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全血直接擴增核酸檢測葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性的方法與流程

文檔序號:12697941閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種全血直接擴增核酸檢測葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性的方法,其特征在于:包括取全血樣本為起始材料,加入核酸擴增反應(yīng)試劑,加入擴增目的基因引物,直接進行核酸擴增反應(yīng),測定擴增產(chǎn)物,擴增核酸反應(yīng)試劑為BR Taq聚合酶,所述基因引物的引物和探針序列如下:

用于MTHFR C677T型多態(tài)性位點檢測的引物:

MTHFR C677T-seq-F:5’-GCACTTGAAGGAGAAGGTGTCT-3’;

MTHFR C677T-seq-R:5’-TGTGTCAGCCTCAAAGAAAAGCT-3’;

2)用于MTHFR A1298C型多態(tài)性位點檢測的引物:

MTHFR A1298C-seq-F:5’-GGAGGAGCTGCTGAAGATGTG-3’;

MTHFR A1298C-seq-R:5’-CCCGAGAGGTAAAGAACAAAGACTT-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述BR Taq聚合酶位于緩沖液條件下,所述緩沖液的pH值為8.8,鉀離子濃度為95mmol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于:所述緩沖液為15mM Tris pH 8.8,95mM KCl,2.5mM MgCl2,0.029% Tween-20,2%DMSO。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于全血樣本為液體血液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于:液體血液中包括有抗凝劑,所述抗凝劑包括EDTA抗凝、肝素抗凝、檸檬酸鈉抗凝。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于核酸擴增反應(yīng)是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,包括下述具體步驟:

1)獲得含有抗凝劑的血液樣本;

2)每個PCR體系為30μL,包含10×BR Taq Buffer 3μL,BR Taq 0.2μL,血液樣品3μL,正向反向引物各1μL,dNTP 2.4μL,ddH2019.4μL;

3)將配置好的PCR體系放入PCR儀中,進行PCR反應(yīng);反應(yīng)條件為:

98℃3分鐘預(yù)變性;循環(huán)階段,98℃30秒變性,58℃30秒退火,72℃30秒延伸,40個循環(huán);

4)將PCR儀中反應(yīng)完成的產(chǎn)物直接送測序或進行DNA凝膠電泳后將目的片段切下送測序。

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