本發(fā)明涉及一種從中藥胡黃連中提取物分離胡黃連苷Ⅰ和胡黃連苷Ⅱ的方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

胡黃連為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，胡黃連為玄參科多年生草本植物胡黃連的干燥根莖，性寒味苦，有清熱、除濕、明目、補(bǔ)肝、益膽、殺蟲(chóng)的效用，主治癆熱咳嗽、濕熱瀉痢、小兒疳積、目赤等疾病?；瘜W(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜類、葫蘆素類、苯乙醇糖苷類和酚苷類，另外還含有極少量的甘露醇、胡黃連醇、胡黃連甾醇、香莢蘭乙酮及芳香酸等，其中胡黃連苷I（Picroside I）、胡黃連苷Ⅱ（Picroside Ⅱ）均屬于環(huán)烯醚萜苷類化合物。胡黃連苷I 和胡黃連苷Ⅱ均具有保肝降脂利膽作用和對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。據(jù)報(bào)道，胡黃連苷Ⅱ主要有保肝利膽、抗炎平喘、保護(hù)神經(jīng)、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用。

胡黃連苷I與胡黃連II極性相似，傳統(tǒng)提取方法很難將兩者分開(kāi)，目前的技術(shù)大多為柱層析方法，分離速度慢，效率低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)便的分離胡黃連苷I與胡黃連苷II的制備方法，本發(fā)明的技術(shù)方案：從胡黃連中提取分離純化胡黃連苷Ⅰ和胡黃連苷Ⅱ的制備工藝，具體方法如下：

（1）取西藏胡黃連藥材粉碎；

（2）制備胡黃連提取物：將干燥胡黃連藥材粉碎，超聲提取30-45min，提取溶劑為10-15倍量的75%-95%乙醇，提取液靜置5-10h過(guò)濾得胡黃連續(xù)濾液；

（3）除雜：胡黃連續(xù)濾液，回收溶劑，濃縮成胡黃連流浸膏，用聚酰胺吸附，干燥。上聚酰胺層析柱，用水洗聚酰胺柱，洗至近無(wú)色，并且molish 反應(yīng)陰性，用3-7 倍柱床體積的乙酸乙酯、甲醇、水、甲酸混合溶劑洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，濃縮至干，用乙醇溶解,得胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液；

（4）分離:在胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液中加入中性醋酸鉛沉淀劑與胡黃連苷II形成沉淀,過(guò)濾濃縮即得胡黃連苷I，將胡黃連苷II沉淀懸浮于水或稀醇中，通入硫化氫氣體，使鉛鹽分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛沉淀，胡黃連苷II游離在溶液中，過(guò)濾，沉淀用水洗，洗濾液合并，再濃縮即得胡黃連苷II；

上述分離胡黃連苷I和胡黃連苷II的制備工藝，所述的步驟（3）中乙酸乙酯、甲醇、水、甲酸混合溶劑的比例為：乙酸乙酯在溶劑中體積占比為40%-60%，甲醇在溶劑中體積占比為10-30%，水在溶劑中體積占比為15-35%，甲酸在溶劑中體積占比為3-7%；

上述混合溶劑優(yōu)選比例為：乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸=50：20：25：5；

前述分離胡黃連苷I和胡黃連苷II的制備工藝，所述的步驟（4）中所用的醋酸鉛為飽和中性醋酸鉛，飽和中性醋酸鉛的用量為胡黃連提取物中胡黃連苷I和胡黃連苷II總重量的0.1-0.15 倍。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

（1）取西藏胡黃連藥材50g粉碎；

（2）制備胡黃連提取物：超聲提取上述藥粉30min，提取溶劑為10倍量75%乙醇，提取液靜置8h過(guò)濾得胡黃連續(xù)濾液；

（3）除雜：胡黃連續(xù)濾液，80℃減壓回收溶劑，濃縮成流浸膏，用10g聚酰胺吸附，干燥。上聚酰胺層析柱，用水洗聚酰胺柱，洗至近無(wú)色，并且molish 反應(yīng)陰性，用4倍柱床體積的混合溶劑（乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸=40：23：30：7）洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，濃縮至干，用乙醇溶解,得胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液；

（4）分離:在胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液中加入0.7g中性醋酸鉛沉淀劑，慢加快攪，待8小時(shí)沉淀完全,過(guò)濾，濾液濃縮即得胡黃連苷I粗品2.3g，將沉淀懸浮于水中，通入硫化氫氣體，使鉛鹽分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛沉淀，胡黃連苷II游離在溶液中，過(guò)濾，沉淀用水洗，洗濾液合并，再濃縮即得胡黃連苷II粗品4.8g。

實(shí)施例2

（1）取西藏胡黃連藥材50g粉碎；

（2）制備胡黃連提取物：超聲提取上述藥粉45min，提取溶劑為15倍量的85%乙醇，提取液靜置5h過(guò)濾得胡黃連續(xù)濾液；

（3）除雜：胡黃連續(xù)濾液，60℃減壓回收溶劑，濃縮成流浸膏，用15g聚酰胺吸附，干燥。上聚酰胺層析柱，用水洗聚酰胺柱，洗至近無(wú)色，并且molish 反應(yīng)陰性，用7倍柱床體積的混合溶劑（乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸=60：22：15：3）洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，濃縮至干，用乙醇溶解,得胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液；

（4）分離:在胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液中加入0.7g中性醋酸鉛沉淀劑，慢加快攪，待8小時(shí)沉淀完全,過(guò)濾，濾液濃縮即得胡黃連苷I粗品2.2g，將沉淀懸浮于水中，通入硫化氫氣體，使鉛鹽分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛沉淀，胡黃連苷II游離在溶液中，過(guò)濾，沉淀用水洗，洗濾液合并，再濃縮即得胡黃連苷II粗品4.6g。

實(shí)施例3

（1）取西藏胡黃連藥材50g粉碎；

（2）制備胡黃連提取物：超聲提取上述藥粉40min，提取溶劑為12倍量的90%乙醇，提取液靜置10h過(guò)濾得胡黃連續(xù)濾液；

（3）除雜：胡黃連續(xù)濾液，70℃減壓回收溶劑，濃縮成流浸膏，用20g聚酰胺吸附，干燥。上聚酰胺層析柱，用水洗聚酰胺柱，洗至近無(wú)色，并且molish 反應(yīng)陰性，用5倍柱床體積的混合溶劑（乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸=40：30：23：7）洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，濃縮至干，用乙醇溶解,得胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液；

（4）分離:在胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液中加入0.7g中性醋酸鉛沉淀劑，慢加快攪，待8小時(shí)沉淀完全,過(guò)濾，濾液濃縮即得胡黃連苷I粗品2.0g，將沉淀懸浮于水中，通入硫化氫氣體，使鉛鹽分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛沉淀，胡黃連苷II游離在溶液中，過(guò)濾，沉淀用水洗，洗濾液合并，再濃縮即得胡黃連苷II粗品4.4g。

實(shí)施例4

（1）取西藏胡黃連藥材50kg粉碎；

（2）制備胡黃連提取物：超聲提取上述50kg胡黃連藥粉35min，提取溶劑為10倍量的95%乙醇，提取液靜置8h過(guò)濾得胡黃連續(xù)濾液；

（3）除雜：胡黃連續(xù)濾液，60℃減壓回收溶劑，濃縮成流浸膏，用10kg聚酰胺吸附，干燥。上聚酰胺層析柱，用水洗聚酰胺柱，洗至近無(wú)色，并且molish 反應(yīng)陰性，用7倍柱床體積的混合溶劑（乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸=60：22：15：3）洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，濃縮至干，用乙醇溶解,得胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液；

（4）分離:在胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液中加入900g中性醋酸鉛沉淀劑，慢加快攪，待8小時(shí)沉淀完全,過(guò)濾，濾液濃縮即得胡黃連苷I粗品2000g，將沉淀懸浮于水中，通入硫化氫氣體，使鉛鹽分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛沉淀，胡黃連苷II游離在溶液中，過(guò)濾，沉淀用水洗，洗濾液合并，再濃縮即得胡黃連苷II粗品4000g。

實(shí)施例5

（1）取西藏胡黃連藥材150kg粉碎；

（2）制備胡黃連提取物：超聲提取上述150kg胡黃連藥粉40min，提取溶劑為10倍量的75%乙醇，提取液靜置5h過(guò)濾得胡黃連續(xù)濾液；

（3）除雜：胡黃連續(xù)濾液，60℃減壓回收溶劑，濃縮成流浸膏，用30kg聚酰胺吸附，干燥。上聚酰胺層析柱，用水洗聚酰胺柱，洗至近無(wú)色，并且molish 反應(yīng)陰性，用3倍柱床體積的混合溶劑（乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸=50：20：25：5）洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，濃縮至干，用乙醇溶解,得胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液；

（4）分離:在胡黃連苷I與胡黃連苷II混合液中加入1800g中性醋酸鉛沉淀劑，慢加快攪，待5小時(shí)沉淀完全,過(guò)濾，濾液濃縮即得胡黃連苷I粗品5700g，將沉淀懸浮于水中，通入硫化氫氣體，使鉛鹽分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛沉淀，胡黃連苷II游離在溶液中，過(guò)濾，沉淀用水洗，洗濾液合并，再濃縮即得胡黃連苷II粗品11900g。