【技術領域】

本發(fā)明涉及一種花青素分離純化方法，具體涉及一種以水為溶劑的娃娃菜花青素提取方法。

背景技術：

植物源花青素是重要天然功能性食品添加劑，廣泛應用于飲料、糖果、糕點、酒類及休閑食品等行業(yè)，而且也可用于醫(yī)療保健品及兒童食品等特殊食品的生產(chǎn)。天然植物花青素的研究與開發(fā)方興未艾，其中天然花青素功能成分分離、純化及其生物學活性研究已成為功能食品研究重要領域。

娃娃菜屬十字花科(cruciferae)蕓薹屬，又名卷心菜、包菜等，原產(chǎn)歐洲地中海地區(qū)。娃娃菜作為一種食用性蔬菜，在我國已有一百多年的種植歷史，大部分省區(qū)均有栽培，產(chǎn)量僅次于白包菜。由于娃娃菜具有耐寒，來源豐富，價格低廉，花青素含量高等優(yōu)點，因此，以娃娃菜為原料分離、純化花青素具有重要經(jīng)濟價值和良好的產(chǎn)業(yè)化前景。

從化學結(jié)構上講，娃娃菜花青素屬于花色苷類物質(zhì)，具有重要的生理活性功能?？茖W研究發(fā)現(xiàn)，花色苷類物質(zhì)可以清除體內(nèi)自由基，具有抗氧化、抗衰老、改善視力、抑制腫瘤等功能。娃娃菜花青素易溶于水，安全無毒，是一種新型天然花青素，可以作為重要功能性食品添加劑開發(fā)。然而，目前國內(nèi)外娃娃菜花青素僅限于采用有機溶劑提取，花青素的純度低。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術的缺點，提供了一種能夠獲得高純度娃娃菜花青素的娃娃菜花青素提取方法。

針對上述技術問題，本發(fā)明提出了如下的技術方案：

1)將成熟娃娃菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的娃娃菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機中打成漿液，漿液用震動篩粗濾并收集濾液，調(diào)節(jié)濾液的ph值為3.0-4.5；

2)按100g娃娃菜∶0.002-0.003ml的比例向濾液中加入復合果膠酶進行酶解澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；

3)將花青素清液上大孔吸附樹脂柱進行花青素吸附，吸附完成后用乙醇溶液解吸花青素得洗脫液，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度娃娃菜花青素。

所說的步驟1)調(diào)節(jié)濾液的ph值采用的是6mol/l的hcl。

所說的步驟2)的酶解溫度為45-50℃，酶解時間為60分鐘。

所說的步驟3)的大孔吸附樹脂的型號為lsa-21，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時，上柱溫度為20-50℃。

所說的步驟3)的吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇進行解吸，且乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時，解吸溫度為20℃。

所說的步驟3)的真空濃縮的壓力為0.090-0.095mpa，溫度為40-45℃，冷凍溫度為-40℃-50℃，壓力為20-40pa，加熱板溫度：65-110℃，凍干時間為16-22小時。

本發(fā)明所提取的娃娃菜花青素不僅純度高、色價高，色值穩(wěn)定，同時提高了娃娃菜花青素的生物活性，采用本發(fā)明娃娃菜純度達90％以上，且與乙醇有機溶劑提取的花青素相比，色價提高12.6倍。

樣品色價測定：

稱取0.1000g花青素粉末，以ph3.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液溶解，稀釋定容至100ml，測定吸光度a530值，按下式計算色價。

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a--530nm處吸光度值；

c-花青素溶液質(zhì)量百分數(shù)(％)；

l-比色皿厚度(lcm)

【具體實施方式】

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1：

1)將成熟娃娃菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的娃娃菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機中打成漿液，漿液用震動篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為3.0；

2)在50℃下按100g娃娃菜∶0.002ml的比例向濾液中加入復合果膠酶在45℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；

3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時，上柱溫度為40℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.095mpa，溫度為40℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度娃娃菜花青素，冷凍溫度為-40℃，壓力為20pa，加熱板的溫度：110℃(7h)→100℃(1h)→95℃(1.5h)→85℃(3h)→75℃(至結(jié)束)，凍干時間為16小時。

實施例2：

1)將成熟娃娃菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的娃娃菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機中打成漿液，漿液用震動篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為3.5；

2)在45℃下按100g娃娃菜∶0.002ml的比例向濾液中加入復合果膠酶在50℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；

3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時，上柱溫度為20℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.092mpa，溫度為43℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度娃娃菜花青素，冷凍溫度為-40℃，壓力30pa，加入板溫度：105℃(7h)→95℃(1h)→85℃(1h)→75℃(3h)→65℃(至結(jié)束)，凍干時間為18小時。

實施例3：

1)將成熟娃娃菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的娃娃菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機中打成漿液，漿液用震動篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為4.0；

2)在45℃下按100g娃娃菜∶0.003ml的比例向濾液中加入復合果膠酶在48℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；

3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時，上柱溫度為50℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.090mpa，溫度為45℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度娃娃菜花青素，冷凍溫度為-50℃，壓力為40pa，加熱板的溫度100℃(7h)→90℃(1h)→80℃(2h)→70℃(3h)→65℃(至結(jié)束)，凍干時間為20小時。

實施例4：1)將成熟娃娃菜經(jīng)清洗泥沙、去除根部、去除病蟲害及殘次包葉后切碎，將切碎的娃娃菜與水按1∶5的質(zhì)量比混合并置于打漿機中打成漿液，漿液用震動篩粗濾并收集濾液，采用6mol/l的hcl調(diào)節(jié)濾液的ph值為4.5；

2)在50℃下按100g娃娃菜∶0.003ml的比例向濾液中加入復合果膠酶在46℃酶解60分鐘并澄清，將酶解澄清后的濾液以4000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，離心后所得上清液即花青素清液；

3)將花青素清液上lsa-21大孔吸附樹脂柱進行花青素吸附，花青素清液上柱流速為1.0倍柱體積/小時，上柱溫度為30℃，吸附完成后用體積濃度為85％的乙醇解吸花青素得洗脫液，乙醇溶液上柱流速為1.5倍柱體積/小時，解吸溫度為20℃，將洗脫液真空濃縮并回收乙醇，真空濃縮的真空度為0.095mpa，溫度為40℃，濃縮后的洗脫液經(jīng)冷凍干燥即制得高純度娃娃菜花青素，冷凍溫度為-45℃，壓力為30pa，加熱板的溫度90℃(7h)→80℃(1h)→70℃(1h)→65℃(至結(jié)束)，凍干時間22小時。