本發(fā)明涉及一種奧貝膽酸的中間體7-酮基石膽酸(3α-羥基-7-酮-5β-膽甾烷-24-酸)的化學(xué)合成方法，屬有機(jī)化學(xué)合成領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
奧貝膽酸(obeticholicacid)，化學(xué)名為6α-乙基-3α,7α-二羥基-5β-膽甾烷-24-酸，又名6-乙基鵝去氧膽酸或int-747，是一種半合成的鵝去氧膽酸，是人初級膽汁酸中鵝去氧膽酸的一種新型衍生物。
奧貝膽酸是美國intercept制藥公司開發(fā)的法尼醇受體x(farnesoidxreceptor,fxr)的強(qiáng)效激動(dòng)劑，可以抑制膽酸合成，具有較好的抗膽汁淤積、抗炎癥和抗纖維化的作用。2016年5月，奧貝膽酸(商品名ocaliva)獲得了美國fda的上市許可，用于治療原發(fā)性膽汁性肝硬化。目前奧貝膽酸的化學(xué)合成主要采用7-酮基石膽酸為起始原料。因此，研發(fā)環(huán)境友好、收率高、低成本、適合產(chǎn)業(yè)化的7-酮基石膽酸合成路線就顯得尤為重要。
7-酮基石膽酸的合成主要有兩種方法。
其一是采用鵝去氧膽酸為原料，電解或氧化制備7-酮基石膽酸(cn1912192a，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2015，46(10)：1058-1059等)。但是其合成原料鵝去氧膽酸價(jià)格昂貴，不便于工業(yè)化生產(chǎn)；
其二是采用膽酸為原料的化學(xué)合成方法，主要有以下幾條合成路線：
路線一是用膽酸與氯甲酰乙酯反應(yīng)選擇性保護(hù)3a-羥基，nbs選擇性氧化7a-羥基，三氯氧磷對12a-羥基進(jìn)行脫水，氫氧化鈉水解，二氧化鉑加氫還原不飽和雙鍵，得到7-酮基石膽酸(journaloflabelledcompoundsandradiopharmaceuticals,1979,16(3):421-434.)。此方法制備7-酮基石膽酸過程中需要用到較危險(xiǎn)和昂貴的試劑(如pocl3、pto2)，反應(yīng)時(shí)間長，產(chǎn)率低(26％)，不適合用于大生產(chǎn)，反應(yīng)式如下所示：
路線二是膽酸進(jìn)行甲酯化，3a-羥基和7a-羥基乙?；Ｗo(hù)，次氯酸鈉氧化12a-羥基，黃鳴龍還原c-12位羰基，c-24位酯基水解，次溴酸鈉氧化c-7位羥基為酮，得到7-酮基石膽酸(wo2014020024a1)。此方法制備7-酮基石膽酸過程中需要用到高溫的黃鳴龍反應(yīng)，對設(shè)備要求較高，產(chǎn)率低(58.94％)，不適合用于大生產(chǎn)，反應(yīng)式如下所示：
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明在現(xiàn)有技術(shù)(tetrahedron:asymmetry,2000,11(17):3463-3466)的基礎(chǔ)上，優(yōu)化其反應(yīng)條件后，進(jìn)一步進(jìn)行12α-羥基的甲磺酸酯化，消除、加氫、水解等反應(yīng)，合成7-酮基石膽酸。本發(fā)明旨在提供一種采用膽酸為原料，環(huán)境友好、收率高、低成本、適合產(chǎn)業(yè)化的7-酮基石膽酸合成路線。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
步驟a，在溶劑中，式(1)所示的膽酸與n-溴代琥珀酰亞胺(nbs)發(fā)生選擇性氧化反應(yīng)，得到式(2)化合物；
步驟b，在催化劑的作用下，式(2)化合物與醇發(fā)生酯化反應(yīng)，得到式(3)化合物；
步驟c，在溶劑中，在催化劑的作用下，式(3)化合物與酸酐發(fā)生酯化反應(yīng)，得到式(4)化合物；
步驟d，在非質(zhì)子溶劑中，在催化劑的作用下，式(4)化合物與甲磺酰氯(mscl)發(fā)生縮合反應(yīng)，得到式(5)化合物；
步驟e，在有機(jī)溶劑中，式(5)化合物在堿作用下發(fā)生消除反應(yīng)，得到式(6)化合物；
生成的式(6)化合物可通過兩種方法制備目標(biāo)式(9)化合物：
方法一：
步驟f，在溶劑中，在堿的作用下，式(6)化合物c-3位酯基水解，得到式(7)化合物；
步驟g，在有機(jī)溶劑中，式(7)化合物c-24位酯基在堿的作用下發(fā)生水解反應(yīng)，得到式(8)化合物；
步驟h，在溶劑中，在鈀碳催化下，式(8)化合物發(fā)生氫化還原反應(yīng)，得到式(9)化合物7-酮基石膽酸；
方法二：
步驟i，在溶劑中，式(6)化合物在鈀碳催化下發(fā)生氫化還原反應(yīng)，得到式(10)化合物；
步驟j：在溶劑中，式(10)化合物在堿的作用下發(fā)生水解反應(yīng)，得到式(9)化合物7-酮基石膽酸。
反應(yīng)過程如路線(1)所示：
其中，r1為c1～c20的烷基；r2為c1～c20烷基酰基。
優(yōu)選地，r1為c1-c8的烷基；r2為c1～c8烷基酰基。
進(jìn)一步優(yōu)選地，r1選自甲基(-ch3)、乙基(-ch2ch3)、丙基(-ch2ch2ch3)、丁基(-ch2ch2ch2ch3)；r2選自乙?；?-coch3)、丙?；?-coch2ch3)、丁?；?-coch2ch2ch3)。
進(jìn)一步優(yōu)選地，r1是甲基(-ch3)；r2是乙?；?-coch3)。
(采用膽酸為原料，優(yōu)化tetrahedron:asymmetry11(2000)3463–34663中3α-乙酰氧基-7-酮-12α–羥基膽酸甲酯的合成方法，合成化合物(4))。
步驟a中，所述式(1)化合物和n-溴代琥珀酰亞胺(nbs)的摩爾比為1：(1～5)；優(yōu)選地，為1：1.6。
步驟a中，所述溶劑選自丙酮、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)、水等中的一種或多種；優(yōu)選地，為丙酮和水的混合溶劑；進(jìn)一步優(yōu)選地，為丙酮：水(體積比)＝3：1。
步驟a中，所述選擇性氧化反應(yīng)的溫度為0～40℃；優(yōu)選地，為室溫25℃。
步驟a中，所述選擇性氧化反應(yīng)的時(shí)間為1～4h；優(yōu)選地，為2h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為室溫25℃反應(yīng)2h。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟a包括：取式(1)所示的膽酸溶解在溶劑中，然后加入nbs，得到式(2)化合物。
步驟b中，所述醇同時(shí)起到溶劑的作用，選自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等中的一種或多種，優(yōu)選地，為甲醇。
步驟b中，所述催化劑選自濃硫酸、對甲苯磺酸中的一種或兩種；優(yōu)選地，為濃硫酸。
步驟b中，所述酯化反應(yīng)的溫度為0～70℃；優(yōu)選地，為70℃。
步驟b中，所述酯化反應(yīng)的時(shí)間為2～4h；優(yōu)選地，為2h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為70℃反應(yīng)2h。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟b包括：取式(2)化合物溶解在甲醇中，加入濃硫酸，得到式(3)化合物。
步驟c中，所述酸酐選自甲酸酐、乙酸酐、丙酸酐、丁酸酐等，優(yōu)選地，為乙酸酐。
步驟c中，所述溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃等，優(yōu)選地，為二氯甲烷。
步驟c中，所述催化劑選自吡啶、dmap、三乙胺等中的一種或多種；優(yōu)選地，為吡啶和dmap。
步驟c中，所述酯化反應(yīng)的溫度為0～40℃；優(yōu)選地，為室溫25℃。
步驟c中，所述酯化反應(yīng)的時(shí)間為1～4h；優(yōu)選地，為2h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為室溫25℃反應(yīng)2h。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟c包括：取式(3)化合物溶解在溶劑中，加入乙酸酐、吡啶、dmap，得到式(4)化合物。
步驟d中，所述式(4)化合物與mscl和有機(jī)堿的摩爾比為：1：(1～20)：(2～20)；優(yōu)選地，為1：(1～10)：(2～10)；進(jìn)一步優(yōu)選地，為1：5：5。
步驟d中，所述非質(zhì)子溶劑選自二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二氧六環(huán)、乙腈、二氯乙烷等中的一種或多種；優(yōu)選地，為二氯甲烷。
步驟d中，所述催化劑為有機(jī)堿，選自吡啶、三乙胺、二乙胺、dmap等中的一種或多種；優(yōu)選地，為吡啶。
步驟d中，所述縮合反應(yīng)的溫度為20～40℃；優(yōu)選地，為室溫25℃。
步驟d中，所述縮合反應(yīng)的時(shí)間為5～10h；優(yōu)選地，8h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為室溫25℃反應(yīng)8h。
步驟d中，所述縮合反應(yīng)優(yōu)選在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。
步驟d中，所述mscl的作用為反應(yīng)物。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟d包括：取式(4)化合物溶解在非質(zhì)子溶劑中，依次加入mscl，催化劑，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，發(fā)生縮合反應(yīng)，得到式(5)化合物。
步驟e中，所述堿選自乙酸鉀、碳酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉等中的一種或多種；優(yōu)選地，為乙酸鉀。
步驟e中，所述式(5)化合物與堿的摩爾比為1：(1～20)；優(yōu)選地，為1：(1～10)；進(jìn)一步優(yōu)選地為1：10。
步驟e中，所述有機(jī)溶劑為高沸點(diǎn)溶劑，選自n-甲基吡咯烷酮(nmp)、n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、n,n-二甲基丙烯基脲(dmpu)、二甲基亞砜(dmso)等中的一種或多種；優(yōu)選地，為n-甲基吡咯烷酮(nmp)。
步驟e中，所述消除反應(yīng)的溫度為100～130℃；優(yōu)選地，為130℃。
步驟e中，所述消除反應(yīng)的時(shí)間為5～10h；優(yōu)選地，為8h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為130℃反應(yīng)8h。
步驟e中，所述堿的作用為使mso-脫掉形成雙鍵。
步驟e中，所述消除反應(yīng)優(yōu)選在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟e包括：取式(5)化合物溶解在溶劑中，加入乙酸鉀，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，發(fā)生消除反應(yīng)，得到式(6)化合物。
生成的式(6)化合物可通過兩種方法制備目標(biāo)式(9)化合物：
方法一：
步驟f中，所述堿優(yōu)選為無機(jī)堿，選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等中的一種或多種；優(yōu)選地，為氫氧化鈉。
步驟f中，所述式(6)化合物與堿的摩爾比為1：(1～20)；優(yōu)選地，為1：(1～5)；優(yōu)選地為1：1.5。
步驟f中，所述溶劑選自甲醇、四氫呋喃、乙醇、異丙醇、叔丁醇、水等中的一種或多種；優(yōu)選地，為甲醇、四氫呋喃或其混合溶劑，其中，當(dāng)為混合溶劑時(shí)，甲醇與四氫呋喃的體積比為(1～10)：1，優(yōu)選地為4：1。
步驟f中，所述酯基水解反應(yīng)的溫度為20～40℃；優(yōu)選地，為25℃。
步驟f中，所述酯基水解反應(yīng)的時(shí)間為10～100min；優(yōu)選地，為30min；進(jìn)一步優(yōu)選地，為25℃條件下，攪拌反應(yīng)30min。
步驟f中，所述堿的作用為水解3位的酯基。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟f包括：取式(6)化合物溶解在甲醇或四氫呋喃或其混合溶劑中，加入無機(jī)堿，反應(yīng)得到式(7)化合物。
步驟g中，所述堿優(yōu)選為無機(jī)堿，選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀等中的一種或多種；優(yōu)選地，為氫氧化鈉。
步驟g中，所述式(7)化合物與堿的摩爾比為1：(1～20)；優(yōu)選地，為1：(1～5)；進(jìn)一步優(yōu)選地，為1：4。
步驟g中，所述有機(jī)溶劑選自甲醇、四氫呋喃、乙醇、異丙醇、叔丁醇、水等中的一種或多種；優(yōu)選地，為甲醇、四氫呋喃或其混合溶劑，其中，當(dāng)為混合溶劑時(shí)，甲醇與四氫呋喃的體積比為(1～10)：1，優(yōu)選地，為4：1。
步驟g中，所述水解反應(yīng)的溫度為20～80℃；優(yōu)選地，為80℃。
步驟g中，所述水解反應(yīng)的時(shí)間為2～10h；優(yōu)選地，為3h。
步驟g中，所述堿的作用為水解式(7)化合物c-24位的酯基。
步驟g中，所述水解反應(yīng)優(yōu)選在回流狀態(tài)下進(jìn)行。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟g包括：取式(7)化合物溶解在甲醇或四氫呋喃或其混合溶劑中，加入無機(jī)堿反應(yīng)，得到式(8)化合物。
步驟h中，所述式(8)化合物與鈀碳(質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5％)的重量比為1：(0.01～0.4)；優(yōu)選地為1：0.1。
步驟h中，所述溶劑選自甲醇、四氫呋喃、乙醇、異丙醇、叔丁醇、水等中的一種或多種；優(yōu)選地，為甲醇、四氫呋喃或其混合溶劑，其中，當(dāng)為混合溶劑時(shí)，甲醇與四氫呋喃的體積比為(1～10)：1，優(yōu)選地，4：1。
步驟h中，所述氫化還原反應(yīng)的壓力條件為：氫氣壓力范圍為0.1～10mpa；優(yōu)選地，為4mpa。
步驟h中，所述氫化還原反應(yīng)的溫度為60～80℃；優(yōu)選地為70℃。
步驟h中，所述氫化還原反應(yīng)的時(shí)間為4～15h；優(yōu)選地，為8h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為70℃反應(yīng)8h。
步驟h中，所述氫化還原反應(yīng)優(yōu)選在回流狀態(tài)下進(jìn)行。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟h包括：取式(8)化合物溶解在甲醇或四氫呋喃或其混合溶劑中，加入鈀碳，保持氫氣加壓，發(fā)生氫化還原反應(yīng)，得到式(9)化合物(7-酮基石膽酸)。
方法二：
步驟i中，所述式(6)化合物與鈀碳(質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5％)的重量比為1：(0.01～0.4)；優(yōu)選地為1：0.1。
步驟i中，所述氫化還原反應(yīng)的條件為：氫氣的壓力范圍為0.1～10mpa，優(yōu)選地，為4mpa。
步驟i中，所述溶劑選自甲醇、四氫呋喃、乙醇、異丙醇、叔丁醇、水等中的一種或多種；優(yōu)選地，為甲醇、四氫呋喃或其混合溶劑，其中，當(dāng)為混合溶劑時(shí)，甲醇與四氫呋喃的體積比為(1～10：1)；優(yōu)選地，為4：1。
步驟i中，所述氫化還原反應(yīng)的溫度為60～80℃；優(yōu)選地，為70℃。
步驟i中，所述氫化還原反應(yīng)的時(shí)間為4～15h；優(yōu)選地，為8h；進(jìn)一步優(yōu)選地，為70℃反應(yīng)8h。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟i包括：取式(6)化合物溶解在甲醇或四氫呋喃或其混合溶劑中，加入鈀碳，保持氫氣加壓，反應(yīng)得到式(10)化合物。
步驟j中，所述堿優(yōu)選為無機(jī)堿，選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉等中的一種或多種；優(yōu)選地，為氫氧化鈉。
步驟j中，所述溶劑選自甲醇、四氫呋喃、乙醇、異丙醇、叔丁醇、水等中的一種或多種；優(yōu)選地，為甲醇、四氫呋喃或其混合溶劑，其中，當(dāng)為混合溶劑時(shí)，甲醇與四氫呋喃的體積比為(1～10)：1，優(yōu)選地，為4：1。
步驟j中，所述式(10)化合物與堿的摩爾比為1：(1～20)；優(yōu)選地，為1：(1～5)；進(jìn)一步優(yōu)選地為1：4。
步驟j中，所述水解反應(yīng)的溫度為20～80℃；優(yōu)選地，為70℃。
步驟j中，所述水解反應(yīng)的時(shí)間為2～10h；優(yōu)選地，為4h。
步驟j中，所述水解反應(yīng)在回流狀態(tài)下進(jìn)行。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述步驟j包括：取式(10)化合物溶解在甲醇或四氫呋喃或其混合溶劑中，加入無機(jī)堿，回流反應(yīng)得到式(9)化合物(7-酮基石膽酸)。
本發(fā)明還提出了3-烷酰氧基-7-羰基-12-甲磺酰氧基-5β-膽酸酯和3-烷酰氧基-7-羰基-5β-11-膽烯酸酯化合物，其結(jié)構(gòu)分別如式(5)、(6)所示：
其中，r1為c1～c20的烷基，且r1不等于甲基；r2為c1～c20烷基?；?。
優(yōu)選地，r1為c1-c8的烷基，且r1不等于甲基；r2為c1～c8烷基?；?/p>
進(jìn)一步優(yōu)選地，r1選自乙基(-ch2ch3)、丙基(-ch2ch2ch3)、丁基(-ch2ch2ch2ch3)；r2選自乙?；?-coch3)、丙?；?-coch2ch3)、丁?；?-coch2ch2ch3)。
本發(fā)明的有益效果在于，本發(fā)明合成奧貝膽酸的中間體7-酮基石膽酸采用廉價(jià)的膽酸為原料，經(jīng)過7α-羥基的選擇性氧化、側(cè)鏈羧基的酯化、3α-羥基的酯化、12α-羥基的甲磺酸酯化，消除、加氫、水解等反應(yīng)合成所述奧貝膽酸的中間體7-酮基石膽酸，操作步驟簡單，環(huán)境友好，收率高(55％-60％)，低成本，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
結(jié)合以下具體實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實(shí)施本發(fā)明的過程、條件、實(shí)施方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領(lǐng)域的普遍知識和公知常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。
實(shí)施例一
1、式(2)化合物的合成：將膽酸(9g，22.0mmol)溶解在200ml丙酮/水(v/v＝3:1)中，避光，緩慢加入nbs(5.7g，31.9mmol)，室溫25℃反應(yīng)2h。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入100ml飽和亞硫酸氫鈉溶液淬滅反應(yīng)，減壓除去溶劑至出現(xiàn)白色固體時(shí)停止，倒入1l水中后析出大量白色固體，靜置析晶，抽濾烘干，得式(2)化合物(8.5g白色固體,產(chǎn)率95％)。直接用于下一步。
2、式(3-1)化合物的合成：將式(2)化合物(8.5g,20.8mmol)溶解在100ml甲醇中，逐滴加入濃硫酸1ml，加熱回流2h,減壓除去甲醇，加入水30ml，用二氯甲烷(30ml×3)萃取水相。合并有機(jī)相，分別用水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，減壓濃縮，得到式(3-1)化合物(8.7g白色固體，產(chǎn)率99％)。直接用于下一步。
3、式(4-1)化合物的合成：將式(3-1)化合物(8.7g，20.6mmol)溶解在80ml二氯甲烷中，加入乙酸酐(2.5ml，26.78mmol)，吡啶(3.3ml，41.2mmol)和dmap(125.8mg，1.03mmol)，室溫25℃反應(yīng)2h。tlc檢測反應(yīng)完全后，減壓除去溶劑，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)水相，合并有機(jī)相，分別用2m鹽酸(50ml)，水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，減壓濃縮后硅膠柱層析(pe:ea＝3:1)得到式(4-1)化合物(8.6g白色固體，產(chǎn)率90％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35(s,5h),5.15–5.07(m,2h),4.68(s,1h),3.99(s,1h),2.00(s,3h),1.19(s,3h),0.96(d,j＝3.6hz,3h),0.65(s,3h).
4、式(5-1)化合物的合成：將式(4-1)化合物(8.6g，18.5mmol)溶解在80ml二氯甲烷中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，依次滴加mscl(7.2ml，93mmol)，吡啶(7.4ml，93mmol)，室溫25℃反應(yīng)8h。tlc檢測反應(yīng)完全后，減壓除去溶劑，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)水相，合并有機(jī)相，分別用2m鹽酸(50ml)，水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，減壓濃縮后硅膠柱層析(pe:ea＝5:1)得到式(5-1)化合物(9.5g白色固體，產(chǎn)率95％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.12(s,1h),4.70–4.62(m,1h),3.66(s,3h),3.06(s,3h),1.99(s,3h),1.20(s,3h),0.98(d,j＝6.4hz,3h),0.76(s,3h).
5、式(6-1)化合物的合成：將式(5-1)化合物(9.5g，17.6mmol)溶解在n-甲基吡咯烷酮(80ml)中，加入乙酸鉀(17.2g，176mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加熱至130℃反應(yīng)8h。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入水(150ml)，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有機(jī)相，水洗，飽和食鹽水洗，無水na2so4干燥，濃縮，硅膠柱層析(pe:ea＝10:1)純化，得式(6-1)化合物(7.04g白色固體，產(chǎn)率90％)。。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.21(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),5.33(dd,j＝8.4,1.2hz,1h),4.74–4.67(m,1h),3.66(s,3h),1.99(s,3h),1.14(s,3h),1.01(d,j＝5.2hz,3h),0.74(s,3h).
6、式(7-1)化合物的合成：將式(6-1)化合物(7.04g，15.84mmol)溶解在甲醇(48ml)和四氫呋喃(12ml)的混合溶劑中，加入氫氧化鈉(950mg，23.76mmol)，室溫25℃攪拌30分鐘。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入2m鹽酸調(diào)ph為5，減壓除去溶劑，加入水(80ml)，用乙酸乙酯萃取(30ml×3)水相，合并有機(jī)相，分別用水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，減壓濃縮后硅膠柱層析(pe:ea＝2:1)得式(7-1)化合物(6.1g白色固體，收率95％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.20(d,j＝10.0hz,1h),5.35(d,j＝10.0hz,1h),3.66(s,3h),3.62(s,1h),1.13(s,3h),1.01(d,j＝6.0hz,3h),0.74(s,3h).
7、式(8)化合物的合成：將式(7-1)化合物(6.1g，15.05mmol)溶解在甲醇(48ml)和四氫呋喃(12ml)的混合溶劑中，加入氫氧化鈉(2.4g,60.2mmol)，加熱回流反應(yīng)3h。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入2m鹽酸調(diào)ph為5左右，減壓除去溶劑，加入水(80ml)，用二氯甲烷萃取(30ml×3)，合并有機(jī)相，分別用水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，減壓濃縮后硅膠柱層析(dcm:meoh＝20:1)純化，得式(8)化合物(5.8g白色固體，收率92％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.20(d,j＝10.4hz,1h),5.35(d,j＝10.0hz,1h),3.62(s,1h),1.13(s,3h),1.02(d,j＝6.0hz,3h),0.74(s,3h).
8、式(9)化合物的合成：將式(8)化合物(5.8g，13.8mmol)溶解在甲醇(48ml)和四氫呋喃(12ml)的混合溶劑中，加入鈀碳(580mg)，氫氣加壓至4mpa，加熱至70℃反應(yīng)8h。tlc檢測反應(yīng)完全后，抽濾，減壓濃縮后硅膠柱層析(dcm:meoh＝10:1)，得式(9)化合物(7-酮基石膽酸)(5.12g白色固體，收率95％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ3.64–3.57(m,1h),1.19(s,3h),0.93(d,j＝5.2hz,3h),0.65(s,3h).
實(shí)施例二
1、式(2)化合物的合成：將膽酸(9g，22.0mmol)溶解在200ml丙酮/水(v/v＝3:1)中，避光攪拌，緩慢加入nbs(5.7g，31.9mmol)，室溫25℃反應(yīng)2h。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入100ml飽和亞硫酸氫鈉溶液淬滅反應(yīng)，減壓濃縮至出現(xiàn)白色固體時(shí)，倒入1l水中后析出大量白色固體，靜置析晶，抽濾烘干，得式(2)化合物(8.5g白色固體,產(chǎn)率95％)。直接用于下一步。
2、式(3-1)化合物的合成：將式(2)化合物(8.5g,20.8mmol)溶解在100ml甲醇中，逐滴加入濃硫酸1ml，加熱回流2h,減壓除去甲醇，加入水30ml，用二氯甲烷(30ml×3)萃取水相。合并有機(jī)相，分別用水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，減壓濃縮，得到式(3-1)化合物(8.7g白色固體，產(chǎn)率99％)。直接用于下一步。
3、式(4-1)化合物的合成：將式(3-1)化合物(8.7g，20.6mmol)溶解在80ml二氯甲烷中，依次加入2.5ml乙酸酐(26.78mmol)，3.3ml吡啶(41.2mmol)和125.8mgdmap(1.03mmol)，室溫25℃反應(yīng)2h。旋蒸溶劑，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取(30ml×3)，合并有機(jī)相，稀鹽酸洗，水洗，飽和食鹽水洗，無水na2so4干燥，濃縮，硅膠柱層析(pe:ea＝3:1)純化，得8.6g式(4-1)化合物，收率90％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35(s,5h),5.15–5.07(m,2h),4.68(s,1h),3.99(s,1h),2.00(s,3h),1.19(s,3h),0.96(d,j＝3.6hz,3h),0.65(s,3h).
4、式(5-1)化合物的合成：將式(4-1)化合物(8.6g，18.5mmol)溶解在80ml二氯甲烷中，依次加入mscl(7.2ml，93mmol)，吡啶(7.4ml，93mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，室溫25℃反應(yīng)8h。tlc檢測反應(yīng)完全后，減壓除去溶劑，加入50ml水，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有機(jī)相，稀鹽酸洗，水洗，飽和食鹽水洗，無水na2so4干燥，濃縮，硅膠柱層析(pe:ea＝5:1)純化，得式(5-1)化合物(9.5g白色固體，產(chǎn)率95％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.12(s,1h),4.70–4.62(m,1h),3.66(s,3h),3.06(s,3h),1.99(s,3h),1.20(s,3h),0.98(d，j＝6.4hz，3h)，0.76(s，3h).
5、式(6-1)化合物的合成：將式(5-1)化合物(9.5g，17.6mmol)溶解在n-甲基吡咯烷酮(80ml)中，加入乙酸鉀(17.2g，176mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加熱至130℃反應(yīng)8h。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入水(150ml)，用乙酸乙酯萃取(50ml×3)，合并有機(jī)相，分別用水(50ml)、飽和nacl溶液(50ml)洗滌，無水na2so4干燥，濃縮，硅膠柱層析(pe:ea＝10:1)純化，得式(6-1)化合物(7.04g白色固體，產(chǎn)率90％)。。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ6.21(dd,j＝8.4,2.4hz,1h),5.33(dd,j＝8.4,1.2hz,1h),4.74–4.67(m,1h),3.66(s,3h),1.99(s,3h),1.14(s,3h),1.01(d,j＝5.2hz,3h),0.74(s,3h).
6、式(10-1)化合物的合成：將式(6-1)化合物(7.04g，15.84mmol)溶解在甲醇(48ml)和四氫呋喃(12ml)的混合溶劑中，加入鈀碳(704mg)，氫氣加壓至4mpa，加熱至70℃反應(yīng)8個(gè)小時(shí)。tlc檢測反應(yīng)完全后，硅藻土抽濾，減壓濃縮，硅膠柱層析(dcm:meoh＝10:1)，得式(10-1)化合物(5.7g白色固體，產(chǎn)率80％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.70–4.66(m,1h),3.66(s,3h),1.99(s,3h),1.20(s,3h),0.91(d,j＝5.2hz,3h),0.65(s,3h).
7、式(9)化合物的合成：將式(10-1)化合物(5.7g，15.78mmol)溶解在甲醇(48ml)和四氫呋喃(12ml)的混合溶劑中，加入氫氧化鈉(2.5g，63.12mmol)，加熱回流3h。tlc檢測反應(yīng)完全后，加入2m鹽酸調(diào)ph為5左右，減壓除去溶劑，加入水(80ml)，用二氯甲烷萃取(50ml×3)，合并有機(jī)相，水洗，飽和食鹽水洗，無水na2so4干燥，減壓濃縮，硅膠柱層析(dcm:meoh＝20:1)，得式(9)化合物(7-酮基石膽酸)(4.73g白色固體，產(chǎn)率95％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ3.64–3.57(m,1h),1.19(s,3h),0.93(d,j＝5.2hz,3h),0.65(s,3h).
本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容不局限于以上實(shí)施例。在不背離發(fā)明構(gòu)思的精神和范圍下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到的變化和優(yōu)點(diǎn)都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權(quán)利要求書為保護(hù)范圍。