-鹽酸-n，n-二甲基甲酰胺(ph＝2.5)緩沖液將200mci的¹⁸f^-溶液經(jīng)qma柱洗脫，收集，取20μl式a-ii-b所示的化合物加入到收集的¹⁸f^-溶液中，在85℃下反應(yīng)30min，用水稀釋，然后負(fù)載c18柱純化，用水洗滌三次，每次10ml，即得所述式(i-a)所示的化合物。

將上述制備的標(biāo)記前體a-ii-b進(jìn)行¹h-nmr分析，其圖譜分別如圖3所示。

實(shí)施例5

本實(shí)施例所述的具有式(i)所示結(jié)構(gòu)¹⁸f標(biāo)記的炔雌醇，如圖1所示，其中r1為3，6，9，12-四氧雜十四烷亞基，具有式(i-b)結(jié)構(gòu)：

化合物(i-b)的合成路線為：

上述式i-a所示的化合物的合成步驟包括：

f1、室溫下，將式y(tǒng)-1所示的四聚乙二醇9076mg(50mmol)溶解于40ml二氧六環(huán)中，加入naoh4001mg(100mmol)水溶液6ml，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯9532.5mg(50mmol)的二氧六環(huán)溶液60ml，滴加完畢，置于冰浴中反應(yīng)2.5h，反應(yīng)完畢采用二氯甲烷萃取，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝30/1，v/v)，旋干，得到油狀物，即式y(tǒng)-2所示的化合物；

f2、將式y(tǒng)-2所示的化合物5221.8mg(15mmol)與疊氮化鈉2700.5mg(45mmol)溶于30ml二甲亞砜中，在97℃下加熱反應(yīng)17h，反應(yīng)結(jié)束采用二氯甲烷萃取，旋蒸，得到油狀物，即式y(tǒng)-3所示的化合物；

f3、將式y(tǒng)-3所示的化合物1095.6mg(5mmol)溶于15ml乙腈中，加入4-二甲氨基吡啶258.7mg(2.1mmol)和三乙胺6.6ml(50mmol)，冰浴下攪拌，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯2859.8mg(15mmol)的乙腈溶液15ml，滴加完畢，室溫反應(yīng)過夜，分別用1m鹽酸和飽和食鹽水洗滌各洗滌三次，有機(jī)相旋蒸，經(jīng)柱層析分離純化(正己烷/乙酸乙酯＝2/1，v/v)，得到黃色油狀物，即式y(tǒng)-4所示的化合物；

f4、將式y(tǒng)-4所示的化合物2238.8mg(6mmol)、n，n-二甲基乙醇胺535.3μl(463.2mg，5.2mmol)、koh1133.4mg(20.2mmol)溶于35ml四氫呋喃中，在65℃下加熱反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后過濾，收集濾液，旋蒸，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相旋干，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得式y(tǒng)-5所示的化合物；

f5、將式y(tǒng)-5所示的化合物300mg(1mmol)溶于5ml干燥的乙腈中，將溴甲基硼酸頻那醇酯174.6μl(220mg，1mmol)溶于2.5ml干燥的乙腈中，然后將上述溴甲基硼酸頻那醇酯的乙腈溶液逐滴加入上述式y(tǒng)-5所示的化合物的乙腈溶液中，在室溫、氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下反應(yīng)3.5h，將乙腈旋干，得到式y(tǒng)-6所示的化合物；

f6、將式y(tǒng)-6所示的化合物217.3mg(0.5mmol)溶于0.5ml乙醇中，加入0.5ml氟氫化鉀水溶液(4m)、0.5ml鹽酸(3m)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，在47℃反應(yīng)1.5h，加入5μl氨水淬滅，調(diào)節(jié)ph值至中性，旋干，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝20/1，v/v)，得到上述式a-i-2所示的化合物；

f7、取炔雌醇44.4mg(0.15mmol)溶解于4ml丙酮/水(1/1，v/v)中，將式a-i-2所示的化合物71.5mg(0.195mmol)加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o6.75mg(0.027mmol)、naasc53.5mg(0.27mmol)和三(2-苯并咪唑基甲基)胺4.9mg(0.12mmol)，控制上述反應(yīng)體系中丙酮與h2o體積比為1∶1，在50℃下反應(yīng)0.5h，將所得反應(yīng)液旋干，加入丙酮25ml并離心，取上清液，即得式a-ii-b所示的化合物；

f8、將所述式a-ii-b所示的化合物1.34mg(0.0020mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺80μl中，配制成25nm/μl溶液，然后用240μl噠嗪-鹽酸-n，n-二甲基甲酰胺(ph＝2.5)緩沖液將160mci的¹⁸f^-溶液經(jīng)qma柱洗脫，收集，取20μl式a-ii-b所示的化合物加入到收集的¹⁸f^-溶液中，在80℃下反應(yīng)30min，用水稀釋，然后負(fù)載c18柱純化，用水洗滌三次，每次10ml，即得所述式(i-b)所示的化合物。

實(shí)施例6

本實(shí)施例所述的具有式(i)所示結(jié)構(gòu)18f標(biāo)記的炔雌醇，如圖1所示，其中r1為3，6，9，12-四氧雜十四烷亞基，具有式(i-b)結(jié)構(gòu)：

化合物(i-b)的合成路線為：

上述式i-a所示的化合物的合成步驟包括：

f1、室溫下，將式y(tǒng)-1所示的四聚乙二醇1941.2mg(10mmol)溶解10mln，n-二甲基甲酰胺中，加入koh1268.5mg(22.6mmol)水溶液1.5ml，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯1906.5mg(10mmol)的n，n-二甲基甲酰胺溶液15ml，滴加完畢，置于冰浴中反應(yīng)1.5h，反應(yīng)完畢采用二氯甲烷萃取，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝30/1，v/v)，旋干，得到油狀物，即式y(tǒng)-2所示的化合物；

f2、將式y(tǒng)-2所示的化合物1740.6mg(5mmol)與疊氮化鈉900.0mg(15mmol)溶于10mln，n-二甲基甲酰胺中，在93℃下加熱反應(yīng)15h，反應(yīng)結(jié)束采用二氯甲烷萃取，旋蒸，得到油狀物，即式y(tǒng)-3所示的化合物；

f3、將式y(tǒng)-3所示的化合物657.4mg(3mmol)溶于10ml二甲亞砜中，加入4-二甲氨基吡啶160.1g(1.3mmol)和三乙胺4.0ml(30mmol)，冰浴下攪拌，緩慢滴加含對(duì)甲苯磺酰氯1715.9mg(9.0mmol)的二甲亞砜溶液10ml，滴加完畢，室溫反應(yīng)過夜，分別用1m鹽酸和飽和食鹽水洗滌各洗滌三次，有機(jī)相旋蒸，經(jīng)柱層析分離純化(正己烷/乙酸乙酯＝2/1，v/v)，得到黃色油狀物，即式y(tǒng)-4所示的化合物；

f4、將式y(tǒng)-4所示的化合物1492.5mg(4mmol)、n，n-二甲基乙醇胺360.3μl(311.8mg，3.5mmol)、koh756.8mg(13.5mmol)溶于25ml二甲亞砜中，在67℃加熱反應(yīng)10h，反應(yīng)結(jié)束后過濾，收集濾液，旋蒸，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相旋干，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得式y(tǒng)-5所示的化合物；

f5、將式y(tǒng)-5所示的化合物900mg(3mmol)溶于20ml干燥的n，n-二甲基甲酰胺中，將溴甲基硼酸頻那醇酯523.9μl(660mg，3mmol)溶于10ml干燥的的n，n-二甲基甲酰胺中，然后將上述溴甲基硼酸頻那醇酯的n，n-二甲基甲酰胺溶液逐滴加入上述式y(tǒng)-5所示的化合物的n，n-二甲基甲酰胺溶液中，在室溫、氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下反應(yīng)3h，將n，n-二甲基甲酰胺旋干，得到式y(tǒng)-6所示的化合物；

f6、將式y(tǒng)-6所示的化合物869.2mg(2.0mmol)溶于2ml乙腈中，加入2ml氟氫化鉀水溶液(4m)、2ml鹽酸(3m)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，在42℃反應(yīng)1.5h，加入20μl氨水淬滅，調(diào)節(jié)ph值至中性，旋干，經(jīng)柱層析分離純化(二氯甲烷/甲醇＝20/1，v/v)，得到上述式a-i-2所示的化合物；

f7、取炔雌醇59.2mg(0.2mmol)溶解于5ml乙腈/水(1/1，v/v)中，將式a-i-2所示的化合物66.0mg(0.18mmol)加入上述的炔雌醇溶液中，然后加入cuso4·5h2o11.0mg(0.044mmol)、naasc87.2mg(0.044mmol)和三(2-苯并咪唑基甲基)胺9.8mg(0.024mmol)，控制上述反應(yīng)體系中乙腈與h2o體積比為1∶1.1，在40℃下反應(yīng)1.0h，將所得反應(yīng)液旋干，加入乙腈30ml并離心，取上清液，即得式a-ii-b所示的化合物；

f8、將所述式a-ii-b所示的化合物2.01mg(0.0030mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺120μl中，配制成25nm/μl溶液，然后用450μl噠嗪-鹽酸-n，n-二甲基甲酰胺(ph＝2.5)緩沖液將300mci的¹⁸f^-溶液經(jīng)qma柱洗脫，收集，取20μl式a-ii-b所示的化合物加入到收集的¹⁸f^-溶液中，在85℃下反應(yīng)30min，用水稀釋，然后負(fù)載c18柱純化，用水洗滌三次，每次15ml，即得所述式(i-b)所示的化合物。

實(shí)驗(yàn)例

一、標(biāo)記前體和產(chǎn)物的純度分析

1.標(biāo)記前體的純度分析

在280nm紫外波長(zhǎng)下，將實(shí)施例1制備的標(biāo)記前體a-ii-a、實(shí)施例4制備的標(biāo)記前體a-ii-b分別進(jìn)行液相分析，結(jié)果如圖4、圖5所示，采用實(shí)施例1標(biāo)記前體a-ii-a、實(shí)施例4制備標(biāo)記前體a-ii-b的高效液相檢測(cè)顯示均為一單峰。其中，標(biāo)記前體a-ii-a純度為99％，保留時(shí)間tr為16.1min；標(biāo)記前體a-ii-b純度為99％，保留時(shí)間tr為16.5min。

2.標(biāo)記產(chǎn)物的純度分析

在280nm紫外波長(zhǎng)下，將實(shí)施例1制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-a、實(shí)施例4制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-b分別進(jìn)行放射性高效液相分析，結(jié)果如圖6、圖7所示，其中圖6為標(biāo)記產(chǎn)物i-a純化后radio-hplc分析圖譜，圖7為標(biāo)記產(chǎn)物i-b純化后radio-hplc分析圖譜，采用實(shí)施例1制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-a、實(shí)施例4制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-b的放射性高效液相檢測(cè)顯示均為一單峰。其中，標(biāo)記產(chǎn)物i-a純度為99％，保留時(shí)間tr為16.3min；標(biāo)記產(chǎn)物i-b純度為98％，保留時(shí)間tr為16.6min。

將實(shí)施例1制備的標(biāo)記前體a-ii-a、實(shí)施例4制備的標(biāo)記前體a-ii-b分別溶于dmf溶液，配制25nm/μl的溶液。采用200mci的18f^-用300μl的pry-hcl-dmf(ph＝2.5)的緩沖液從qma柱上洗脫下來(lái)，分別用ep管收集，將標(biāo)記前體a-ii-a、a-ii-b的dmf溶液分別加入到上述含18f-的ep管中，不同溫度下分別加熱20min。反應(yīng)混合物用水稀釋后負(fù)載到c18柱上，用水(3×10m1)洗滌。純的放射性標(biāo)記產(chǎn)物用乙醇與水(1∶1)洗脫到小玻璃瓶中。取一點(diǎn)樣品通過hplc進(jìn)行質(zhì)量控制分析。所得標(biāo)記率如圖8、圖9所示。80℃是一個(gè)有效標(biāo)記溫度并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。經(jīng)c18柱純化后，放化純＞98％。

二、體外穩(wěn)定性測(cè)試

1.標(biāo)記前體的體外穩(wěn)定性測(cè)試

將實(shí)施例1制備的標(biāo)記前體a-ii-a、實(shí)施例4制備的標(biāo)記前體a-ii-b分別與噠嗪-鹽酸(ph2.0-2.5)的緩沖液一起在不同溫度下加熱20min，用hplc檢測(cè)其純度，結(jié)果如圖10、圖11所示。

2.標(biāo)記產(chǎn)物的體外穩(wěn)定性測(cè)試

取100μci放射性的實(shí)施例1制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-a、實(shí)施例4制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-b分別加入到500μlpbs或血清(該血清biologicalindustries提供)中，并37℃分別孵育0，1，2，4h。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)，取出pbs混合液中一部分，直接進(jìn)行hplc分析；對(duì)于血清樣品，取70％mecn加至血清中，10000g離心5min，取上清用hplc分析。結(jié)果顯示，在4h后，標(biāo)記產(chǎn)物i-a的放化純?nèi)源笥?7％。其中，圖12為標(biāo)記產(chǎn)物i-a在pbs中孵育4h后radio-hplc分析圖譜，圖13為標(biāo)記產(chǎn)物i-a在血清中孵育4h后radio-hplc分析圖譜，圖14為標(biāo)記產(chǎn)物i-a在pbs和血清中孵育不同時(shí)間的放化純圖譜；圖15為標(biāo)記產(chǎn)物i-b在pbs中孵育4h后radio-hplc分析圖譜，圖16為標(biāo)記產(chǎn)物i-b在血清中孵育4h后radio-hplc分析圖譜，圖17為標(biāo)記產(chǎn)物i-b在pbs和血清中孵育不同時(shí)間的放化純圖譜。

三、脂水分配系數(shù)

1.標(biāo)記產(chǎn)物i-a脂水分配系數(shù)測(cè)定

將pbs緩沖液與等體積的正辛醇充分振蕩，使兩相相互飽和，室溫下靜置24h以上，用分液漏斗將兩相分離。取實(shí)施例1制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-a溶液0.05ml，加入1ml正辛醇、0.95mlpbs緩沖液混合，用渦旋混合器振蕩5min，充分混勻，然后4000g離心5min，在有機(jī)相和水相中分別取100μl樣品于γ計(jì)數(shù)管中，用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)定其放射性活度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。計(jì)算脂水分配系數(shù)的logp值。用公式logp＝log(cpm水相/cpm有機(jī)相)計(jì)算，實(shí)際得到：logp＝0.52±0.09，為親脂性。

2.標(biāo)記產(chǎn)物i-b脂水分配系數(shù)測(cè)定

將pbs緩沖液與等體積的正辛醇充分振蕩，使兩相相互飽和，室溫下靜置24h以上，用分液漏斗將兩相分離。取實(shí)施例2制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-b溶液0.05ml，加入1ml正辛醇、0.95mlpbs緩沖液混合，用渦旋混合器振蕩5min，充分混勻，然后4000g離心5min，在有機(jī)相和水相中分別取100μl樣品于γ計(jì)數(shù)管中，用γ計(jì)數(shù)儀測(cè)定其放射性活度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。計(jì)算脂水分配系數(shù)的logp值。用公式logp＝log(cpm水相/cpm有機(jī)相)計(jì)算，實(shí)際得到：logp＝-0.176±0.028，為親水性。

四、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

以6000個(gè)細(xì)胞/孔的密度將t47d細(xì)胞(所述細(xì)胞由南京科佰生物科技有限公司提供)接種到96孔板中，培養(yǎng)基體積100μl/孔，37℃過夜培養(yǎng)12h，吸除原有培養(yǎng)基后每孔加入200μl的含藥濃度為12.5、25、50、100μm培養(yǎng)基，每個(gè)濃度設(shè)置至少6個(gè)復(fù)孔，然后分別放入培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)3h，6h，12h，24h，達(dá)到培養(yǎng)時(shí)間時(shí)，每孔加入20μl的mtt(5mg/mlpbs)溶液，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，小心吸除上清液后，每孔加入150μl的dmso，放置在搖床上震蕩至孔底紫色結(jié)晶完全溶解，用酶標(biāo)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)下的吸光度od值，然后計(jì)算細(xì)胞生存率。標(biāo)記前體a-ii-a、a-ii-b細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別如圖18、19所示，在100μm藥物濃度下，t47d細(xì)胞生存率分別為89.2％、88.9％，說明標(biāo)記前體a-ii-a、a-ii-b對(duì)細(xì)胞是無(wú)毒的。

五、細(xì)胞攝取與阻斷

1.標(biāo)記產(chǎn)物i-a

將t47d乳腺癌細(xì)胞接種在24孔板，密度為2×10⁵細(xì)胞/孔，過夜培養(yǎng)。t47d細(xì)胞由實(shí)施例1制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-a在37℃下進(jìn)行培養(yǎng)15，30，60，120min，每孔0.5μci。在阻斷特異性結(jié)合的實(shí)驗(yàn)中，將雌二醇加入到24孔板的t47d細(xì)胞中，終濃度5μm。培養(yǎng)結(jié)束后，t47d細(xì)胞用pbs洗三遍，用0.1m的naoh裂解，收集裂解液，保留的放射性采用γ計(jì)數(shù)器測(cè)量。細(xì)胞攝取采用加入的劑量百分率表述(％ad)，該劑量經(jīng)衰變校正。所有的實(shí)驗(yàn)均三個(gè)復(fù)孔重復(fù)兩次。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖20所示，細(xì)胞總攝取率為3.5％，并能夠被雌二醇阻斷至1.7％，證明此標(biāo)記產(chǎn)物i-a對(duì)t47d細(xì)胞具有靶向性。

2.標(biāo)記產(chǎn)物i-b

將t47d乳腺癌細(xì)胞接種在24孔板，密度為2×10⁵細(xì)胞/孔，過夜培養(yǎng)。t47d細(xì)胞由實(shí)施例4制備的標(biāo)記產(chǎn)物i-b在37℃下進(jìn)行培養(yǎng)15，30，60，120min，每孔0.5μci。在阻斷特異性結(jié)合的實(shí)驗(yàn)中，將雌二醇加入到24孔板的t47d細(xì)胞中，終濃度5μm。培養(yǎng)結(jié)束后，t47d細(xì)胞用pbs洗三遍，用0.1m的naoh裂解，收集裂解液，保留的放射性采用γ計(jì)數(shù)器測(cè)量。細(xì)胞攝取采用加入的劑量百分率表述(％ad)，該劑量經(jīng)衰變校正。所有的實(shí)驗(yàn)均三個(gè)復(fù)孔重復(fù)兩次。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖21所示，細(xì)胞總攝取率為1.61％，并能夠被雌二醇阻斷至0.94％，證明此標(biāo)記產(chǎn)物i-b對(duì)t47d細(xì)胞具有靶向性。

顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無(wú)需也無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。