【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及一種花青素分離純化方法，具體涉及一種以水為溶劑的從油菜中提取花青素的方法。
背景技術(shù)：
植物源花青素是重要天然功能性食品添加劑，廣泛應(yīng)用于飲料、糖果、糕點(diǎn)、酒類及休閑食品等行業(yè)，而且也可用于醫(yī)療保健品及兒童食品等特殊食品的生產(chǎn)。天然植物花青素的研究與開發(fā)方興未艾，其中天然花青素功能成分分離、純化及其生物學(xué)活性研究已成為功能食品研究重要領(lǐng)域。
油菜屬十字花科(cruciferae)蕓薹屬，又名卷心菜、包菜等，原產(chǎn)歐洲地中海地區(qū)。油菜作為一種食用性蔬菜，在我國(guó)已有一百多年的種植歷史，大部分省區(qū)均有栽培，產(chǎn)量?jī)H次于白包菜。由于油菜具有耐寒，來源豐富，價(jià)格低廉，花青素含量高等優(yōu)點(diǎn)，因此，以油菜為原料分離、純化花青素具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值和良好的產(chǎn)業(yè)化前景。
從化學(xué)結(jié)構(gòu)上講，油菜花青素屬于花色苷類物質(zhì)，具有重要的生理活性功能?？茖W(xué)研究發(fā)現(xiàn)，花色苷類物質(zhì)可以清除體內(nèi)自由基，具有抗氧化、抗衰老、改善視力、抑制腫瘤等功能。油菜花青素易溶于水，安全無(wú)毒，是一種新型天然花青素，可以作為重要功能性食品添加劑開發(fā)。然而，目前國(guó)內(nèi)外油菜花青素僅限于采用有機(jī)溶劑提取，花青素的純度低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供了一種能夠獲得高純度油菜花青素的從油菜中提取花青素的方法。
針對(duì)上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出了如下的技術(shù)方案：
1)將成熟油菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的油菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機(jī)中打成漿液，漿液用震動(dòng)篩粗濾并收集濾液，調(diào)節(jié)濾液的ph值為3.0-4.5；
2)按100g油菜∶0.002-0.003ml的比例向?yàn)V液中加入復(fù)合果膠酶進(jìn)行酶解澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；
3)將花青素清液上大孔吸附樹脂柱進(jìn)行花青素吸附，吸附完成后用乙醇溶液解吸花青素得洗脫液，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度油菜花青素。
所說的步驟1)調(diào)節(jié)濾液的ph值采用的是6mol/l的hcl。
所說的步驟2)的酶解溫度為45-50℃，酶解時(shí)間為60分鐘。
所說的步驟3)的大孔吸附樹脂的型號(hào)為lsa-21，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時(shí)，上柱溫度為20-50℃。
所說的步驟3)的吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇進(jìn)行解吸，且乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時(shí)，解吸溫度為20℃。
所說的步驟3)的真空濃縮的壓力為0.090-0.095mpa，溫度為40-45℃，冷凍溫度為-40℃-50℃，壓力為20-40pa，加熱板溫度：65-110℃，凍干時(shí)間為16-22小時(shí)。
本發(fā)明所提取的油菜花青素不僅純度高、色價(jià)高，色值穩(wěn)定，同時(shí)提高了油菜花青素的生物活性，采用本發(fā)明油菜純度達(dá)90％以上，且與乙醇有機(jī)溶劑提取的花青素相比，色價(jià)提高12.6倍。
樣品色價(jià)測(cè)定：
稱取0.1000g花青素粉末，以ph3.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液溶解，稀釋定容至100ml，測(cè)定吸光度a530值，按下式計(jì)算色價(jià)。
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a--530nm處吸光度值；
c-花青素溶液質(zhì)量百分?jǐn)?shù)(％)；
l-比色皿厚度(lcm)
【具體實(shí)施方式】
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1：
1)將成熟油菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的油菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機(jī)中打成漿液，漿液用震動(dòng)篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為3.0；
2)在50℃下按100g油菜∶0.002ml的比例向?yàn)V液中加入復(fù)合果膠酶在45℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；
3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進(jìn)行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時(shí)，上柱溫度為40℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時(shí)，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.095mpa，溫度為40℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度油菜花青素，冷凍溫度為-40℃，壓力為20pa，加熱板的溫度：110℃(7h)→100℃(1h)→95℃(1.5h)→85℃(3h)→75℃(至結(jié)束)，凍干時(shí)間為16小時(shí)。
實(shí)施例2：
1)將成熟油菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的油菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機(jī)中打成漿液，漿液用震動(dòng)篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為3.5；
2)在45℃下按100g油菜∶0.002ml的比例向?yàn)V液中加入復(fù)合果膠酶在50℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；
3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進(jìn)行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時(shí)，上柱溫度為20℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時(shí)，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.092mpa，溫度為43℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度油菜花青素，冷凍溫度為-40℃，壓力30pa，加入板溫度：105℃(7h)→95℃(1h)→85℃(1h)→75℃(3h)→65℃(至結(jié)束)，凍干時(shí)間為18小時(shí)。
實(shí)施例3：
1)將成熟油菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的油菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機(jī)中打成漿液，漿液用震動(dòng)篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為4.0；
2)在45℃下按100g油菜∶0.003ml的比例向?yàn)V液中加入復(fù)合果膠酶在48℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；
3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進(jìn)行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時(shí)，上柱溫度為50℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時(shí)，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.090mpa，溫度為45℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度油菜花青素，冷凍溫度為-50℃，壓力為40pa，加熱板的溫度100℃(7h)→90℃(1h)→80℃(2h)→70℃(3h)→65℃(至結(jié)束)，凍干時(shí)間為20小時(shí)。
實(shí)施例4：1)將成熟油菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的油菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機(jī)中打成漿液，漿液用震動(dòng)篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為4.5；
2)在50℃下按100g油菜∶0.003ml的比例向?yàn)V液中加入復(fù)合果膠酶在46℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；
3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進(jìn)行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時(shí)，上柱溫度為30℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時(shí)，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.095mpa，溫度為40℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度油菜花青素，冷凍溫度為-45℃，壓力為30pa，加熱板的溫度90℃(7h)→80℃(1h)→70℃(1h)→65℃(至結(jié)束)，凍干時(shí)間22小時(shí)。