技術(shù)特征：

1.運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的方法及試劑盒，所采取的技術(shù)方案為：

1）針對需要檢測的每個(gè)甲型流感病毒亞型序列的保守區(qū)，設(shè)計(jì)其相應(yīng)的上下游連接引物、特異性熒光探針及一對熒光PCR通用引物，上游連接引物為普通引物，下游連接引物為5’磷酸化標(biāo)記引物；

上下游連接引物與樣本提取后的RNA靶片段互補(bǔ)配對，在連接酶的作用下，上下游連接引物連接成與靶片段完全互補(bǔ)配對的cDNA序列；

將連接后的cDNA序列作為熒光PCR反應(yīng)的模板，僅一對通用引物即可擴(kuò)增所有亞型序列連接后的cDNA序列，檢測反應(yīng)體系的熒光變化，達(dá)到對樣本甲型流感病毒H1、H3、H5和H7亞型檢測的目的。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，包括連接反應(yīng)管、熒光PCR反應(yīng)管、陰性對照和陽性對照，其中，連接反應(yīng)管含連接體系（含連接酶系統(tǒng)和上下游連接引物），熒光PCR反應(yīng)管含熒光PCR體系（含熱啟動(dòng)Taq酶系統(tǒng)、通用引物及各亞型對應(yīng)的熒光探針），熒光PCR體系中的熒光探針為甲型流感病毒H1、H3、H5和H7亞型的特異性MGB探針。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，通用引物的序列如下：

序列編號名稱序列（5’→3’）SEQ ID NO：9引物9CGCAAGGTTTCCACATCATCSEQ ID NO：10引物10CGATAACAATGCCACACAGG

。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，通用引物序列的特征表現(xiàn)為：一條與上游連接引物的5’端部分序列完全一致，另一條與下游連接引物的3’端部分序列互補(bǔ)配對，通用引物的長度在20～30bp。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，甲型流感病毒H1、H3、H5和H7亞型的特異性MGB探針的序列如下：

序列編號名稱序列（5’→3’）SEQ ID NO：11探針1 atattccccaaagaaagctcatgSEQ ID NO：12探針2 catcactccaaatggaagcattcSEQ ID NO：13探針3 gagtcaccaataaggtcaactSEQ ID NO：14探針4 ataatcttatggtttagcttcggg

上述探針的3’端連接有MGB，5’端連接有熒光基團(tuán)。

6.權(quán)利要求1或2所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，其連接酶系統(tǒng)中的連接酶僅能以RNA為模板進(jìn)行連接反應(yīng)，且每人份連接體系中連接酶用量為0.5U～3U。

7.權(quán)利要求1或2所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，所使用的熱啟動(dòng)Taq酶系統(tǒng)中添加有UDG酶。

8.權(quán)利要求1或2所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒，所使用的熱啟動(dòng)Taq酶系統(tǒng)含有經(jīng)過化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)Taq酶、dNTPs和UDG酶，其中每人份體系中熱啟動(dòng)Taq酶為4U～7U，dNTPs為0.1mmol/L～0.3mmol/L，UDG酶為0.1U～0.5U。

9.權(quán)利要求1或2所述的運(yùn)用連接酶檢測甲型流感病毒系列的試劑盒還設(shè)有RNA提取液，RNA提取液的組成成分為EDTA的濃度為0.001mol/L、Tris的濃度為0.01mol/L。

10.權(quán)利要求5所述的甲型流感病毒H1、H3、H5和H7亞型的特異性MGB探針，探針1～4連接的熒光基團(tuán)均不相同。